目的:评价毛兰素对骨癌痛（bone cancer pain, BCP）大鼠的镇痛效应及其与脊髓星形胶质细胞和炎症反应的关系。方法:SPF级成年雌性SD大鼠50只，采用随机数字表法分为5组（每组10例）：假手术组（Sham组）、骨癌痛组（BCP组）、骨癌痛+生理盐水组（BCP+NS组）、骨癌痛+毛兰素低剂量组[BCP+erianin（L）组]、骨癌痛+毛兰素高剂量组[BCP+erianin（H）组]。通过大鼠右后肢胫骨骨髓腔注射10 μl Walker256乳腺癌细胞混悬液（约4×10 4个）的方法构建大鼠BCP模型，Sham组注射等体积煮沸灭活的乳腺癌细胞悬液。于造模开始后第6天至第21天，每天1次，BCP+erianin（L）组和BCP+erianin（H）组腹腔注射毛兰素，BCP+NS组腹腔注射生理盐水，Sham组和BCP组不进行腹腔注射。分别于术前1 d和术后1、3、6、9、12、15、18、21 d测定机械刺激缩足反射阈值（paw mechanical withdrawal threshold, PMWT）和热刺激缩足反射潜伏期（paw withdraw thermal latency, PWTL）。于术后21 d痛行为学评估结束后处死大鼠取胫骨和脊髓组织，H-E染色检测胫骨肿瘤细胞浸润情况，采用Western blot法和免疫荧光法测定脊髓星形胶质细胞特异性标记物神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）水平，ELISA法测定脊髓促炎症细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）水平变化。 结果:与Sham组比较：BCP组大鼠术侧胫骨H-E染色显示骨髓腔内充满肿瘤细胞，术侧后肢于术后6、9、12、15、18、21 d PMWT和PWTL降低（ P<0.05），对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义（ P>0.05）；术后21 d BCP组大鼠脊髓GFAP水平和TNF-α、IL-6、IL-1β水平增加（ P<0.05）。与BCP+NS组比较：BCP+erianin（L）组、BCP+erianin（H）组大鼠术侧后肢术后9、12、15、18、21 d PMWT和PWTL均升高（ P<0.05），对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义（ P>0.05）；术后21 d大鼠脊髓GFAP和TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低（ P<0.05）。与BCP+erianin（L）组比较：BCP+erianin（H）组大鼠术侧后肢术后12、15、18、21 d PMWT和术后9、12、15、18、21 d PWTL均升高（ P<0.05），对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义（ P>0.05）；术后21 d大鼠脊髓GFAP和TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低（ P<0.05）。 结论:毛兰素可缓解大鼠BCP，其机制可能与抑制脊髓星形胶质细胞活化，减轻炎症反应有关。

目的 探究毛兰素(ERI)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制.方法 通过皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为PCOS组,ERI低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)和ERI高剂量+维替泊芬组(40 mg/kg ERI+10 mg/kg维替泊芬),每组10只;另取10只正常大鼠作为正常组.各给药组大鼠灌胃相应剂量的ERI和/或腹腔注射维替泊芬,PCOS组和正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜,每日1次,连续6周.给药结束后,检测各组大鼠体重和空腹血糖(FPG),血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,观察卵巢组织形态学变化,分析卵巢组织细胞凋亡情况,检测卵巢组织中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]和Hippo-YAP信号通路相关蛋白[大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、磷酸化LATS1(p-LATS1)、Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化YAP(p-YAP)、转录共激活子因子PDZ结合基序(TAZ)]表达水平.结果 与PCOS组比较,ERI低、中、高剂量组大鼠卵巢多囊特征减轻,闭锁卵泡数量减少,颗粒细胞层增厚,体重、FPG水平、T水平、LH水平、LH/FSH、囊性卵泡数量、细胞凋亡指数和Bax、Caspase-3、p-LATS1、p-YAP蛋白表达水平均显著降低或减少(P＜0.05),黄体数量、E2水平和Bcl-2、LATS1、YAP、TAZ蛋白表达水平均显著升高或增多(P＜0.05).与ERI高剂量组比较,ERI高剂量+维替泊芬组大鼠的上述指标变化均被抑制(P＜0.05).结论 ERI能促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,调节性激素水平,其作用机制可能与抑制Hippo-YAP信号通路有关.

