目的:基于激发态分子内质子转移(ESIPT)机制,研发一种用于酪胺检测的新型小分子荧光探针CPIM.方法:通过4-(9H-咔唑-9-基)苯胺和3,5-二碘水杨醛反应缩合得到咔唑类小分子荧光探针CPIM,采用核磁共振氢谱、红外光谱、高分辨质谱表征其结构.通过紫外光谱和荧光光谱等方法研究荧光探针对酪胺的检测性能.通过Job's曲线、红外光谱和核磁共振氢谱对检测机制进行研究.采用标准加入法验证荧光探针的实际应用性.结果:在365 nm紫外灯下,CPIM可以实现酪胺分子的可视化检测.CPIM对酪胺识别具有良好的选择性、灵敏性、抗干扰性、稳定性和重现性,在0～5.0 × 10-6mol/L浓度范围内,体系荧光强度与酪胺浓度呈良好的线性关系,其检测限为4.36×10-7 mol/L,与酪胺的结合常数为9.98×104 M-1.CPIM与酪胺以 1∶1结合脱水后形成复合物,进而抑制ESIPT过程,并生成大的p-π共轭体系导致荧光显著增强.此外,CPIM还可对实际样品中的酪胺进行检测.结论:CPIM具有良好的酪胺检测能力,具有选择性高、灵敏性好、检测限低、稳定性好的特点.

目的 采用荧光淬灭光谱法研究金匮肾气丸及其拆方与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的规律.方法 根据304 K、307 K和313K三个温度下金匮肾气丸及其拆方对BSA的荧光淬灭作用,利用Stern-Volmer方程和双对数方程对实验数据进行处理,分析金匮肾气丸及其拆方与BSA相互作用的荧光淬灭类型和结合常数.结果 随着金匮肾气丸及其拆方中定量指标成分浓度增加,BSA的荧光强度逐渐减小;同一温度下,金匮肾气丸阴阳双补组与BSA相互作用的结合常数Ka值大于含相同定量指标成分的补阳组或补阴组,含"三泻"药物(茯苓、泽泻、牡丹皮)的组与BSA相互作用的结合常数Ka值大于不含"三泻"药物的组.结论 金匮肾气丸及其拆方均能与BSA结合,使得BSA的荧光淬灭,其淬灭类型均以静态淬灭为主;金匮肾气丸阴阳双补组与BSA的相互作用强于含相同定量指标成分的补阳组或补阴组,"三泻"药物的加入使得这种相互作用进一步增强.

旨在探讨哌立福新对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响及其作用机制。本研究通过24孔板静置孵育24 h培养铜绿假单胞菌生物膜，再通过结晶紫染色法检测哌立福新对铜绿假单胞菌培养基底部生物膜的抑制作用，将未加哌立福新的孔设置为对照组；通过玻璃试管静置孵育24 h构建气-液交界面生物膜，并通过结晶紫染色法检测哌立福新对铜绿假单胞菌气-液交界面生物膜形成的影响，将未加哌立福新的孔设置为对照组；将铜绿假单胞菌重悬于含有系列浓度的哌立福新培养基中，置于恒温摇床，连续检测其生长浊度随时间的变化，绘制时间-生长曲线，检测哌立福新对铜绿假单胞菌浮游菌增殖的影响，将未加哌立福新的孔设置为对照组；通过分子对接中的Glide超精确模式将哌立福新与PqsE蛋白进行柔性对接，预测哌立福新与靶蛋白PqsE的结合力及结合模式；通过检测PqsE蛋白的催化底物硫醇的生成量，验证哌立福新对PqsE蛋白催化功能的抑制能力，将未加哌立福新的孔设置为对照组；最后，通过等离子表面共振试验，验证哌立福新与PqsE蛋白的结合能力。结果显示，与未加哌立福新的对照组相比较，4~8 μg/ml的哌立福新可有效抑制铜绿假单胞菌培养基底部和气-液交界面生物膜的形成；哌立福新对铜绿假单胞菌浮游菌的增殖无影响；分子对接试验提示哌立福新与PqsE蛋白具有良好的结合力，对接分数为-10.67 kcal/mol；哌立福新还能有效抑制PqsE蛋白的催化功能，与未加哌立福新的对照组相比，随着哌立福新浓度增高，PqsE蛋白酶受抑制程度越高；通过等离子表面共振试验发现PqsE蛋白与哌立福新具有良好的结合能力，且其结合常数为6.65×10 -5 mol/L。综上，哌立福新可结合PqsE蛋白，干扰PqsE蛋白的催化功能并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成。

