目的:对煤工尘肺（CWP）的毛细血管扩张性共济失调症突变基因（ ATM）的基因表达量及其功能性单核苷酸多态性（SNP）位点的基因型进行分析，探讨CWP发生发展与 ATM的关联。 方法:于2020年10月，收集贵阳市公共卫生救治中心职业病科2019年1月至2020年9月职业健康体检或就诊的264名研究对象的相关信息。选择无职业危害因素接触史者作为健康对照组，共67人；具有10年以上煤尘接触史且肺部有小阴影但达不到诊断标准的煤矿工人为接尘对照组，共66人；具有同样煤尘接触史且已确诊的壹期CWP患者为煤工尘肺壹期组，共131人。采用逆转录-聚合酶链反应对各组 ATM表达量进行检测。通过质谱仪对 ATM rs189037、rs1801516进行基因分型。 结果:各组间 ATM表达量差异有统计学意义（ P<0.05）；与健康对照组比较，接尘对照组患者的 ATM表达明显升高（ P<0.05）。随着CWP的发生发展，rs189037野生型GG减少，突变杂合子GA和纯合子AA增加，但差异无统计学意义（ P>0.05）；rs1801516野生型GG和突变杂合子GA无明显变化（ P>0.05）。rs189037型各组间年龄、中性粒细胞以及嗜碱性粒细胞差异均有统计学意义（均 P<0.05），各组间血压、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及烟酒史差异无统计学意义（均 P>0.05）。与野生型GG型比较，突变杂合子和纯合子 OR上升，但各组差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:ATM可能是煤工尘肺发生发展的早期活化基因之一，rs189037可能是影响其基因表达的功能性位点； ATM与炎症反应可能有关，中性粒细胞和嗜碱性粒细胞对CWP的发生发展有影响。

目的:探讨树突状细胞诱导的杀伤细胞（DC-CIK）生物免疫治疗联合化疗对中晚期非小细胞肺癌患者凋亡相关基因和免疫功能的影响。方法:选取温州医科大学附属浙江省台州医院2018年2月至2019年5月收治的中晚期非小细胞肺癌患者100例，采用随机数字表法分为对照组、观察组各50例。两组患者均给予培美曲塞联合顺铂化疗，观察组加用DC-CIK细胞生物免疫治疗。观察两组凋亡相关基因［原发性小头畸形基因（MCPH1）、毛细血管扩张性共济失调症突变基因（ATM）、毛细血管扩张性共济失调症突变基因Rad3相关蛋白（ATR）、转录因子21（TCF21）］、免疫功能的变化，并评定临床疗效。结果:治疗后，观察组MCPH1、ATM、ATR、TCF21分别为（301.11±41.12）、（239.98±30.15）、（270.01±36.01）、（270.01±34.02），均显著高于对照组的（101.32±15.32）、（103.00±13.97）、（101.12±14.90）、（100.20±14.99）（ t=32.194、29.149、30.644、32.299，均 P<0.001）；观察组Th1细胞为（29.00±3.41）%，显著高于对照组的（22.61±3.22）%（ t=9.634， P<0.001）；观察组Th17细胞、Th2细胞、CD +4CD +25Treg细胞分别为（0.89±0.10）%、（12.01±1.36）%、（11.02±1.92）%，均显著低于对照组的（1.70±0.20）%、（17.61±2.20）%、（18.70±2.40）%（ t=25.614、15.310、17.670，均 P<0.001）；观察组总有效率为52.0%（26/50），显著高于对照组的30.0%（15/50）（χ 2=5.002， P<0.05）。 结论:DC-CIK细胞生物免疫治疗联合化疗，能诱导细胞凋亡，调节免疫功能，其疗效显著优于单纯化疗。

目的:探究髓系/淋巴系或混合谱系白血病3基因(myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia 3,MLL3)对宫颈癌细胞生长、转移、放射敏感性的影响.方法:选择60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测检测MLL3 mRNA水平.体外培养SiHa细胞,将其分为以下5组:Control组(不转染)、NC-sh组(转染阴性对照shRNA慢病毒)、MLL3-sh组(转染MLL3 shRNA慢病毒)、NC-OE组(转染阴性对照过表达慢病毒)和MLL3-OE组(转染MLL3过表达慢病毒).进一步采用2300EX直线加速器9 MeV β射线照射细胞建立放射抵抗SiHa细胞(SiHaR),然后将其分为:NC-sh组、MLL3-sh 组、8 Gy+NC-sh 组和 8 Gy+MLL3-sh 组.NC-sh 组和 MLL3-sh 组细胞不照射,8 Gy+NC-sh 组和 8 Gy+MLL3-sh 组细胞用9 MeV β射线照射8 Gy.采用MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测MLL3、共济失调毛细血管扩张征突变基因(ATM)、ATM-Rad3相关基因(ATR)、乳腺癌易感基因(BR-CA1)和RAD50双链断裂修复蛋白(RAD50)的mRNA水平;Western blot检测MLL3、Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、cleaved caspase 3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9和γ-H2AX的表达;免疫荧光染色检测γ-H2AX的表达.结果:与癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中的MLL3 mRNA水平显著降低(P＜0.001).与NC-sh组比较,MLL3-sh组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高(P＜0.05).与NC-OE组比较,MLL3-OE组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低(P＜0.05).与SiHa细胞相比,SiHaR细胞中的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P＜0.001).与8 Gy+NC-sh组比较,8 Gy+MLL3-sh组SiHaR细胞的细胞活力降低,γ-H2AX的蛋白相对表达量和γ-H2AX foci数目升高,ATM、ATR、BRCA1和RAD50的mRNA水平降低(P＜0.05).结论:宫颈癌细胞MLL3的表达下调促进了其生长和转移,但降低DNA损伤修复能力,提高宫颈癌细胞的放射敏感性.