目的 探讨毛兰素调节CC趋化因子配体2(CCL2)/CC趋化因子受体2(CCR2)轴对关节软骨细胞炎性损伤的影响.方法 将人关节软骨细胞分为control组(正常培养)、LPS组、毛兰素低(10 nmol/L)、中(25 nmol/L)、高(50 nmol/L)剂量组、pcDNA 组(转染 pcDNA3.1)、pcDNA-CCL2 组(转染 pcDNA3.1-CCL2),实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测细胞中 CCL2、CCR2 mRNA表达水平;MTT法、平板克隆实验与流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;qRT-PCR和ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平;Western blot法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞抗凋亡因子B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及CCL2/CCR2通路蛋白表达.结果 与control组比较,LPS组细胞凋亡率、IL-6、IL-lβ、TNF-α mRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平显著升高,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05);与LPS组比较,毛兰素低、中、高剂量组细胞凋亡率、IL-6、1L-iβ、TNF-α mRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平逐渐降低,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.05);过表达CCL2减弱了毛兰素对LPS诱导的关节软骨细胞的影响(P＜0.05).结论 毛兰素可抑制LPS诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症反应,其机制可能与抑制CCL2/CCR2通路有关.

毛兰素是从中草药鼓槌石斛中提取的低分子量天然化合物,具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗血管生成等作用,细胞毒性较低且生物相容性良好,有望成为新的抗肿瘤药物之一.毛兰素可抑制多种肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡等,其抗肿瘤活性与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路、上皮细胞-间充质转化通路和活性氧/c-Jun氨基末端激酶通路等多个信号通路密切相关.现已证实毛兰素对消化道恶性肿瘤、妇科恶性肿瘤、肺癌、前列腺癌和鼻咽癌等有抗肿瘤活性作用.本文就毛兰素治疗恶性肿瘤的研究进展作一综述,阐述毛兰素抗肿瘤活性的分子机制,探究毛兰素对恶性肿瘤的潜在治疗价值,以期为毛兰素及其衍生物在肿瘤诊治中的应用提供参考.

目的 探讨毛兰素对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成的影响及slit同源蛋白2(Slit2)/轴突导向受体蛋白1(Robo1)信号通路的作用.方法 采用高糖高脂饲料持续饲养雄性SD大鼠8周,ip给予链脲佐菌素35 mg·kg-1制备DN大鼠模型.将DN模型大鼠分为模型组及模型+毛兰素10,20和40 mg·kg-1组(ig给予毛兰素,持续8周),每组10只,同时设置正常对照组(ig给予0.5%羟甲基纤维素钠,持续8周).尿蛋白定量试剂盒测定大鼠24h尿蛋白水平,全自动生化分析仪检测血清空腹血糖(FPG)和血肌酐(Scr)水平,PAS染色观察大鼠肾组织病理变化,免疫荧光法检测肾组织血小板内皮细胞黏附分子31(CD31)和足细胞标志蛋白(PCX)表达水平,Western印迹法检测肾组织Slit2和Robo1蛋白表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠FPG、Scr和24h尿蛋白水平以及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著升高(P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管,并出现肾小球肥大和系膜面积扩张,存在非管状CD31染色,缺少相邻PCX染色,以及部分CD31管状区域染色也缺乏相邻的PCX染色.与模型组比较,模型+毛兰素10,20和40 mg·kg-1组大鼠FPG、Scr和24h尿蛋白水平及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管、肾小球肥大和系膜面积扩张现象减轻,CD31管状区域染色与PCX足细胞区域染色基本相邻.结论 毛兰素可能通过抑制Slit2/Robo1信号通路而抑制DN模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成.

