目的:探讨金钗石斛总生物碱对犬体外循环（CPB）过程中缺血再灌注心肌脂代谢的影响及其可能机制。方法:健康成年中华田园犬24只，雌雄各半，体重（11.2±1.5）kg，随机分为假手术组、模型组、溶剂对照组、治疗组（金钗石斛总生物碱，剂量为6 mg/kg）4个组（每组6只），均建立体外循环，除假手术组外其余各组均阻断主动脉60 min后再开放。各组于体外循环转流前（T1）和开放主动脉再灌注15 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）4个时间点检测心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中长链脂肪酰辅酶A（LCACoA）浓度，分析心脏功能及测定心肌组织内脂肪酸转位酶（FAT/CD36）mRNA和蛋白的表达。结果:各组犬心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中LCACoA浓度及FAT/CD36 mRNA的表达在流转前差异均无统计学意义（均 P>0.05），主动脉开放后（T2）以上指标模型组[分别为（35.8±4.7）%、（8.55±1.51）nmol/g、3.23±0.68]和治疗组[分别为（27.4±2.7）%、（6.10±1.38）nmol/g、2.20±0.56]均高于假手术组[分别为（19.6±3.9）%、（4.16±0.81）nmol/g、1.19±0.52]（均 P<0.05），在T2时间点最高，后逐渐下降；同模型组相比，以上指标治疗组的升高幅度偏低（均 P<0.05）。各组心脏功能指标：左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压最大上升/下降速率（±dp/dtmax）流转前差异均无统计学意义（均 P>0.05），主动脉开放后（T2），以上心脏功能指标模型组[分别为（76.5±9.1）mmHg、（31.1±2.9）mmHg、（1.2±0.4）mmHg/ms、（-0.9±0.1）mmHg/ms]与治疗组[分别为（92.9±8.7）mmHg、（25.3±3.6）mmHg、（1.8±0.4）mmHg/ms、（-1.3±0.1）mmHg/ms]均低于假手术组[分别为（165.5±12.9）mmHg、（6.5±0.5）mmHg、（3.3±0.6）mmHg/ms、（-2.9±0.3）mmHg/ms]（均 P<0.05），但治疗组的心脏功能指标受损程度低于模型组（均 P<0.05）。 结论:金钗石斛总生物碱在犬体外循环过程中，可通过抑制FAT/CD36在心肌组织中的表达异常，降低心肌对游离脂肪酸的摄取，减少LCACoA在心肌组织内异常蓄积，达到减轻缺血再灌注后心肌损伤的作用。

目的 为了探讨不同省份基地栽培的铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是否存在分子水平的遗传差异,为种质筛选和栽培选育提供参考.方法 通过采集 5 个省份的 30 份人工栽培铁皮石斛样品,并利用ITS及叶绿体条形码标记对其进行种水平遗传分析.结果 在种水平上,部分叶绿体条形码在不同产地的铁皮石斛上可以检测到变异,而ITS片段的种内变异少.其中trnH-psbA长度为790 bp(1 indel,2 SNP),pbsI-pbsK为473 bp(3 indel,1 SNP),trnF-ndhJ为682 bp(1 SNP);而ITS为551 bp(2 SNP).在叶绿体的NETWORK图和NJ树上可以看出,贵州的铁皮石斛样品具有特有的单倍型,而部分贵州安龙铁皮石斛样品的遗传距离与金钗石斛最接近;ITS分析的结果显示浙江的铁皮石斛样品与金钗石斛遗传距离更近.结论 贵州的铁皮石斛样品具有更高的遗传多样性,提示其可能具有多个种质来源;而贵州和浙江的铁皮石斛样品与金钗石斛的遗传距离更近,说明其在种源上可能属于进化过程中较早的一支,其他样本更有可能是由其发展而来.研究结果表明,虽然目前不能依靠种内的遗传变异对各地区的铁皮石斛进行产地区分,但可用于揭示不同地区铁皮石斛在种质来源上的遗传差异性,为铁皮石斛的栽培选育提供一定的科学依据.

目的:调查赤水野生金钗石斛种源状况,建立高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,初步探讨野生种源与石上仿野生样品的差异.方法:采用文献查阅和实地走访相结合的方法对贵州省赤水市野生金钗石斛种源及生境状况进行调查;采用HPLC指纹图谱对金钗石斛野生种源、石上仿野生种植及产于 6 个基地的成熟干品与鲜品进行分析.结果:在赤水市石堡乡寻找到附生在古树上的野生金钗石斛种源,生长年限分别在 50、30、20 年左右;4棵古树上分别有金钗石斛 80～100 丛,每丛约 10～15 株,总质量为 40～50 kg;金钗石斛野生种源与石上仿野生样品HPLC指纹图谱有 7 个共有特征峰,指认了 3 个特征峰成分,其相似度均在 0.940 以上.结论:赤水野生金钗石斛资源稀少,仅附生在极少量古树上;石上仿野生种植及不同基地的金钗石斛与古树上的野生种源指纹图谱相似度较高,石上仿野生种植模式所产金钗石斛能与野生种质保持一致.

