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肺首次通过显像的判读
编辑人员丨6天前
患者女,14岁,近10个月间断头痛,曾有跑步后胸痛,无咳嗽、咳痰、夜间憋气等症状。患者在外院行超声心动图检查未见异常,脑血管分流检测提示发泡试验(+)。后患者于本院行动脉血气分析,结果示:pH值7.41(7.35~7.45;括号内为正常参考值范围,下同)、氧饱和度96.1%(95.0%~99.0%),氧分压76(83~108) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),二氧化碳分压34(35~45) mmHg,肺泡-动脉氧分压差35(5~15) mmHg,临床考虑低氧血症待查。低氧血症是指血液中含氧量降低,动脉氧分压低于同龄人的正常下限。常见的低氧血症原因包括肺通气障碍和换气障碍。该患者二氧化碳分压不高、肺泡-动脉氧分压差明显升高,提示肺换气功能障碍。常见的肺换气功能障碍包括弥散障碍、通气-灌注(ventilation/perfusion, V/Q)比例失调、右向左分流,以及血红蛋白亲和力异常等。弥散障碍是氧从肺泡进入肺毛细血管的过程受损,通常由肺泡或肺间质炎性反应和纤维化所致。V/Q比例失调原因可以是阻塞性肺疾病、肺血管性疾病(如肺栓塞)、肺气肿等。右向左分流是指血液从右心流向左心而未被氧合,包括解剖分流和生理性分流2种类型。若血流不经过肺泡,即存在解剖分流,见于心内分流、肺动静脉畸形、肝肺综合征、遗传性毛细血管扩张症等;而生理性分流指的是没有通气的肺泡存在血流灌注,见于肺不张、大叶性肺炎等。发泡试验是对比增强的经颅多普勒超声检查,在对患者注射手振生理盐水后,若经颅多普勒超声能够探测到其大脑动脉中气栓,即为阳性,提示存在右向左的解剖分流。该患者发泡试验(+),因此行 99Tc m-聚合白蛋白(macroaggregated albumin, MAA)肺首次通过显像(图1)及CT肺动脉造影(CT pulmonary angiography, CTPA;图2),以进一步明确右向左分流的诊断及分流程度。
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编辑人员丨6天前
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WNT1诱导信号通路蛋白1在非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制
编辑人员丨6天前
目的:探究WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的功能定位及治疗作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠购于北京维通利华公司,采取简单随机抽样法分为5组,每组10只,正常组喂养普通饲料,通过喂养高脂高胆固醇饲料14周制备NASH小鼠模型,在造模过程中分别腹腔注射IgG单克隆抗体,0.1 g/kg WISP1高亲和力单克隆抗体,0.2 g/kg WISP-1高亲和力单克隆抗体为IgG、低剂量WISP1抗体组和高剂量WISP1抗体组,每周2次,连续给药14周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖水平。苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)染色、油红O染色观察肝组织病理变化。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测小鼠肝组织中白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平。检测肝组织总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性水平,活性氧(ROS)荧光染色检测肝组织中活性氧含量;免疫组织化学(IHC)检测肝组织WISP-1、乙酰辅酶a合成酶(ACS)蛋白表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测肝组织肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1(PCG-1α)蛋白表达水平。结果:模型组小鼠血清AST、ALT、血糖水平高于正常组[(245.01±57.57) U/L比(37.28±4.23) U/L、(218.96±55.27) U/L比(49.81±10.57) U/L、(25.73±2.29) mmol/L比(8.06±0.51) mmol/L, P<0.01];模型组病理表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润、多处坏死灶;模型组小鼠肝组织炎症因子(IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α)mRNA水平高于正常组(7.49±059比1.00±0.38、5.57±3.22比1.00±0.59、4.86±3.86比1.00±0.34、10.18±3.24比1.00±0.17, P<0.01);MDA含量高于正常组[(3.75±0.40) nmol/ml比(2.22±0.24) nmol/ml, P<0.01],GSH、SOD活性低于正常组[(0.22±0.06) ng/ml比(0.49±0.15) ng/ml、(2.19±0.23) pg/ml比(4.59±0.22) pg/ml, P<0.01],ROS含量高于正常组(4.91±0.31比1.00±0.12, P<0.01);同时PGC-1α、ACS蛋白表达高于正常组[(2.19±0.084比1.00±0.09、(62.97±2.38)%比(26.72±0.73)%, P<0.01],CPT1表达低于正常组(0.55±0.01比1.00±0.13, P<0.01)。