目的:探讨毛兰素对食管癌(EC)细胞恶性进展的影响及其作用机制.方法:收集 2021年3 月至2022 年12 月期间在本院根治手术治疗EC患者(40 例)的癌组织及距离癌组织3cm处的癌旁组织;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测EC组织及细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平;以不同浓度的毛兰素(0、10、20、40、60、80、160nmoL/L)干预ECA109 细胞48h,MTT法检测细胞增殖,筛选最佳干预浓度;将ECA109 细胞分为control组(正常培养)、毛兰素低、中、高剂量组(20、40、60nmoL/L)、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA-CCL2 组(转染pcDNA3.1-CCL2),MTT法、平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡;ECA109 细胞和CD8+T细胞共培养后,分为T细胞组、共培养组、毛兰素组、pcDNA组、pcDNA-CCL2 组,MTT、流式细胞仪检测CD8+ T细胞增殖、凋亡,酶联免疫吸附(ELISA)法检测CD8+T细胞上清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2 相关蛋白(Bax)、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2 信号通路蛋白表达.结果:在EC 组织和EC 细胞中CCL2、CCR2 蛋白及 mRNA 表达水平升高(P<0.05);与 control 组比较,毛兰素低、中、高剂量组ECA109 细胞中OD490 值、集落形成数、迁移与侵袭细胞数、CCL2、CCR2 mRNA 及 PCNA、PD-L1、CCL2、CCR2 蛋白表达水平显著降低,凋亡率、Bax 蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与 pcDNA 组比较,pcD-NA-CCL2 组ECA109 细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05);与T细胞组比较,共培养组CD8+T细胞OD490 值、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低,细胞凋亡率增加(P<0.05);与共培养组比较,毛兰素组CD8+T细胞OD490 值、IFN-γ、IL-2、TNF-α 水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与 pcDNA 组比较,pcDNA-CCL2 组CD8+T细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05).结论:毛兰素可能通过抑制 CCL2-CCR2 信号通路,抑制EC细胞的恶性进展.

目的 采用HPLC-Q-TOF-MS技术对益气生津袋泡茶的主要化学成分及入血成分进行鉴定.方法 6 只8 周龄SPF级雄性SD大鼠,体重 280～300 g,采用随机数字表法分为给药组与空白组,每组 3只.给药组灌胃 4ml益气生津袋泡茶水提物(生药浓度为 1 g/ml),空白组灌胃 4ml生理盐水,2次/d,连续给药,第 4天上午给药 2h后腹主动脉取血制备血清样品.采用Waters Xselect HSS T3 C18 色谱柱(50 mm×2.1 mm,2.5 μm),正、负离子模式下采集袋泡茶水提物与血清样品中的化学成分;以 0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱.结果 从益气生津袋泡茶水提物中鉴定出了17个化学成分,主要为人参皂苷类成分.同时,在血清样品中检测到了 8个化学成分,分别为甜菜碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、哈巴俄苷、拟人参皂苷F11、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、毛兰素.结论 采用HPLC-Q-TOF-MS技术对益气生津袋泡茶中主要化学成分及入血成分进行定性分析有助于揭示益气生津袋泡茶的药效物质基础,为进一步的质量控制、药理学和活性机制研究提供参考.

