目的:探讨姜黄素抑制肝细胞癌（肝癌）索拉非尼耐药作用及其调控机制。方法:采用梯度浓度加药法成功获取人索拉非尼耐药肝癌细胞株Hep3B-SR，采用姜黄素20 μg/ml干预Hep3B-SR；长链非编码RNA（LncRNA）表达谱芯片筛选姜黄素干预Hep3B-SR的相关LncRNA；qRT-PCR检测靶标LncRNA和下游相关基因CD44、MYC、JUN、FOS mRNA变化情况；构建敲低和过表达靶标LncRNA细胞株，采用细胞克隆形成实验和细胞成球实验，检测肝癌干性变化情况；CCK-8检测索拉非尼IC50值的变化情况；Western blot检测肝癌细胞干性标志物CD44及Wnt2、β-catenin、c-Myc蛋白及通路变化情况。两组细胞mRNA和蛋白表达比较采用t检验，多组肝癌细胞增殖和IC50值比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果:CCK8法检测显示，索拉非尼耐药株Hep3B-SR的平均IC50值为（8.4±1.1）μmol，明显高于Hep3B细胞的（4.0±1.1）μmol（LSD-t=16.27，P<0.001）和姜黄素（20 μg/ml）干预后Hep3B-SR+Curcumin细胞的（6.1±1.1）μmol（LSD-t=3.97，P<0.001）。LncRNA表达谱芯片及qRT-PCR检测显示姜黄素可有效上调耐药肝癌细胞中LncCCDC152的表达，通过过表达LncCCDC152后可显著下调Hep3B肝癌细胞的成球和克隆形成能力；LncCCDC152可结合转录延伸因子1（TCERG1），进而影响肝癌细胞中Wnt/β-catenin通路基因的转录活性和蛋白表达。结论:姜黄素可抑制肝癌索拉非尼耐药，可能通过上调肝癌细胞中LncCCDC152结合TCERG1蛋白靶向抑制Wnt/β-catenin通路，从而减少肝癌干性活性并抑制索拉非尼耐药。

目的:筛选肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并分析其对肝癌细胞恶性生物学特征的影响。方法:采用miRNA表达谱芯片分析肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并鉴定miRNA对肝癌干细胞恶性表型的作用。采用不同浓度(0、150、300 μmol/L)多柔比星处理细胞，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-196a表达水平的变化；分别采用肝癌干细胞来源外泌体(Exo-NC组)、转染miR-196a抑制剂处理后的外泌体(Exo-Inhibitor组)培养肝癌细胞，检测肝癌细胞的凋亡情况以及caspase3/7的活性。按照随机数字表法将裸鼠分为Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组、Do-Exo-NC组，每组各5只，采用裸鼠移植瘤实验分析miR-196a对肝癌细胞裸鼠移植瘤模型的作用。结果:本研究分离纯化了CD133 ＋ Huh7干细胞培养上清中的外泌体，发现miR-7162-3p、miR-1910-5p、miR-3613-3p、miR-196a、miR-155-5p表达上调，miR-1246和miR-3613-5p表达下调。外泌体中miR-7162-3p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的自我更新能力具有重要影响；miR-1910-5p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的侵袭能力具有重要影响，其中miR-196a的抑制效果最显著。在反应24 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为0.96±0.05、1.23±0.05和2.33±0.03，差异具有统计学意义( F＝996.90， P<0.001)；48 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为1.02±0.07、2.35±0.05和2.89±0.55，差异具有统计学意义( F＝303.00， P<0.001)。Exo-NC组肝癌细胞在多柔比星浓度为0和300 μmol/L时的细胞凋亡率分别为9.37%±0.19%和11.64%±0.27%，Exo-Inhibitor组分别为18.80%±1.91%和22.79%±1.57%，差异均具有统计学意义( t＝4.41， P＝0.048； t＝4.96， P＝0.038)。未使用多柔比星处理时，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.94±0.08和0.97±0.09，Exo-Inhibitor组分别为1.56±0.01和1.58±0.01，差异均具有统计学意义( t＝11.41， P＝0.008； t＝6.07， P＝0.026)。使用300 μmol/L多柔比星处理细胞后，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.95±0.07、1.36±0.08，Exo-Inhibitor组分别为2.84±0.08、3.20±0.14，差异均具有统计学意义( t＝24.20， P＝0.002； t＝15.78， P＝0.004)。Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组和Do-Exo-NC组3组裸鼠的移植瘤体积依次增大，分别为(1 051.86±89.90)mm 3、(1 310.91±86.66)mm 3和(2 185.14±352.34)mm 3，差异具有统计学意义( F＝30.28， P<0.001)；3组移植瘤重量依次增加，分别为(0.36±0.10)g、(0.39±0.12)g和(0.76±0.16)g，差异具有统计学意义( F＝11.81， P＝0.002)；转染miR-196a抑制剂后裸鼠移植瘤肿瘤内miR-196a的表达显著降低，3组表达量分别为1.05±0.16、0.38±0.08和2.17±0.26，差异具有统计学意义( F＝48.93， P<0.001)。 结论:肝癌干细胞分泌的外泌体可通过其中的miR-196a增强肝癌细胞对多柔比星的耐药性。