中药石斛基原复杂,其主流品种有霍山石斛Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng、铁皮石斛D.officinale Kimura et Migo、金钗石斛D.nobile Lindl.,《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2005 年版石斛项下增加了"及其近似种"的描述,难以确定具体物种,有必要对其进一步正本清源.对石斛属的起源进行本草考证,对霍山石斛、铁皮石斛、金钗石斛的本草起源进行梳理,为不同石斛属药材的应用提供参考.霍山石斛是最早作为中药石斛应用的品种,高效液相色谱法特征图谱等方法为《中国药典》2020 年版收录霍山石斛提供了技术支撑;铁皮石斛应为石斛药材中应用时间最久、范围最广的品种,其主要为浙江、云南、贵州,以及广东、广西、福建、江西等地丹霞地貌上生长的种群,应高度重视并对其进行保护;D.nobile在历代文献中的中文名称混乱,应明确将其作为金钗石斛的拉丁学名.枫斗是我国名贵中药和传统保健品,起源于霍山石斛.古代名医对霍山石斛、铁皮石斛、金钗石斛、川石斛的用法各有特色,建议厘清品种来源、功效,加强现代研究,在修订《中国药典》时将其各自单列,充分发挥中药石斛的临床价值.

[目的]bHLH转录因子广泛存在于植物中,是调控植物生长发育和响应逆境胁迫的重要转录因子家族之一.从金钗石斛全基因组中鉴定DnbHLHs转录因子家族,分析其表达特点,为后续深入研究DnbHLHs转录因子的生物学功能奠定基础.[方法]利用生物信息学方法从金钗石斛全基因组中鉴定出bHLH转录因子家族成员,并对其理化特征、系统进化关系、基因结构、染色体定位和启动子顺式作用元件等进行分析,利用转录组数据和RT-qPCR分析DnbHLHs转录因子的组织表达模式和不同非生物胁迫下的表达规律.[结果]在金钗石斛中共鉴定出 137 个bHLH转录因子,DnbHLHs蛋白的氨基酸数量为 85-1 260,分子量为 9 855.23-140 024.19 Da,等电点为 4.52-10.66,不稳定系数为 31.94-87.42,脂溶指数为 56.66-106.06,亲水指数为-0.815-0.185.DnbHLHs分布于金钗石斛的 19 条染色体上,都存在bHLH结构域,与拟南芥的bHLH同源,且组内、种间存在着共线性关系.基因表达模式分析显示,DnbHLHs家族成员存在组织表达特异性,且DnbHLH26 和DnbHLH33 对多种逆境胁迫有响应.[结论]从金钗石斛全基因组中鉴定出 137 个DnbHLHs转录因子家族成员,该家族成员的理化性质和保守基序存在特异性和多样性的特征,不同DnbHLHs转录因子之间具有组织表达差异性,且DnbHLH26 主要受高盐和高温胁迫的诱导,DnbHLH33 主要受高盐、高温和低温胁迫的诱导.

为了解金钗石斛乙醇提取物正丁醇部位的化学成分,通过硅胶、凝胶、反相硅胶和高效液相等各种色谱技术进行分离纯化得到 3 个化合物,并根据核磁共振、质谱等波谱手段确定其结构分别为 2,11-epoxy-11,13-dihydroxypicrotoxano-3(15)-lactone(1)、2,4,6-三甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷(2)和3-methylbutan-1-ol β-D-glucopyranoside(3).其中化合物1 是一个新的木防己毒烷型倍半萜,该类化合物是金钗石斛中具有代表性的倍半萜类型.所有化合物均没有 α-葡萄糖苷酶和酪氨酸酶抑制活性,同时化合物1 也没有神经保护活性.

目的:探究金钗石斛和铁皮石斛对水分亏缺环境的适应能力和机制,为其仿生栽培提供理论支持.方法:通过盆栽控水进行持续干旱胁迫和复水处理,研究两种石斛叶片渗透调节物质含量和抗氧化酶活性的变化规律.结果:随着持续干旱时间的延长,金钗石斛叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和丙二醛(MDA)含量均呈先升高后降低的趋势,脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化物酶(POD)活性呈持续上升的趋势,而过氧化氢酶(CAT)活性呈逐渐降低的趋势;铁皮石斛叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、MDA含量、POD活性呈先升高后降低的趋势,SOD活性和CAT活性呈持续上升的趋势,而脯氨酸含量在干旱初期小幅下降后也呈持续升高的趋势.复水后,到复水20 d时,金钗石斛叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、CAT活性均已恢复并降低到充分供水时以下水平,而脯氨酸含量、MDA含量、SOD活性和POD活性仍略高于充分供水时;铁皮石斛叶片可溶性蛋白含量、MDA含量和CAT活性均已恢复并降低到充分供水时以下水平,而可溶性糖含量、脯氨酸含量、SOD活性和POD活性仍略高于充分供水时.结论:两种石斛均具有较强的干旱耐受能力和干旱胁迫后恢复能力.