目的:利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子(apt)，探讨apt与BMSCs的结合方式及能力。方法:利用SELEX技术，以大鼠BMSCs为靶点，从构建的核酸文库中反复筛选、克隆、测序及分析，获得候选apt。流式细胞术测定和软件分析获得不同浓度(0、4、8、16、32、64、128、256 nmol/L)候选apt与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数。胰酶消化实验探究apt与BMSCs结合的靶点，并观察apt体外捕获BMSCs的能力。结果:流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高。经序列分析适配子apt7与BMSCs的亲和力最高，平衡解离常数为(11.79±0.72) nmol/L。胰酶消化实验表明当胰酶消化细胞时间超过10 min后，apt7与BMSCs的亲和力下降甚至消失。体外捕获实验表明固定于培养皿上面的apt7能体外捕获骨髓细胞液中的大鼠BMSCs。结论:本研究通过SELEX技术成功分离出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的特异性适配子apt7，为进一步将适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞研究提供了实验依据。

目的:研究动态增强磁共振成像（DCE-MRI）参考区域模型结合表观扩散系数（ADC）直方图对Luminal型乳腺癌的诊断效能。方法:选取我院于2019年1月至2021年12月收治的96例Luminal型乳腺癌患者，均行3.0 T DCE-MRI检测、MR常规扫描以及扩散加权成像（DWI）扫描。利用GEAW 4.6后处理工作站分析b值为200、500、1000 s/mm 2时的ADC直方图，记录ADC相关参数（ADCmin、ADCmean、偏度、峰度）、灌注参数[速率常数（Kep）、容量转移常数（Ktrans）]。根据乳腺癌分型分为A型、B型，比较各组间参数差异，采用Pearson分析参数间的相关性，并采用受试者工作特征（ROC）曲线分析灌注参数联合ADC值对Luminal型乳腺癌分型的诊断价值。 结果:Luminal A型乳腺癌34例，Luminal B型乳腺癌62例。A型患者的Ktrans明显低于B型（P<0.05），而Kep值差异无统计学意义（ P>0.05）。b值为200、500、1000 s/mm 2时，患者的ADC mean、峰度差异无统计意义（ P>0.05），其中b值为1000 s/mm 2时，A型患者的ADCmin、偏度均明显高于B型患者（P<0.05）。Pearson相关性分析显示，Ktrans与ADCmin、偏度呈负相关性（b=1000 s/mm 2），r分别为-0.545、-0.528，均P<0.05。Ktrans、ADCmin、偏度鉴别Luminal乳腺癌分型的AUC分别为0.799（95%CI：0.706~0.892）、0.832（95%CI：0.753~0.911）、0.721（95%CI：0.614~0.827）。三指标联合诊断的AUC为0.887（95%CI：0.813~0.960），明显高于单独检测（P<0.001）。 结论:b值为1000 s/mm 2时的ADC值（ADCmin、偏度）与DCE-MRI的定量参数（Ktrans）具有负相关性，两者联合检测对Luminal型乳腺癌的分型较高的诊断价值。