目的 研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药肝癌细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制.方法 采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(ADM)的敏感性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测细胞P21、细胞周期蛋白B1(cyclin Bl)、细胞分裂周期蛋白2(CDC2)的蛋白表达情况;实时定量PCR检测细胞毛细血管扩张共济失调突变基因(ATM)、p53的mRNA水平,Western blot法检测细胞ATM、P53蛋白水平.结果 敲低细胞DNA-PKcs水平后,siDNA-PKcs组5-Fu、ADM的半数抑制浓度(IC50)明显降低,S期细胞减少、G2/M期细胞增多,细胞周期抑制因子P21蛋白水平增加,cyclin B1、CDC2蛋白水平降低,ATM、p53的mRNA及蛋白水平增加.结论 敲低DNA-PKcs水平,增加P21蛋白水平,同时抑制cyclin B1、CDC2蛋白水平,诱导Bel7402/5-Fu细胞G2/M期阻滞,其机制可能与ATM-p53信号途径有关.

人乳腺癌易感基因(BRCA)1和BRCA2的表达产物BRCA1和BRCA2蛋白是毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)介导的DNA损伤修复信号通路成员,对DNA双链断裂同源重组修复至关重要.BRCA突变很大程度上增加了女性罹患乳腺癌、卵巢癌的风险.但对于BRCA突变产生的非癌症影响仍旧知之甚少.近年来有研究表明BRCA突变携带的女性可能出现卵巢储备下降.若BRCA突变与卵巢储备下降存在因果关系,则不仅有助于揭示遗传参与的卵巢衰老机制,甚至提示BRCA有望作为卵巢早衰的易感因素之一,有助于卵巢早衰的早期诊断.本文就近年来国内外的相关研究,对BRCA突变和卵巢储备功能下降作一探讨.

目的 探讨肿瘤基因高通量捕获测序技术在检测肝癌细胞株体细胞突变及突变模式中的应用价值.方法 基于第二代测序技术的目标基因靶向测序技术,采用包含325个肿瘤相关基因panel的罗氏Nimble Gen定制序列捕获系统,对7种肝癌细胞株样本(HuH-7、Hep3B、SK-HEP-1、MHCC97H、MHCC97L、HepG2、HepG2.2.15)进行目标区域捕获和双端测序,并分析其DNA中的肿瘤相关突变基因及突变负荷率,比对出差异基因及突变趋势.结果 测序结果显示目标区域平均覆盖率达99.7％,平均测序深度约1 000×,共检出100个基因突变频率≥5％,包括344个非同义突变,其中有38个与癌症密切相关的突变基因富集于5条致癌信号通路:染色质重塑、Notch、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p53和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路;与肝细胞肝癌(HCC)患者体细胞突变的前期报道比较,肝癌细胞株中染色质重塑和Notch信号通路中基因突变负荷更高;3个未在HCC患者中报道的突变基因被鉴定出来,包括2个肿瘤抑制基因[MSH6、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)]和1个癌基因[间变性淋巴瘤受体酪氨酸激酶(ALK)];MHCC97来源细胞株(MHCC97H和MHCC97L)鉴定出44个突变基因,其中30个(68％)为共有突变,并富集在氧化应激通路[Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(KEAP1)],染色质重塑[核受体共抑制因子(NCOR1)、组蛋白调控基因(KMT2D)、ARID1A],Wnt/β-catenin(AXIN1、SOX9)和MAPK通路[促分裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶(MAP3 K1)、MAP2K3].ALK和白血病病毒癌基因同源物2(ERBB2)只在MHCC97L中检出突变,APOB只在MHCC97H中检出突变,Notch通路(Notch1、Notch2)在MHCC97L中突变频率较高,TERT在MHCC97H突变频率较高;HepG2和HepG2.2.15鉴定出37个突变基因,其中19个(51％)为共有突变,2个Notch通路基因(Notch1、Notch2)和染色质重塑通路[KMT2D、人锌指同源框蛋白4(ZFHX4)]在两者中具有相同突变位点和相近突变频率.肿瘤蛋白p53(Tp53)只在HepG2中检出突变,而腺瘤性息肉病基因(APC)和毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)只在HepG2.2.15中检出突变.4种来自不同HCC患者建系的肝癌细胞株(HuH-7、Hep3B、SK-HEP-1、HepG2)有不同突变模式,同一克隆来源的肝癌细胞株突变呈现较大相似性.结论 肿瘤基因高通量捕获测序灵敏度高,在肝癌细胞突变检测中具有较高应用价值.