对同一栽培环境下不同附生基质金钗石斛根际微生物的多样性和差异性进行了研究,以明确基质对其根际微生物的影响.运用高通量测序技术对石质和木质两类5种附生基质的金钗石斛根际微生物进行16S和ITS测序,结合OTU分析、Alpha多样性分析和主成分分析对金钗石斛根际微生物的多样性和差异性进行比较研究.共鉴定了细菌56个门,112个纲,275个目,377个科,621个属;真菌13个门,47个纲,123个目,273个科,503个属.石质基质金钗石斛真菌优势菌属为unidentified_Cantharellales_sp菌属,细菌优势菌属为鞘氨醇单胞菌属、粪杆菌属、unidenti-fied_Chloroplast菌属;木质基质金钗石斛真菌优势菌属为unidentified_Cantharellales_sp菌属、粉褶菌属,细菌优势菌属为粪杆菌属.石质基质较木质基质真菌物种相对丰度差异较大,优势菌属种类不同.功能预测分析表明,附生基质与金钗石斛根际微生物群落功能密切相关.本研究为金钗石斛"基质-根际微生物-菌根真菌"的相关性及其生长发育、次生代谢产物积累规律提供了实验依据,为石斛"生石上者胜"、金钗石斛栽培基质的合理选择提供依据.

目的 探讨不同地区金钗石斛Dendrobium nobile 居群间的遗传多样性及遗传分化关系.方法 基于引物结合位点间扩增(inter-primer binding site,iPBS)分子标记对广西5个县共35份金钗石斛进行遗传关系、遗传多样性和种群间遗传分化分析,并构建能区分35份金钗石斛种质的DNA指纹图谱.数据分析使用NTSYS-pc 2.10e统计软件计算遗传相似系数并构建聚类分析图谱,采用Popgene 1.32软件计算遗传多样性指数与居群遗传分化系数.结果 8条iPBS引物共扩增出158条条带,多态性条带为143条,多态条带百分率(percentage of polymorphic bands,PPB)为90.51％;在遗传距离0.70处,35份种质分为7大类群,居群在分子水平上出现明显分化;遗传相似系数(genetic similarity coefficient,Gs)变化范围为0.559 0～0.975 9,变幅为0.416 9;平均观测等位基因数(observed number of alleles,Na)、平均有效等位基因数(effective number of alleles,Ne)、Nei's 基因多样性指数(Nei's gene diversity index,He)、Shannon 多样性信息指数(Shannon information index,I)分别为1.898 7、1.505 0、0.300 7、0.454 2,居群间存在丰富遗传多样性;基因多样度(total genetic diversity,Ht)、各居群基因分化系数(gene diversity within population,Hs)、居群间遗传分化系数(coefficient of gene differentiation,Gst)分别为0.2998、0.2149、0.283 0,居群间遗传变异占总变异的28.30％,居群内的遗传变异占总变异的71.70％,遗传变异主要来源于居群内部;基因流(gene flow,Nm)为1.266 5,居群间存在较高水平的基因交流.引物2219和2399可单独鉴别出35份种质,试验基于引物2399的"0,1"矩阵构建35份种质的指纹图谱,此图谱可为金钗石斛品种的分类与鉴定提供参考.结论 金钗石斛居群间遗传多样性较丰富,总变异主要来源于居群内变异,居群间存在较高水平的基因交流.揭示了金钗石斛种质间的遗传关系及其居群遗传多样性,为野生金钗石斛种质的保护工作的开展奠定基础.

研究金钗石斛Dendrobium nobile茎中非生物碱部分的化学成分.运用大孔吸附树脂、MCI、硅胶、反相C18、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱、制备薄层色谱及制备型高效液相色谱等技术进行化合物的分离纯化,根据理化性质、波谱数据结合参考文献鉴定化合物结构.从金钗石斛茎中分离得到 8 个化合物,分别为soltorvum F(1)、对羟基苯丙酸(2)、香草酸(3)、对羟基苯甲酸(4)、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺(5)、(+)-(1R,2S,3R,4S,5R,6S,9R)-2,11,12-trihydroxypicrotoxane-3(15)-lactone(6)、dendronobilin H(7)、soltorvum E(8).其中化合物 1 为新化合物,命名为soltorvum F,化合物 8 为首次从石斛属中分离得到.