目的:观察益气解表方治疗小儿乙型流行性感冒（乙型流感）的疗效。方法:选择2019年10月至12月在天津市儿童医院中医门诊就诊的乙型流感患儿120例。根据不同治疗方案将患儿分为益气解表方治疗组和西医治疗对照组，每组60例。益气解表方治疗组口服益气解表方加减治疗（组成：紫苏叶、葛根、柴胡、清半夏、黄芩各6 g，陈皮、荆芥穗、防风、前胡、杏仁、太子参、桔梗、炙甘草各4 g，大便干燥者加石膏、熟大黄，咳重者加白前、蜜枇杷叶，流涕者加白芷、辛夷），每日1剂、分2次服用；西医治疗对照组口服利巴韦林，每次10 mg/kg、每日3次。治疗7 d后观察两组临床症状、实验室检查指标的变化及临床疗效，并分析两组预后指标的变化。结果:益气解表方治疗组体温正常和咳嗽、咽痛、流涕等症状改善或部分改善患儿例数均较西医治疗对照组明显增多（体温正常：49例比44例，咳嗽缓解：33例比25例，咽痛缓解：27例比23例，流涕缓解：47例比42例，均 P<0.05），鼻咽拭子乙型流感病毒抗体（IBV-Ag）转阴例数以及血清淀粉样蛋白Ａ（SAA）、C -反应蛋白（CRP）水平在正常参考值范围（<10 mg/L）的例数均明显多于西医治疗对照组（IBV-Ag转阴数：36例比31例，SAA正常数：49例比46例，CRP正常数：50例比46例，均 P<0.05）。益气解表方治疗组治疗后总有效率明显高于西医治疗对照组〔81.67%（49/60）比75.00%（45/60）， P<0.05〕。益气解表方治疗组出现便秘、食欲减退、腹泻患儿例数均较西医治疗对照组明显减少（便秘：11例比14例，食欲减退：8例比11例，腹泻：6例比8例，均 P<0.05）。 结论:益气解表方可明显改善乙型流感患儿的临床症状和实验室检查指标，提高总有效率，疗效确切。

目的:探究咖啡酸苯乙酯（CAPE）对朊病毒（PrP Sc）复制、扩增及纤维形成的影响及可能的机制。 方法:通过CCK8实验检测CAPE处理3、7 d后朊病毒感染细胞模型SMB-S15的细胞活力，得出CAPE对SMB-S15的最大安全浓度；选取安全范围内的浓度处理细胞，利用蛋白质免疫印迹方法分析CAPE处理前后细胞内PrP Sc的含量变化。利用蛋白质错误折叠循环扩增（PMCA）技术和蛋白质免疫印迹方法检测CAPE处理前后扩增产物中PrP Sc的含量变化。利用实时震动蛋白诱导扩增（RT-QuIC）技术检测CAPE处理前后朊蛋白纤维形成的变化情况。通过分子相互作用检测CAPE与小鼠重组全长朊蛋白的结合能力。 结果:CCK8细胞活力实验结果显示：1 μmol/L CAPE处理细胞3、7 d时细胞存活率与对照组相比，差异无统计学意义（均 P>0.05），当CAPE浓度超过1 μmol/L时，CAPE处理细胞3、7 d细胞存活率降低，与对照组之间差异均存在统计学意义（均 P<0.05），因此1 μmol/L为CAPE处理SMB-S15细胞的最大安全浓度。蛋白质免疫印迹实验结果显示：CAPE处理3、7 d均可检测到SMB-S15细胞中PrP Sc含量的降低（均 P<0.05）。PMCA实验产物通过蛋白质免疫印迹方法检测结果显示：经CAPE处理后，适应株SMB-S15、139A、ME7的PMCA扩增产物中PrP Sc含量（相对灰度值）降低，与对照组相比差异有统计学意义（均 P<0.05）。RT-QuIC实验结果显示：CAPE处理后139A、ME7、SMB-S15小鼠适应株和朊病毒感染细胞SMB-S15在反应中形成朊蛋白纤维（ThT峰值）均降低，且CAPE对不同种子朊蛋白纤维的抑制程度差异有统计学意义（均 P<0.05），其中对ME7的抑制作用更明显。分子相互作用结果显示：CAPE与鼠源重组朊蛋白存在明显的分子结合，平衡解离常数KD为（2.92±0.41）×10 -6 mol/L。 结论:CAPE对PrP Sc体外复制、扩增和纤维形成均具有抑制作用，可能与CAPE和朊蛋白特异性结合有关。

