目的:建立基于圆盘式（CD）微流控芯片的CALR基因突变的快速检测方法，初步评价其用于脑梗死患者CALR-1和CALR-2基因突变检测的应用价值。方法:基于微流控技术和环介导等温扩增（LAMP）技术建立一个用于CALR-1和CALR-2基因突变同步检测的CD微流控芯片检测平台，并验证该平台检测的灵敏度、特异性、重复性和准确性。前瞻性选取2019年11月至2021年3月复旦大学附属华山医院收治的124例脑梗死患者为脑梗死组，80名健康体检者为对照组。用CD微流控芯片法检测抗凝外周全血样本中的CALR-1和CALR-2基因突变情况，每块芯片同时检测4个样本，同步检测每个样本的3个指标，等温扩增40 min后读取结果。同时采用测序法对检测结果进行验证，比较2种检测结果的一致性。结果:采用CD微流控芯片平台，无需热循环，40 min即可完成样本中3个指标的同步扩增，样本的整个检测过程在60 min内完成。对核酸靶标浓度较高的样本，扩增10 min即可出现阳性信号，收到样本后30 min内报告检测结果。CD微流控芯片法针对CALR-1和CALR-2的检测灵敏度分别为1.0%和0.5%突变负荷浓度，对于其非靶标的核酸样本均未发生任何非特异性扩增，特异性良好，批内重复性和批间重复性的符合率均为100%（20/20）。在脑梗死组中发现2例CALR基因突变，且均为CALR-1突变（L367fs*46），对照组中未发现CALR-1和CALR-2基因突变。CD微流控芯片法与测序法结果一致率为100%（204/204）。结论:CD微流控芯片法用于检测脑梗死患者样本中CALR-1和CALR-2突变具有灵敏度高、特异性好、检测速度快和检测通量高等优势，有助于明确脑梗死患者的病因。

心血管疾病严重威胁人类健康，已成为全球首要死因，早诊早治意义重大。微流控技术因其微型化、集成化、易操作等特点为心血管疾病标志物的快速、多靶标检测提供可选方案，极大的推动了心血管疾病的快速诊断。本文阐述微流控技术在心血管疾病诊断及预防中的研究进展，分析其在蛋白质类、脂质类、核酸类生物标志物快速检测中的优势与不足，以期为推动心血管疾病快速检测技术发展提供参考，为心血管疾病的早期防治提供新思考。

快速精确诊断技术对于流行病预防和监控至关重要，基于介电润湿的数字微流控技术通过微量、灵活、高精度及并行性检测等优势，显著提升了其在疾病预防和个性化诊断方面的效率。本文阐述了介电润湿原理的数字微流控芯片工作原理，详细介绍了其在核酸、蛋白质及细胞检测等方面的最新研究进展，并对商业化的介电润湿数字微流控技术进行了简要梳理，最后讨论了该技术所面临的挑战以及未来发展方向。

目的:结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)、登革病毒(dengue virus，DENV)、黄热病毒(yellow fever virus，YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)的快速核酸检测方法，以实现这4种病毒感染的快速诊断。方法:以ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因以及CHIKV的E1基因作为靶序列设计4组特异性引物探针；用体外转录RNA评价方法的灵敏性；用其他病毒核酸评价方法的特异性；ZIKV、YFV、CHIKV检测方法采用模拟阳性样本，DENV检测方法采用临床患者标本进行验证，并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果:ZIKV、DENV、YFV、CHIKV4种方法的最低检出限分别是14.57拷贝/μl、94.27拷贝/μl、8.25拷贝/μl、223.19拷贝/μl；4种检测方法与其他病毒核酸无交叉反应；ZIKV、YFV、CHIKV模拟阳性样本检出率为100%，各浓度检测 Ct值的变异系数均在2%左右；20份DENV临床患者标本检出率为100%，与传统荧光定量RT-PCR检测方法结果一致。 结论:本研究建立的ZIKV、DENV、YFV、CHIKV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性、稳定性，25 min内即可完成1次检测，可适用于现场实验室检测与早期诊断。

目的 建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法.方法 根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GW-Amp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组.制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组.用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性.评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较.用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1 000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测.对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测.结果 引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组.CprMG2引物组可检测浓度低至10-6ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3 × 103拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/pl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝.最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应.LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3 × 103拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3 × 104拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×103拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3 × 103拷贝、1拷贝)相当.LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1 000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100％.LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性.结论 建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测.

食源性病原菌广泛存在于自然环境中,可通过肉类、海产品、奶制品等多种媒介传播,引起食源性疾病的发生.目前检测食源性病原菌的方法主要以平板培养辅以生化鉴定和血清型鉴定为主,检测的周期较长,效率较低,因此建立快速、精准的食源性病原菌检测方法对常见病原菌的现场检测及疾病的快速诊断尤为重要.本文对近年来常见食源性病原菌的快速检测方法进行了概述,主要包括免疫学检测手段、分子生物学检测方法和生物传感器检测技术,比较其优缺点,着重介绍了可以实现现场检测与实时检测的新兴技术:核酸-微流控检测技术,以期为常见食源性病原菌的预防与检测提供相关理论参考.

介绍了微流控技术的检测原理,综述了基于微流控平台的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)、数字 PCR、等温扩增、成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白等技术应用于的SARS-CoV-2核酸检测的研究现状,分析了基于微流控平台的SARS-CoV-2核酸检测的局限性,指出了基于微流控的SARS-CoV-2核酸检测系统在特异度、敏感度、检测限、重复性、信息化、质量控制及试剂成本等方面仍需要进一步的优化改进和临床验证.

基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的微流控芯片是一种新型核酸检测方法.该方法能够将核酸提取、等温扩增和反应结果集成在厘米级的芯片上,具有灵敏度高、特异性强、不易污染等特点,并且可以实现"样品-答案"的快速检测,已成为当前检测领域的研究热点.综述LAMP的反应原理、微流控芯片的种类、LAMP微流控芯片在病原微生物和肿瘤检测中的应用,并分析LAMP微流控芯片目前存在的问题及未来发展前景,以进一步拓展对新型检测技术的认识,加快其在现场快速检测中的推广和应用.

随着微型铸造技术的不断发展,近两年来微流控(Microfluidics)集成诊断技术逐步成熟并逐渐应用到医学生命科学领域.微流控是将样品分析从前处理到反应再到结果检测等一系列连续操作过程整合到一个微型芯片上,从而实现全分析过程自动化的一项技术[1].环介导等温扩增( Loop - Mediated Isothermal Amplifica-tion,LAMP)技术是 Notomi 等[2]于 2000 年报道的一种新型等温核酸扩增方法.

感染性疾病病原诊断在抗菌药物合理应用,疾病流行病学监测和管理以及控制传播等方面发挥着核心作用.理想的感染病现场快速检验方法应具有敏感、快速、特异、稳定、低成本和便于使用的特点.本文概览了POCT在感染病抗原检测、抗体检测、核酸检测等方面的临床应用状况,并重点介绍了微流控技术在病原体多重核酸检测和耐药性检测等方面的优势和潜力.选择合适的时间、合适的场所、正确应用现场快速诊断技术,将为分级诊疗模式下的感染病诊治提供新的策略.