目的:观察脂筏特征蛋白2(FLOT2)在肝内胆管细胞癌中的表达，探讨FLOT2对肝内胆管细胞癌增殖，迁移的作用。方法:收集2021年9月至2022年12月郑州大学人民医院健康体检人员20例、肝内胆管结石(HL)＋肝炎(HA)患者20例和肝内胆管细胞癌患者10例共50例检测血液样本，行蛋白组学检测，结合GEPIA2数据库分析FLOT2在肝内胆管细胞癌中的表达。构建小干扰RNA(siRNA)沉默肝内胆管癌细胞HuCCT1中的目的基因，以NC-FLOT2为对照组，si-FLOT2为实验组，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测肝内胆管癌细胞中FLOT2的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力及细胞毒性，划痕愈合实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡程度，组间比较采用 t检验。 结果:蛋白组学表明在肝内胆管细胞癌患者中，FLOT2表达较正常人群升高。qPCR实验中，HuCCT1细胞NC组表达量为(0.77±0.10)，实验组表达明显下降，分别为0.29±0.09、0.15±0.01、0.11±0.02( t＝11.634、11.725、13.432， P均<0.01)。Western blot实验表明，对照组FLOT2条带灰度值为(0.91±0.03)，实验组表达降低(0.41±0.14， t＝5.160， P<0.05)。划痕实验中下调FLOT2可降低肝内胆管癌细胞迁移能力，48 h后划痕愈合率对照组为(0.89±0.09)%，实验组分别为(0.49±0.08)%、(0.50±0.06)%、(0.60±0.07)%( t＝11.170、5.626、3.838， P均<0.01)。CCK-8增殖实验对照组为5.49±0.53，实验组(4.19±0.22， t＝7.164， P<0.05；3.33±0.25、1.83±0.28， t＝10.065、10.593， P均<0.01)。凋亡实验中，实验组凋亡率[(6.92±0.89)%]，敲低FLOT2后实验组较对照组凋亡明显增多[(10.03±0.31)%， t＝－6.828， P<0.05；(12.43±0.83)%、(13.87±0.38)%， t＝－11.709、－12.101， P均<0.01]。CCK-8毒性实验表明，RBE和HuCCT1对吉西他滨的IC 50分别为(8.90±1.28)、(34.31±7.40) μg/ml，RBE对吉西他滨的IC 50明显低于HuCCT1( t＝－7.077， P<0.05)。qPCR结果表明，HuCCT1中FLOT2表达量明显高于RBE[(0.004±0.001)、(0.019±0.005)， t＝－5.187， P<0.05]。敲低FLOT2后，HuCCT1细胞株对吉西他滨的IC 50值明显降低，实验组IC 50[(7.30±0.60)、(6.52±0.61)、(7.03±1.08) μg/ml， t＝－17.173、－15.079、－18.737， P均<0.01]。 结论:FLOT2在肝内胆管细胞癌中表达升高，并影响肝内胆管癌细胞HuCCT1的增殖、迁移、凋亡和耐药能力。