低、高剂量WISP1抗体组小鼠血清AST、ALT、血糖水平低于模型组[(65.53±25.85)、(53.49±12.22) U/L比(245.01±57.57) U/L,(73.93±23.670)、(60.88±23.38) U/L比(218.96±55.27) U/L,(20.07±2.03)、(16.46±3.71) mmol/L比(25.73±2.29) mmol/L, P<0.01],低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润、坏死程度降低,低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝组织IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA低于模型组(2.98±0.31、2.579±0.22比7.49±1.57,1.83±0.35、2.53±0.32比5.57±1.03, 1.62±0.24、1.52±0.34比4.86±1.33,2.63±0.56、2.12±0.37比10.18±2.31, P<0.05),高剂量WISP1抗体组小鼠MDA含量低于模型组[(1.83±0.694) nmol/ml比(3.70±0.50) nmol/ml, P<0.01],GSH、SOD活性高于模型组[(0.45±0.12) ng/ml比(0.22±0.06) ng/ml、(5.50±0.98) pg/ml比(2.19±0.40) pg/ml, P<0.01],活性氧含量低于模型组(0.51±0.06比4.91±0.31, P<0.01)。低、高剂量WISP1抗体组PGC-1α、ACS蛋白表达低于模型组(1.22±0.16、1.07±0.05比2.19±0.08,(33.50±3.45)%、(35.38±3.65)%比(62.97±2.38)%, P<0.01),p-AMPK、CPT1表达高于模型组(2.61±0.363、2.47±0.36比1.04±0.14,1.23±0.23、1.27±0.03比0.55±0.01, P<0.01)。 结论:抗WISP1治疗能通过激活AMPK通路,介导PGC-1α/CPT1通路改善NASH小鼠肝脏脂质代谢,减少炎症和脂质过氧化,促进肝细胞修复。
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编辑人员丨6天前
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Omega-3脂肪酸在骨科疾病中的应用
编辑人员丨6天前
近年来深海鱼油作为一种常见的营养保健品,其消费市场展现出强势的增长,随之而来的是大量对其主要的有效成分——omega-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)的基础与临床研究。本文将主要对omega-3在骨科疾病中的研究进展及应用进行综述。omega-3以其在抗炎、抗氧化、稳定细胞膜、调节代谢等多靶点、多器官的综合治疗优势,以及保健药品日常服用的预防属性,在骨质疏松、骨关节炎、脊柱脊髓损伤等多种急性、慢性骨科疾病中展现出良好的预防和治疗潜力。尤其是脂肪酸受体GPR120识别脂肪酸中不同单双键的位置,从而耦联下游不同效应器蛋白,以及omega-3激活GPR120-Gs信号通路的相关研究进展,进一步加快了高亲和力鱼油替代品的研发进程及其在骨科疾病中的应用。
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编辑人员丨6天前
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再谈盐皮质激素受体拮抗剂在慢性肾脏病治疗中的应用
编辑人员丨6天前
盐皮质激素受体的过度激活可促进氧化应激、炎性反应和纤维化,在心血管疾病和慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的发生发展中发挥了重要的作用。传统甾体类盐皮质激素受体拮抗剂因低选择性、低亲和力及组织分布带来的不良反应,限制了其临床应用。一系列针对CKD,尤其是CKD合并糖尿病患者的临床研究证实,新型非甾体型高选择性盐皮质激素受体拮抗剂非奈利酮(finerenone)可显著减少心肾终点事件的发生,有望成为治疗CKD的新手段。
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编辑人员丨6天前
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胎儿血红蛋白水平与早产儿常见并发症相关性的研究进展
编辑人员丨6天前
胎儿血红蛋白(fetal haemoglobin,HbF)是胎儿和新生儿期主要携氧蛋白,对氧的亲和力高,高比例HbF使血红蛋白-氧解离曲线左移,具有假过氧化物酶活性,能保护早产儿免受氧化应激损伤。危重早产儿常因输注含有成人血红蛋白的红细胞或医源性失血导致HbF比例下降,从而引起血红蛋白-氧解离曲线右移,使血浆中溶解氧的比例和未成熟组织暴露于氧的程度增加,由此产生的氧化应激可导致早产儿常见并发症的发生风险增加。本文主要综述HbF水平与早产儿常见并发症相关性的研究进展。
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编辑人员丨6天前
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载精氨酸心肌靶向纳米颗粒对脓毒症心肌的保护作用研究
编辑人员丨6天前
目的:制备心肌特异性多肽(PCM)修饰介孔硅纳米粒(MSN)包载精氨酸(LA)的纳米颗粒(PCM-MSN@LA),评价其对脓毒症心肌的特异性保护作用。方法:通过缩合反应制备PCM-MSN@LA,检测PCM-MSN@LA表征、LA修饰量和释放量,观察PCM-MSN@LA的细胞吞噬行为及其对组织的亲和力。①实验一:将SD乳鼠原代心肌细胞分为正常对照组(Con组)、脂多糖(LPS)组、精氨酸纳米粒组(MSN@LA/LPS组)、心肌靶向精氨酸纳米粒组(PCM-MSN@LA/LPS组)。LPS组用5 mg/L LPS刺激细胞16 h;MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组分别用含25 mg/L LA的MSN@LA及PCM-MSN@LA与LPS共同刺激细胞16 h。测定细胞活性和活性氧(ROS)产生水平;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。