患者，男，8岁，吉林长春人。患儿出生后新生儿期黄疸消退延迟，11月龄出现无明显诱因发热伴尿色加深，血常规：HGB 67 g/L，平均红细胞体积（MCV）92.7 fl，平均血红蛋白含量（MCH）29.0 pg，平均血红蛋白浓度（MCHC）313 g/L，网织红细胞比值13.91%，网织红细胞计数0.037×10 12/L；肝功能：总胆红素（TBIL）19.8 μmol/L，直接胆红素（DBIL）12 μmol/L，间接胆红素（IBIL）7.8 μmol/L。外周血涂片：杆状核粒细胞2%，分叶核粒细胞26%，淋巴细胞62%，单核细胞6%，嗜酸分叶核粒细胞2%，异型淋巴细胞2%，已成熟红细胞大小不一，球形红细胞13%，易见泪滴状、盔甲状、棒状等异形红细胞碎片。血红蛋白电泳：HbA 69.9%，HbA 2 2%，HbF 18.4%，HbE 6.6%，Hb-S/D 3.1%，中国人常见17种β珠蛋白基因点突变检测提示β N/β N。自身免疫性抗体：IgM 14.9 U/ml，抗核抗体弱阳性，其余抗体阴性。骨髓涂片：增生活跃，红系增生旺盛，有核红细胞形态大致正常，偶见双核中幼红细胞，分裂红细胞易见，部分成熟红细胞中心淡染区缩小，部分成熟红细胞中空明显，可见变形，可见H-J小体，点彩红细胞易见。输注洗涤红细胞维持HGB为90~100 g/L，患儿尿色加深症状无改善。患儿4岁时出现肝脾肿大症状，腹部B超：肝右锁骨中线肋缘下2.4 cm，脾左肋缘下2.9 cm；尿常规：尿胆红素（++）。为明确诊断，患儿前来本实验室。签署知情同意书后抽取患儿及其父母外周血进行表型及基因型分析。检测结果提示患儿表现为大细胞性贫血，血常规：HGB 76 g/L，MCV 105.57 fl，MCH 30.08 pg，MCHC 276 g/L；高效液相色谱法行血红蛋白电泳：HbF 18.4%，HbA 2 2.0%，HbS 9.7%，利用本实验室建立的毛细管区带快速电泳法测定α和β珠蛋白链提示患儿有异常血红蛋白。患儿常规的地中海贫血基因检测阴性（3种中国人群常见的缺失型α地贫基因、3种中国人群常见的非缺失型α地贫基因和17种中国人群常见的β地贫基因），为了检测患儿是否存在未知突变，对整个β珠蛋白基因进行了DNA测序，测序结果提示患儿携带β珠蛋白基因的罕见错义突变CD88（T>C）。而患儿父母表现出正常的血液学表型：患儿父亲HGB 161 g/L、HbF 1.1%、HbA 2 3.0%，患儿母亲HGB 136 g/L、HbF 1.0%、HbA 2 2.5%；常规地中海贫血基因检测也均为阴性，且测序发现父母双方都没有携带患儿所携带的罕见的错义突变CD88（T>C）。考虑患儿是由于自发突变引起的HBB基因突变，经查询数据库该突变引起异常血红蛋白Hb Santa Ana，该异常血红蛋白案例在国外有过报道，该突变携带患者多表现出大细胞性贫血伴随异常血红蛋白。对患儿进行随访，目前血红蛋白维持在90~100 g/L，肝脾肿大未有改善。