目的:探索环状RNA circDLG1在肝细胞癌(HCC)生物学进程中的作用。方法:通过利用公共数据库分析circDLG1在肝细胞癌肿瘤组织及正常组织的表达水平，并利用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)在细胞水平进行验证，qRT-PCR验证短发卡RNA(shRNA)转染效率，平板克隆实验分析circDLG1对HCC细胞增殖活力的影响。利用蛋白质印迹法(Western blot)和qRT-PCR检测circDLG1对HCC糖代谢相关葡萄糖的摄取、消耗、乳酸的产生和对索拉非尼耐药的影响。采用 t检验或单因素方差分析组间差异。 结果:GSE97332公共数据库分析表明circDLG1在肿瘤组织中的表达高于正常组织组(8.632±0.861比4.833±0.357， t＝6.482， P<0.05)。qRT-PCR结果表明circDLG1在肝细胞癌(SK-Hep-1、Huh7、HepG2、HepG3B和BEL7404组)中的表达量高于HCC空白对照组(3.358±0.325、8.297±0.557、5.624±0.571、4.028±0.534、6.488±0.386比1.566±0.136， t＝6.228、8.372、7.864、6.486、6.318、7.571， P<0.05， P<0.01)。qRT-PCR验证转染shRNA可以使circRNA DLG1在HCC细胞中的表达水平低于HCC空白对照组(Hep3B：0.324±0.028、0.487±0.034比1.155±0.244， t＝11.287、9.661， P<0.01；Huh7：0.283±0.016、0.425±0.024比1.117±0.486， t＝11.498、10.087， P<0.01)，平板克隆实验和生物化学实验结果表明敲低circRNA DLG1导致HCC细胞增殖低于HCC空白对照组(Hep3B：72.300±8.400、76.800±6.200比152.300±8.200， t＝10.287、9.053， P<0.01；Huh7：46.500±4.100、52.500±7.800比173.800±9.600， t＝20.384、16.343， P<0.01)、葡萄糖的摄取低于HCC空白对照组(Hep3B：138.942±10.133比98.323±7.922、68.669±7.924比109.355±7.654， t＝12.035、14.546， P<0.01；Huh7：125.671±6.772比105.372±6.338、50.379±6.114比99.364±6.449， t＝7.286、16.825， P<0.01)、细胞外酸化率低于HCC空白对照组(Hep3B：41.261±5.338比73.615±8.933， t＝8.068， P<0.01；Huh7：44.871±8.245比69.348±9.742， t＝10.323， P<0.01)及乳酸的产生低于HCC空白对照组(Hep3B：138.664±8.669比98.637±9.774、60.258±7.864比100.236±6.883， t＝16.825、7.286， P<0.01；Huh7：142.928±8.17比106.775±5.933、82.189±7.549比104.775±6.746， t＝18.148、6.972， P<0.01)以及对索拉非尼的耐药性低于HCC空白对照组(Hep3B：26.458±7.146比49.324±2.690， t＝6.065， P<0.05；Huh7：32.651±3.228比52.374±6.270， t＝6.828， P<0.05)。 结论:circDLG1可以促进肝细胞癌细胞的增殖、糖酵解及对索拉非尼的耐药性

