目的:从福建省2016年输入性黄热病病例标本中分离黄热病毒(YFV)并分析其生物学特征。方法:将16份黄热病毒核酸阳性血清、尿液、唾液样品分别接种C6/36细胞，YFV实时荧光RT-PCR法鉴定检测培养物中特异性病毒核酸，通过高通量测序获得病毒全基因序列并绘制系统进化树。结果:从1例患者发病后3天的血清样品分离到一株病毒，通过YFV实时荧光RT-PCR鉴定为YFV病毒；BLAST分析显示该毒株全基因序列与2016年我国首例输入性黄热病病例中分离得到的毒株CNYF01R/2016(KX268355)序列完全一致；系统进化树显示该毒株与1971年安哥拉流行株Angola71分属同一进化树分支，与疫苗株17D vaccine strain(X03700)存在明显的差异，表明本研究分离到的YFV毒株是属于安哥拉型YFV野毒株。结论:福建省成功从2016年输入性黄热病病例样品分离到一株安哥拉型YFV毒株。

目的:建立可检测杜贝病毒（dugbe virus，DUGV）、盖勒尤卜病毒（qalyub virus，QALV）和蒂亚福拉病毒（thiafora virus，TFAV）等三种内罗病毒基因组的实时荧光RT-PCR检测方法。方法:收集、整理，比对、分析在公共数据库发布的三种病毒基因组S节段核苷酸序列，确定检测靶标，利用生物信息软件设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果:所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒靶标RNA，检测限分别为160 copies/μL，20 copies/μL和10 copies/μL，检测科萨努尔森林病病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，三种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性分析显示变异系数均在2%以内。结论:本研究建立的检测DUGV、QALV和TFAV的实时荧光RT-PCR方法，可用于相关临床样本、媒介、宿主动物标本以及进出口物品筛查检测。

目的:建立登革病毒(dengue virus, DENV)、黄热病毒(yellow fever virus, YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus, CHIKV)核酸的三重实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测方法。方法:通过全球共享数据库下载DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV全基因组序列进行比对分析，针对这3种病毒的相对保守区域分别设计特异性引物和探针，建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法，以其他病毒核酸评价方法的特异性，用病毒体外转录RNA评价方法的灵敏度，以病毒高、中、低浓度核酸进行独立重复实验评价方法的重复性。DENV采用登革热患者血清进行验证，YFV、CHIKV采用模拟阳性标本进行验证，采用健康人血清进行阴性验证。结果:本方法与其他病毒核酸无交叉反应；对DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV的最低检出限分别为21.55拷贝/反应、21.25拷贝/反应、21.85拷贝/反应、22.75拷贝/反应、22拷贝/反应、45.65拷贝/反应；各浓度检测 Ct值的标准差在0.5以内、变异系数在3%以下；临床阳性标本及模拟阳性标本的检出率为100%，健康人血清的阴性率为100%。 结论:本研究建立的DENV、YFV和CHIKV的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。

目的:建立可以检测阿瓦朗病毒(Avalon virus，AVAV)和休斯病毒(Hughes virus，HUGV)两种内罗病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法，并进行初步的评价。方法:收集、整理、比对、分析在公共数据库发布的两种病毒基因组核苷酸序列，确定检测靶标，设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果:所建实时荧光定量RT-PCR检测方法可有效扩增检测AVAV和HUGA靶标RNA，检测限分别约为20拷贝/μl和70拷贝/μl，检测科萨努尔森林病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、发热伴血小板减少综合征、内罗毕羊病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，两种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性比较分析显示变异系数小于2%。结论:本研究建立的检测AVAV和HUGV的实时荧光定量RT-PCR方法，可用于临床样本检测和媒介生物、宿主动物标本筛查，便于病原的快速识别和疾病诊断。

目的:基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification，RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测，建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法:以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus，YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)为检测对象，设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)，建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应，评价方法的灵敏度和特异性，使用登革热疑似临床样本进行检测，并与荧光RT-PCR技术进行比较，同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果:RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下，40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体，灵敏度达到1~10拷贝/μl，并且这8种病原体之间无交叉反应，临床样本均可100%检测出。结论:建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。