目的:探讨单克隆丙种球蛋白（M蛋白）在临床就诊患者中的特点与分布规律。方法:选择2012年1月至2021年12月在复旦大学附属中山医院就诊并进行毛细管区带电泳的936 171例患者（男508 449例，女427 722例），筛选出异常条带的14 945例患者作为研究对象，男10 173例，女4 772例，年龄21~102（65±13）岁。按年龄分为21~30岁（168例）、31~40岁（405例）、41~50岁（1 326例）、51~60岁（3 068例）、61~70岁（4 985例）、71~80岁（3 288例）、81~90岁（1 519例）、≥91岁（186例）共8组。收集14 945例检出异常条带患者的诊断结果，按有无肿瘤分为肿瘤组（5 196例）和非肿瘤性组（9 749例）。回顾性分析不同性别、年龄和疾病组中异常条带分布情况。14 945例患者中，4 988例进行了免疫固定电泳试验，排除336例阴性和412例双克隆条带反应，以具有单克隆免疫球蛋白（M蛋白）反应的4 240例患者为研究对象，男2 794例，女1 446例，年龄21~102（67±12）岁。按年龄分为21~30岁（18例）、31~40岁（91例）、41~50岁（364例）、51~60岁（862例）、61~70岁（1 455例）、71~80岁（904例）、81~90岁（486例）、≥91岁（60例）共8组，收集患者的诊断结果与免疫球蛋白（Ig）分型（IgA-κ、IgA-λ、IgG-κ、IgG-λ、IgM-κ、IgM-λ、κ、λ）结果，回顾性分析M蛋白在不同性别、年龄和疾病组的分布情况。结果:在936 171例患者中，电泳图谱表现出异常条带者为14 945例，检出率为1.60%；其中，男性和女性异常条带检出率分别为2.00%（10 173/508 449）和1.12%（4 772/427 722），差异有统计学意义（ P<0.01）。不同年龄组间的异常条带检出率差异有统计学意义（ P<0.01）；其中，≥91岁组异常条带检出率最高为5.98%，男女检出比1.67∶1。14 945例异常条带中，51~60、61~70、71~80岁患者分别占20.53%（3 068例）、33.36%（4 985例）和22.00%（3 288例），各年龄组间差异均有统计学意义（χ 2=115.82， P<0.01）。肿瘤组中检出异常条带前3位者为浆细胞瘤1 123例，淋巴瘤289例，白血病49例，浆细胞瘤电泳图谱异常条带检出率为89.92%（1 123/1 249），高于淋巴瘤、白血病患者［分别为6.73%（289/4 296）和6.40%（49/766）， P均<0.01］。4 240例M蛋白阳性患者中，51~60、61~70、71~80岁分别占20.33%（862/4 240）、34.32%（1 455/4 240）和21.32%（904/4 240），各年龄组间差异有统计学意义（ P<0.01）；M蛋白分型结果在不同性别人群中均为IgG-κ型占比最高，男性32.28%（902/2 794），女性34.30%（496/1 446）；在21~30、31~40、41~50岁年龄组中，IgG-λ型占比最高，分别为38.89%（7/18）、36.26%（33/91）、34.07%（124/364）；而在51~60、61~70、71~80、81~90、≥91岁年龄组中，均为IgG-κ型占比最高，分别为33.87%（292/862）、34.16%（497/1 455）、31.53%（285/904）、34.57%（168/486）、28.33%（17/60），不同性别组及各年龄组比较差异均有统计学意义（ P均<0.01）。M蛋白阳性的肿瘤患者中，浆细胞瘤占比最高14.22%（603/4 240），其次为淋巴瘤6.30%（267/4 240）；非肿瘤疾病中，M蛋白血症占比最高7.24%（307/4 240），其次是肺部感染5.47%（232/4 240）。 结论:毛细管区带电泳异常条带检出率会随年龄的增长而提高，且同年龄组中，男性异常条带检出率高于女性；不同的恶性肿瘤疾病在毛细管区带电泳中也会出现异常条带，但仍以血液系统的肿瘤为主。M蛋白阳性结果中，61~70岁年龄段人群占比最高；M蛋白类型以IgG型最多见；21~50岁年龄段中，IgG-λ型占比最高；>50岁年龄段中，IgG-κ型占比最高；M蛋白阳性的诊断中，排前3位的疾病均为血液系统疾病，分别为浆细胞瘤、M蛋白血症及淋巴瘤。