目的:探讨仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞的治疗疗效及其作用机制。方法:采用细胞计数试剂盒8(CCK－8)和克隆形成实验观察仑伐替尼对肝癌细胞生长的抑制作用，流式细胞术检测仑伐替尼处理后瑞戈非尼耐药肝细胞癌细胞的凋亡情况，Western blot和免疫组化染色检测相关蛋白表达水平变化，小鼠皮下成瘤实验观察仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞体内成瘤能力的抑制效果。结果:CCK－8和克隆形成实验显示，仑伐替尼能够抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的增殖能力；仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞克隆数[分别为(120.67±11.06)个、(53.00±11.14)个、(55.00±9.54)个和(78.67±14.64)个]均低于对照组[分别为(478.00±24.52)个、(566.00±27.87)个、(333.67±7.02)个和(210.00±12.77)个，均 P<0.05]。流式细胞术检测显示，仑伐替尼能够促进肝癌瑞戈非尼耐药细胞凋亡，仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞凋亡率[分别为(12.30±0.70)%、(9.83±0.38)%、(15.90±1.32)%和(10.60±0.00)%]均高于对照组[分别为(7.50±0.87)%、(5.00±1.21)%、(8.10±1.61)%和(7.05±0.78)%，均 P<0.05]。仑伐替尼处理后凋亡相关蛋白比值提示细胞凋亡能力增加。动物实验显示仑伐替尼治疗能够在体内抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的生长。免疫组化及Western blot结果显示，仑伐替尼能够下调瑞戈非尼耐药细胞中异常活化的IGF1R/Mek/Erk信号通路。 结论:仑伐替尼能够逆转肝细胞癌瑞戈非尼耐药，其机制可能是通过下调IGF1R/Mek/Erk信号通路实现。

目的:探讨谷氨酰胺酶2(GLS2)对肝胆管癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的作用及其机制。方法:TIMER数据库检索GLS2在泛癌中表达水平，通过蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组织化学检测进一步验证GLS2在胆管癌组织(2014年1月至2019年4月扬州大学附属医院苏北人民医院行胆管癌根治术患者)表达水平及临床意义。分析GLS2和P-糖蛋白(MDR1)在胆管细胞癌组织中表达相关性。运用pcDNA过表达RBE细胞株GLS2表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞对化疗药物5-Fu的化疗敏感性。组间比较采用 t检验，临床资料采用 χ2检验。 结果:在肝胆管细胞癌组织中GLS2表达显著高于正常组织(0.42±1.20比1.71±0.83， t＝2.974， P<0.05)，并且GLS2表达与肝胆管细胞癌患者肿瘤数量、有无包膜、淋巴结转移、临床分期、糖类抗原19-9明显有关( χ2＝6.17、5.84、7.15、8.24、8.21， P<0.05)。进一步分析表明GLS2表达与MDR1表达明显负相关( r＝-0.536， P<0.05)。过表达RBE细胞GLS2表达可下调MDR1表达(0.90±0.12比0.22±0.21， t＝3.213， P<0.05)，并提高RBE细胞对5-Fu化疗敏感性。 结论:GLS2通过介导MDR1表达提高肝胆管癌细胞化疗敏感性，并且GLS2的表达与肝胆管细胞癌患者恶性表型显著相关。

肝癌近年来发病率不断上升。传统细胞系培养和人源性肿瘤异种移植模型作为模拟人类肝癌发生的常用工具，加深了对肿瘤发生、发展和耐药机制的认识，但并不能反映癌细胞真实状态、肿瘤微环境以及肝癌的空间结构特征等。近年来，体外环境下建立的更具生理性的肝脏类器官已被应用于肝癌研究。肝脏类器官模型在肝癌的发生、发展机制研究，个性化药物筛选与生物标志物的发现、免疫治疗及再生医学应用等领域中实现了突破性进步。文章主要对肝脏类器官在肝癌研究中的进展及其应用进行综述。

原发性肝细胞癌是世界上常见、恶性程度很高的肿瘤之一，在中国恶性肿瘤中发病率排第5位，肝癌的各种治疗措施疗效不佳。M2型丙酮酸激酶作为糖酵解途径关键酶，它的异常表达与肝癌的增殖、转移、诊断、治疗及预后密切相关，与肝癌药物治疗的耐药和放射线抗拒也有关联，采用多种途径靶向调控肝癌细胞的M2型丙酮酸激酶，有望成为治疗原发性肝癌的一个新方向。