目的 探究毛兰素(ERI)防治心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用和机制.方法 将SD大鼠分为假手术组(n = 18)、模型组(n =18)、5 mg ERI组(n =17)、10 mg ERI组(n =16)和20 mg ERI组(n =17).假手术组和模型组大鼠灌胃 1%二甲基亚砜,5 mg ERI组、10 mg ERI组和20 mg ERI组大鼠分别灌胃剂量为5,10,20 mg/(kg·d)的毛兰素,给药7d后模型组和各ERI组大鼠进行MIRI建模.再灌注48h后检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)和左室缩短分数(LVFS).然后检测大鼠血清心肌损伤标志物[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平,并对大鼠心肌组织进行TTC染色和苏木精-伊红(HE)染色.RT-qPCR检测心肌组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体 3(NLRP3)、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β和 IL-18 mRNA 水平.Western blot检测心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18 蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠的LVEF和LVFS降低(P＜0.05),LVIDd和LVIDs升高(P＜0.05),血清CK-MB、LDH和cTnI水平升高(P＜0.05),心肌梗死面积升高(P＜0.05),心肌明显损伤,心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18 的mRNA表达水平升高(P＜0.05),心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18 蛋白表达水平升高(P＜0.05).与模型组比较,5 mg ERI组、10 mg ERI组和20 mg ERI组大鼠的LVEF和LVFS升高(P＜0.05),LVIDd和LVIDs降低(P＜0.05),血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低(P＜0.05),心肌梗死面积降低(P＜0.05),心肌形态明显改善,心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18 的mRNA表达水平降低(P＜0.05),心肌组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18 蛋白表达水平降低(P＜0.05);且毛兰素对上述指标的影响均呈现剂量依赖性(P＜0.05).结论 毛兰素预处理可改善MIRI大鼠的心功能并减轻心肌损伤,毛兰素可能通过抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡防治MIRI.

目的:基于Hedgehog信号通路探讨石斛提取物毛兰素(erianin,ER)抑制结直肠癌HT29细胞上皮间质转化(EMT)和血管生成的作用机制.方法:将HT29细胞分为空白对照组、ER-L(25 μg/mL)组、ER-M(50 μg/mL)组、ER-H(75 μg/mL)组、ER-H(75 μg/mL)+PM(Hedgehog通路激活剂,1.5 μmol/L)组.MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达.结果:HT29细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低(P<0.05);与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白(N-cadherin、vimentin)、血管生成相关蛋白(VEGF、VE-cadherin)及Hedgehog通路相关蛋白(SHH、GLI1、SMO、c-Myc)表达均显著下降(均P<0.05),上皮标志蛋白(E-cadherin)、Hedgehog通路中融合蛋白抑制剂(SUFU)蛋白表达均显著上升(均P<0.05);PM处理在一定程度上逆转了ER对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用(均P<0.05).结论:ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关.

目的 基于网络药理学探讨及比较金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.和霍山石斛D.huoshanense活性成分治疗阿尔茨海默病的作用机制.方法 基于中国知网、万方和PubMed数据库收集金钗石斛、霍山石斛的有效成分;PubChem平台查询活性成分结构;SwissADME平台筛选金钗石斛、霍山石斛活性成分的靶点;SwissTartgetPrediction平台预测各活性成分的作用靶点;GeneCards和OMIM数据库检索阿尔茨海默病相关靶点;Cytoscape 3.9.1 构建"活性成分-疾病-靶点"网络图;String数据库分析并构建药物与疾病的蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Metascape进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 共获得金钗石斛有效成分 84 个,核心成分为crepidatin、N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium、3-O-methylgigantol等;霍山石斛有效成分 56 个,核心成分为erianin、dendrocrepine、dendrocandin U等;金钗石斛和霍山石斛映射疾病靶点分别为 255、243 个,共同靶点 208 个,核心靶点为蛋白激酶B(Akt)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白蛋白(ALB)等;GO功能和KEGG富集分析结果显示,金钗石斛、霍山石斛治疗阿尔茨海默病的共同作用部位主要在树突;主要通路为磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)-Akt 信号通路、神经退行性变的途径-多种疾病、阿尔茨海默病通路等.此外,金钗石斛可作用于神经元细胞体,调节Toll样受体信号通路;霍山石斛可作用于轴突,调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路.结论 金钗石斛与霍山石斛都可能通过不同成分和不同通路治疗阿尔茨海默病.