重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键.重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性.其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一.电荷异质性监测有助于推动生产工艺的优化,反映产品生产的一致性和稳定性等,对保证重组蛋白产品的安全和质量至关重要.开发可靠快速、灵敏稳健的电荷异质性分析方法一直是生物制药行业所追求的目标.经典的电荷异质性分析方法主要有离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)以及全柱成像毛细管等电聚焦电泳(WCID-CIEF)等,其中WCID-CIEF提供的等电点(pI)和峰形的生化指纹有助于对疫苗多蛋白成分的分析.基于以上该文将对WCID-CIEF的原理和特点及其在重组蛋白疫苗质量控制中的应用进行概述.

目的 建立化妆品中米诺地尔的毛细管区带电泳(CZE)测定法.方法 样品经提取液(甲醇:2 mmol/L磷酸二氢钠+3 mmol/L磷酸体积比为1∶9)提取后离心,过0.45 μm膜后上机.采用未涂敷熔融石英毛细管[75 μm×30.2 cm(有效长度∶20 cm)];分离缓冲液为20 mmol/L磷酸二氢钠-30 mmol/L磷酸,pH 2.13;分离电压为11 kV;检测波长为278 nm;进样压力为0.5 psi;进样时间为3s.结果 在1～160 mg/L的线性范围内,所得米诺地尔的回归方程为y=151.12x+73.363,r=0.999 95,呈良好的线性关系.该方法的检出限为0.3 mg/L,定量下限为1.0 mg/L,平均回收率在93.4％～95.9％之间,RSD在3.3％～3.7％之间.结论 该方法简单、快速、准确,可用于化妆品中米诺地尔含量的检测.

目的 采用毛细管区带电泳测定大黄提取物中大黄素、大黄酚和大黄酸的含量.方法 以熔融石英毛细管柱(67.4cm×75.0 μm,有效长度51.0 cm)为分离柱,60 mmol/L Na2B4O7,40 mmol/L Na2CO3,40 mmol/L β-环糊精(pH 8.9)为缓冲溶液,检测波长254 nm.结果 大黄提取物含量测定中大黄素、大黄酚和大黄酸精密度的相对标准偏差(RSD)分别为1.79％、4.46％和2.30％;3组分共同线性范围为1.1～19.0 mg/mL;大黄素、大黄酚和大黄酸的平均回收率分别为100.14％、99.65％和98.44％,RSD分别为2.43％、2.54％和2.02％(n=3).结论 该方法可用于大黄提取物的含量检测.

目的 建议同时测定三黄片中大黄素和大黄酚含量的β-环糊精修饰毛细管区带电泳法.方法 采用超声辅助方法提取大黄有效成分,分离柱为熔融石英毛细管柱(75μm×67.4 cm,有效长度51 cm),缓冲溶液为60 mmol/L Na2B4O7+40 mmol/L Na2CO3,缓冲溶液添加剂为40 mmol/Lβ-环糊精(pH=8.9),检测波长为254 nm.结果 三黄片中大黄素和大黄酚重复性试验的RSD分别为1.76％和1.53％(n=6),质量浓度线性范围分别为2.0～18.5μg/mL和2.50～1.56×103μg/mL,平均加样回收率分别为93.53％和97.26％,RSD分别为0.83％和2.52％(n=3).结论 该方法简单,结果准确,重复性好,可用于三黄片中大黄有效成分的含量测定.

目的 建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法.方法 通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价.结果 TETA和EACA浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度的变化,会影响IgG2单抗的电荷异构体分离效果,通过一系列参数的优化,最终确定了方法参数(400 mmol·L-1EACA/0.05％ TETA,pH 6.2,分离电压30 kV,分离温度35℃).建立的CZE分析方法可以有效地对IgG2单抗电荷异构体进行分离,并具有良好的精密度,峰面积的RSD值小于3.0％.该方法同样适用于IgG1和IgG4型单抗的电荷异质性分析,同时,根据电泳图谱和迁移时间,能够对不同亚型和靶点的单抗进行有效的区分鉴别.结论 建立的IgG2型单抗毛细管区带电泳方法,可有效分离电荷异构体,并具有良好的精密度,可作为平台方法应用于IgG2型单抗的电荷异质性分析和鉴别.