目的:探讨间充质干细胞(MSC)在非小细胞肺癌(NSCLC)抵抗表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)耐药过程中的作用及其机制。方法:HCC827及PC-9肺腺癌细胞与MSC共培养后给予吉非替尼处理，检测肺癌细胞凋亡变化；应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测共培养刺激后MSC细胞表达生长因子及细胞因子的情况；收集培养癌旁和远端正常肺组织来源MSC并行微小核糖核酸(miRNA)表达谱检测，并采用miRNA模拟物及抑制剂进行功能验证；此外，行聚合酶链反应微阵列分析(PCR Array)检测进一步探讨MSC调控NSCLC细胞抵抗吉非替尼的机制。两组数值间比较应用非配对 t检验。 结果:肺癌来源MSC的miR-26a表达组低于正常肺组织来源MSC的miR-26a表达组(53.3%， t＝4.626， P<0.01)，而肺癌来源MSC的miR-146a表达组高于正常肺组织来源MSC的miR-146a表达组(1.83倍， t＝4.895， P<0.01)。应用Transwell体系共培养肺癌细胞和MSC 48 h后发现，肺癌细胞(HCC827细胞)来源的miR-26a表达组明显低于MSC来源的miR-26a表达组(45.7%， t＝1.866， P<0.05)；且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的miR-26a表达组也明显低于MSC来源的miR-26a表达组(62.0%， t＝1.728， P<0.05)，同时肺癌细胞(HCC827细胞)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达组明显高于MSC来源的HGF表达组(3.88倍， t＝2.014， P<0.05);且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的HGF表达组也明显高于MSC来源的HGF表达组(5.29倍， t＝2.197， P<0.05)。此外，MSC培养液可促进HCC827细胞可高表达转运蛋白和药物代谢基因三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)(4.23倍)和细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)(2.18倍)。 结论:肺癌来源的MSC通过异常表达miR-26a和miR-146a调控促肿瘤细胞因子增强NSCLC细胞对EGFR-TKI的抗药性。

目的:探讨溶血磷脂酸酰基转移酶D（APGAT4）对肝细胞癌生长和仑伐替尼耐药的影响，为肝细胞癌临床治疗提供新的靶点。方法:TCGA数据库中分析APGAT4的表达，及其与肝细胞癌患者预后的关系；免疫组化检测APGAT4在肝癌组织的表达，并分析其表达强弱与患者预后的关系；GEO分析仑伐替尼耐药后APGAT4的表达；使用CCK8、EdU、细胞周期，细胞凋亡实验检测APGAT对肝癌细胞生长和仑伐替尼耐药的影响；使用慢病毒构建APGAT4稳定敲低细胞株并建立裸鼠皮下瘤模型，予仑伐替尼治疗，评估APGAT4对肝癌仑伐替尼疗效的影响。多组间数据比较使用方差分析。结果:APGAT4的mRNA水平和蛋白在肿瘤组织显著高于癌旁组织，提示肝癌患者预后不良（ P < 0.05）。使用小干扰RNA可以显著敲低肝癌细胞Hep3B和HCCLM3中APGAT4的mRNA和蛋白表达水平。APGAT4敲低组肝癌细胞（Hep3B、HCCLM3）与对照组相比，增殖能力明显受抑（ P < 0.05），细胞周期阻滞于G 2/M期。GEO数据分析提示APGAT4在仑伐替尼耐药细胞中表达显著上调（ P < 0.05）。与对照组相比，APGAT4敲低组肝癌细胞（Hep3B，HCCLM3）更容易被仑伐替尼诱导细胞凋亡（ P < 0.05）。此外，在肝癌裸鼠皮下移植瘤模型中，与对照组相比，仑伐替尼显著抑制APGAT4稳定敲低组肿瘤生长和诱导细胞凋亡（ P < 0.05）。 结论:APGAT4促进肝癌细胞的生长和仑伐替尼耐药，是肝癌治疗的潜在治疗靶点。靶向APGAT4治疗有助于抑制肝癌生长和仑伐替尼耐药。