目的:探究层粘连蛋白α3链G1结构域(LG1)是否为人纤溶酶原Kringle 5的特异性受体并介导了Kringle 5对血管内皮细胞(HUVEC)的增殖和凋亡的影响。方法:利用蛋白印记覆膜法(Blot overlay)及酶联免疫吸附试验(ELISA)技术考察重组Kringle 5与LG1间的结合能力；以紫杉醇作为阳性对照，不同浓度Kringle 5处理HUVEC；此外引入抗层粘连蛋白α3链抗体(抗LAMA3)并分成Kringle 5组(KR)、抗LAMA3+Kringle 5组(ALK)和Control组，细胞计数试剂盒(CCK-8)实验考察各组中内皮细胞的增殖和凋亡，组间比较采用单因素方差分析。结果:Kringle 5可剂量依赖性地特异结合LG1，平衡解离常数为12.9×10 －8 mol/L；细胞增殖实验中的Kringle 5处理组(180、260、340、420、500×10 －9 mol/L)的吸光度值低于空白组(0.59±0.03、0.48±0.02、0.36±0.04、0.25±0.01、0.25±0.01比0.72±0.01， F＝52.211、340.650、187.178、3 035.236、4 044.002， P<0.05)，且Kringle 5组(340、420、500×10 －9 mol/L)的增殖抑制率高于紫杉醇组[(67.85±7.07)%、(87.15±2.28)%、(87.95±1.72)%比(48.04±7.84)%， F＝10.561、68.783、74.115， P<0.05]；细胞凋亡实验中，Kringle 5处理组(0.32、0.64、0.96、1.28、1.60、1.92×10 －6 mol/L)的吸光度值低于空白组(0.47±0.03、0.45±0.02、0.40±0.04、0.30±0.03、0.28±0.03、0.26±0.01比0.59±0.04， F＝14.122、22.986、28.333、111.968、112.113、184.012， P<0.05)；KR组的增殖抑制率高于ALK组[(29.95±2.85)%、(43.60±0.23)%、(55.61±3.87)%比(－11.28±4.46)%、(－22.30±16.19)%、(－18.42±17.82)%， F＝181.953、49.667、49.438， P<0.05)]，KR组的细胞存活率低于ALK组[(93.80±19.17)%、(53.79±1.10)%、(47.10±13.90)%比(139.97±26.99)%、(150.41±33.67)%、(115.08±30.04)%， F＝5.837、24.689、12.649， P<0.05]。 结论:层粘连蛋白α3链为Kringle 5的特异性受体并介导了Kringle 5对HUVEC的增殖抑制作用和凋亡诱导作用。

目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）的DNA适体，并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体，利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性，并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物，利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化，分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度，建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5，解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L；并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法，其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml，反应时间30 min，可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。

目的:评价心脏手术患儿6%羟乙基淀粉(HES)130/0.4急性血液稀释(AHD)后血钾浓度降低与6%HES130/0.4-人血清白蛋白(HSA)复合物的关系。方法:择期行室间隔或房间隔缺损修补术的患儿48例，性别不限，年龄2～12岁，体重12～53 kg，ASA分级Ⅱ或Ⅲ级。患儿气管插管术后以0.5 ml·kg -1·min -1的速率静脉输注10%血容量的6%HES130/0.4行AHD。于AHD前即刻和AHD结束后15、30 min时测定全血K ＋浓度。采用荧光光谱法分析6%HES130/0.4和HSA的结合关系。分别于加入K ＋前、加入K ＋后15和30 min时，测定HSA与6%HES130/0.4的结合常数。 结果:与AHD前即刻比较，AHD结束后各时点K ＋浓度降低( P<0.05)。荧光光谱分析法显示，6%HES130/0.4和HSA的Trp-214形成1∶1的复合物；与加入K ＋前比较，加入K ＋后15和30 min时结合常数降低。 结论:心脏手术患儿6%HES130/0.4 AHD后血钾浓度一过性降低的机制可能与部分K ＋与HSA-6%HES130/0.4复合物形成"离子架桥"有关。