母乳是婴儿的最佳食物，但母亲存在感染时，因担心母乳喂养可将病原体传给子代，造成母乳喂养困惑，甚至不必要地放弃母乳喂养。围产医学专家组根据病原体母婴传播的研究进展，对母亲常见感染时能否母乳喂养达成以下共识：（1）母亲肝炎病毒感染，包括甲型、乙型、丙型和戊型肝炎，均建议母乳喂养；（2）母亲巨细胞病毒感染，足月儿和晚期早产儿（出生胎龄≥32周或出生体重≥1 500 g）建议母乳喂养；早期早产儿（出生胎龄<32周或出生体重<1 500 g）建议母乳经消毒后喂养，待校正胎龄≥32周或体重≥1 500 g时直接哺乳；（3）其他各种疱疹病毒感染时，除乳房感染外，均可直接哺乳；（4）流感或新型冠状病毒感染，母乳挤出后由他人间接哺乳，乳汁无需消毒；（5）HIV感染时，尽可能放弃母乳喂养，采取完全人工喂养，禁忌混合喂养；（6）母亲存在结核菌、梅毒螺旋体、钩端螺旋体、弓形虫或疟原虫感染时，经规范治疗后均可以直接哺乳，治疗前和治疗期间的母乳经巴氏消毒后可哺乳；（7）除黄热病毒疫苗母乳喂养可能引起子代感染外，母亲哺乳期接种所有灭活疫苗和减毒活疫苗，对子代无不良影响；（8）婴儿母乳喂养期间，可接种任何疫苗；（9）尽管巴氏消毒能部分破坏母乳的营养和活性成分，但对子代的益处仍优于配方奶。

目的:确认湖南省首起输入性基孔肯雅热(Chikungunya fever, CHIK)疫情。方法:采集病例和同行人员的血清标本，采用实时荧光定量PCR方法进行登革病毒(Dengue virus, DENV)、黄热病毒(Yellow fever virus, YFV)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus, CHIKV)核酸检测，对核酸检测阳性病毒标本进行基因序列测定，对测序结果进行生物信息学分析，构建系统进化树。结果:病例血清标本CHIKV核酸阳性，5名同行人员中有1人血清标本CHIKV核酸阳性。基因序列Blast比对显示与CHIKV序列同源性>99%。系统进化树显示感染CHIKV属于ECSA基因型。结论:通过流行病学调查和病原学检测，确定了湖南省首起输入性CHIK疫情。

目的:结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)、登革病毒(dengue virus，DENV)、黄热病毒(yellow fever virus，YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)的快速核酸检测方法，以实现这4种病毒感染的快速诊断。方法:以ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因以及CHIKV的E1基因作为靶序列设计4组特异性引物探针；用体外转录RNA评价方法的灵敏性；用其他病毒核酸评价方法的特异性；ZIKV、YFV、CHIKV检测方法采用模拟阳性样本，DENV检测方法采用临床患者标本进行验证，并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果:ZIKV、DENV、YFV、CHIKV4种方法的最低检出限分别是14.57拷贝/μl、94.27拷贝/μl、8.25拷贝/μl、223.19拷贝/μl；4种检测方法与其他病毒核酸无交叉反应；ZIKV、YFV、CHIKV模拟阳性样本检出率为100%，各浓度检测 Ct值的变异系数均在2%左右；20份DENV临床患者标本检出率为100%，与传统荧光定量RT-PCR检测方法结果一致。 结论:本研究建立的ZIKV、DENV、YFV、CHIKV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性、稳定性，25 min内即可完成1次检测，可适用于现场实验室检测与早期诊断。

目的:基于Au@Ag NPs的SERS侧流免疫层析(LFIA)建立一种快速、高灵敏定量检测人腺病毒(HAdV)的方法。方法:首先合成出双层拉曼分子5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (DTNB)修饰的Au@Ag NPs，再结合HAdV特异性抗体得到SERS探针，基于抗原-抗体的特异性反应在免疫层析条检测线处形成"三明治"免疫复合结构，通过收集并分析检测线上的SERS信号，可以实现对HAdV抗原的快速检测。其次，分别对该检测方法的灵敏度、重复性和特异性进行评价。结果:基于双层DTNB修饰的Au@Ag NPs SERS-LFIA可在15 min内对HAdV实现定性/定量检测，其可视化检测结果为10 ng/ml，最低检出限达0.1 ng/ml，定量范围为0.1 ng/ml~1 000 ng/ml。此SERS免疫层析方法对HAdV的检测具有良好的重复性和特异性，与登革热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒和埃博拉病毒五种新突发传染性病毒均无交叉反应。结论:该研究提出的基于Au/DTNB@Ag/DTNB NPs的SERS-LFIA可以实现对HAdV的快速和高灵敏检测，在HAdV的现场即时检测领域具有巨大潜力。

目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay，FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法，验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1，NS1)重组体系，以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体，建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析，对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗，分析其应用于生产的可行性。结果:所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应，与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应；FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求；与蚀斑法比较，FFA检测结果更趋一致。结论:本研究建立的FFA通过方法学验证，可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。