[目的]探讨毛细血管扩张性共济失调症突变基因ATM甲基化在食管鳞癌中的表达及其意义.[方法]以正常食管组织作对照,采用重亚硫酸盐测序(BSP)联合TA克隆测序法检测40例食管鳞癌组织中ATM基因CpG岛甲基化状态;采用免疫组化(SP)法检测食管鳞癌组织与正常组织的ATM蛋白表达情况.[结果]40例原发性食管鳞癌组织中ATM基因CpG岛甲基化率为85.82％,显著高于40例癌旁正常组织的59.59％,其差异均有统计学意义(P＜0.05).在原发性食管鳞癌组织中ATM蛋白表达水平显著低于正常组织(P＜0.05).[结论]ATM蛋白表达可能与其基因CpG岛甲基化状态有关,其CpG岛高甲基化可能导致部分ATM蛋白表达沉默,是一个潜在的预后相关因子.

目的:探讨肺癌易感性与毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM) rs175048位点单核苷酸多态性(SNP)之间的相关性.方法:选取2015年10月至2016年8月在南华大学附属第一医院及衡阳市中医院就诊的汉族肺癌患者血液样本225例(病例组),同时收集在院体检的健康人血液样本128例作为对照组.采用高保真聚合酶介导的单核苷酸多态性敏感性分子开关结合PCR技术检测肺癌患者与健康体检者ATM基因rs175048A/T多态位点的多态性,统计其基因型及等位基因频率,比较其在病例组与对照组的分布差异,并且分析其与肺癌临床病理特征的相关性.结果:ATM基因rs175048多态位点的AA、AT、TT 3种基因型的频率在病例组分别为24.9%、52.9%、22.2%,对照组为42.2%、42.2%、15.6%(均P＜0.01);病例组等位基因A、T的频率为51.0%、49.0%,对照组为63.0%、37.0%(均P＜0.01);TT基因型可能会增加、而AT基因型可能减少肺癌发病风险.rs175048单核苷酸多态位点与吸烟、年龄、性别和家族史等临床病理特征明显相关(均P＜0.05).结论:ATM基因rs175048位点单核苷酸多态性与肺癌的发生明显相关,且TT基因型可以增加肺癌发病的风险.

目的 通过检测曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞EC9706的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、共济失调毛细血管扩张突变基因(atm)表达以及细胞增殖的影响,为进一步探讨TSA的辐射增敏机理提供依据.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测TSA对EC9706增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TSA处理与未处理的EC9706细胞的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、atm的mRNA水平.结果 一定浓度的TSA可显著抑制食管癌细胞EC9706的增殖,且癌细胞的相对存活率与TSA的浓度呈线性相关(P<0.05).TSA同时下调了EC9706细胞的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、atm 3个基因的mRNA水平.结论 一定浓度的TSA在体外能显著影响基因B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4和atm在EC9706细胞中的mRNA表达,可有效抑制食管癌细胞的增殖.

目的 探讨血浆miR-203a及其靶基因在胃癌患者手术前后的表达变化及其与临床病理的相关性.方法 选取在昆明医科大学第一附属医院接受手术治疗的胃癌患者和健康体检者各120例,收集胃癌患者手术前后的血浆和健康志愿者的血浆.利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血浆中miR-203a、E2F转录因子3(E2F3)、毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ATM)和转录因子蜗牛同源物2(SN AI2)的表达量.统计分析其与胃癌患者病理特征和手术疗效的相关性.结果 与健康对照组比较,胃癌患者血浆中miR-203a的表达量显著上升(P＜0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著下降(P＜0.01).手术后,miR-203a的表达量显著下调(P＜0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著上调(P＜0.05).miR-203a、E2F3、ATM和SNAI2的相对表达量与胃癌分化程度和TNM分期均显著相关(P＜0.05).miR-203a低表达组患者的术后生存率优于高表达组(P＜0.05),而E2F3、ATM和SNAI2高表达组患者的术后生存率较高.结论 胃癌患者血浆中miR-203a与其靶基因的表达呈负调控关系,手术前后表达差异显著,与临床病理特征和治疗预后有显著相关性.