目的:建立一个全新、简单、快速的高效毛细管电泳方法,不需要对血浆样品进行任何前处理,血浆样品直接进样测定丙吡胺在大鼠血浆中的游离药物浓度和总药物浓度及血浆蛋白结合率.方法:采用40.2 cm未涂层石英毛细管(75 μm×375 μm,有效长度30 cm),分别以pH 7.4的20 mmol· L-1磷酸盐缓冲溶液和含有50 mmol· L-1三羟甲基氨基甲烷(Tris)的20 mmol· L-1磷酸盐缓冲溶液作为缓冲体系,测定游离药物浓度和总药物浓度.采用3.447 kPa压力直接进血浆样品5s,分离电压15 kV,温度20℃,检测波长190nm.结果:方法的专属性强,在线测定血浆中总药物浓度时,丙吡胺与蛋白的结合得到充分破坏并与血浆蛋白成分在5 min内达到基线分离,丙吡胺在血浆中总质量浓度分别在1.0～20.0 μg·mL-1和20.0～200.0 μg·mL-1的低、高浓度区间内呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2和0.997 7,回收率为93.8％～110.7％.在体外血浆生物样品中,当预温孵的丙吡胺质量浓度为100、50、25、12.5、10 μg· mL-1时,血浆蛋白结合率平均值为86.7％、86.3％、86.4％、78.3％、74.7％.在体内血浆生物样品中,丙吡胺血浆蛋白结合率平均值范围在39.3％～91.5％.测定结果表明丙吡胺与大鼠血浆蛋白的结合具有一强、一弱2个结合位点,结合常数分别为5.3×104 mol-1.L和1.2×102 mol-1·L.绘制了大鼠在给药后24h体内丙吡胺游离和总药物浓度的药时曲线.结论:利用所建立的新方法,将含丙吡胺的血浆生物样品直接进样,高效、快速地测定了大鼠体内外血浆生物样品中丙吡胺的游离药物和总药物浓度.新建立的方法灵敏,高效快速,操作简单,耗样量少,价廉,有潜在的广泛的应用价值.

目的 采用毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)测定脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的含量.方法 以25 mmol/L四硼酸钠(pH 8.0)为背景电解质,以20 cm×50μm I.D.未涂层的毛细管为色谱分离柱,于200 nm波长检测脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜的残余量.结果 DMSO在不同溶液中质量浓度为1～100 mg/L的线性范围内线性关系良好,R2≥0.9989.加标回收率为98.07％～103.13％,变异系数为0.38％～2.57％.结论 该方法简单、快速、经济、环保,不受混合物组分中其他物质的干扰,适用于快速检测结合疫苗中DMSO的残余量.

目的:运用毛细管区带电泳法(CZE)检测重组人干扰素α-1b(rhIFNα-1b)滴眼液中间甲酚含量.方法:优化的CZE方法参数为采用无涂层的熔融石英毛细管(60 cm×50 μm),电泳缓冲液为50 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 8.0),压力进样(1.0 psi),分离电压25 kV,检测波长195 nm,毛细管温度25℃.结果:间甲酚在0.05 ～0.8 mg·ml-1浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r =0.997 3),最低检出限0.002 mg·ml-1.3批rhIFNα1b滴眼液中间甲酚的相对含量分别为1.94,1.89和1.97 mg·ml-1,平均回收率分别为94.3％(RSD =1.57％,n=9).结果与HPLC方法结果基本一致.结论:新建毛细管区带电泳法简便,分析速度快,试剂消耗量小,结果准确,可以用于重组人干扰素α1b滴眼液中间甲酚含量的检测.