②实验二:按照随机数字表法将64只健康雄性C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham组)、LPS组、MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组,每组16只。LPS组腹腔注射50 mg/kg LPS;MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组腹腔注射LPS后立即经尾静脉分别注射0.5 mg/kg的MSN@LA及PCM-MSN@LA。每组8只小鼠用于观察24 h存活情况;另外8只于术后12 h用超声心动图评价心功能,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定心肌组织白细胞介素(IL-1、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达。结果:PCM-MSN@LA呈球形,粒径约180 nm,Zeta电位约-21 mV,且可负载LA,LA修饰量及释放率分别为12.3%、24.3%,细胞吞噬实验显示PCM-MSN@LA具有心肌细胞和心肌组织靶向性。实验一:LPS刺激后心肌细胞活性下降,ROS生成增多,凋亡增多,eNOS及iNOS蛋白表达增多。与LPS组比较,MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组细胞活性增高,ROS及凋亡减少,eNOS、iNOS表达增多;且PCM-MSN@LA/LPS组较MSN@LA/LPS组可进一步提高细胞活性,减少ROS产生和细胞凋亡,增加eNOS、iNOS蛋白表达〔细胞活性( A值):0.51±0.08比0.41±0.03,ROS水平(相对荧光强度):28 450±1 941比35 628±2 551,凋亡细胞/总细胞数:0.27±0.03比0.35±0.04,eNOS/β-Tubulin:1.467±0.046比1.201±0.131,iNOS/β-Tubulin:1.700±0.033比1.577±0.068,均 P<0.05〕。实验二:MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组术后24 h存活动物数多于LPS组(只:2、4比1, P值分别为0.36、0.03)。与Sham组比较,LPS组小鼠心功能明显下降,心肌组织炎性因子mRNA表达增多。与LPS组比较,PCM-MSN@LA/LPS组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)明显升高,IL-1、IL-6、TNF-α的mRNA表达明显下降〔LVEF:0.456±0.019比0.337±0.017,LVFS:(21.97±1.78)%比(15.53±1.67)%,IL-1 mRNA(2 -ΔΔCT):169.22±8.95比189.79±6.79,IL-6 mRNA(2 -ΔΔCT):19.90±1.60比23.74±1.45,TNF-α mRNA(2 -ΔΔCT):8.21±0.81比11.00±1.48,均 P<0.05〕;而MSN@LA/LPS组与LPS组各指标比较差异无统计学意义。 结论:PCM-MSN@LA具有心肌靶向性,可显著提高心肌细胞活性,下调炎性因子表达,减少ROS产生,减轻脓毒症心功能不全,从而实现脓毒症心肌损伤的靶向治疗。
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编辑人员丨6天前
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靶向白细胞介素1β纳米抗体的制备及其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响
编辑人员丨6天前
目的:制备抗白细胞介素1β(IL-1β)纳米抗体,并观察其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:利用DNA重组技术,使用pET-16b和pHEN1表达载体构建抗IL-1β纳米抗体的重组质粒(pET-16b-4G6M-VHH、pET-16b-5BVP-VHH、pET-16b-5MVZ-VHH和pHEN1-4G6M-VHH、pHEN1-5BVP-VHH、pHEN1-5MVZ-VHH,其中VHH为重链单域抗体,4G6M-VHH、5BVP-VHH、5MVZ-VHH分别为3种抗IL-1β的纳米抗体),将构建成功的质粒分别转入大肠杆菌Rosetta2(DE3)表达菌中进行诱导表达及镍柱纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹对表达产物及纯化产物进行鉴定,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其亲和力。将纯化所得亲和力最高的抗IL-1β纳米抗体(pHEN1-5MVZ-VHH)应用于小鼠HL-1心肌细胞缺氧模型(分为正常对照组、缺氧模型组、空白质粒组及12.5、25.0、50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组),并检测细胞存活率及凋亡率。结果:SDS-PAGE和Western印迹结果显示,成功得到相对分子质量约15 000的抗IL-1β纳米抗体;ELISA结果显示,与pET-16b载体组相比,pHEN1载体组所表达的纳米抗体与IL-1β抗原的亲和力更高(4G6M-VHH组:3.20±0.03比1.20±0.03, P<0.001;5BVP-VHH组:3.18±0.06比1.21±0.02, P<0.001;5MVZ-VHH组:3.38±0.05比1.62±0.04, P<0.001);细胞存活及凋亡检测结果显示,与缺氧模型组相比,25.0 μg/ml及50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组HL-1细胞活性增加[(75.55±2.23)%比(46.90±2.51)%, P<0.001;(74.36±1.96)%比(46.90±2.51)%, P<0.001],凋亡率降低[(6.83±0.27)%比(10.24±0.76)%, P<0.001;(6.68±0.38)%比(10.24±0.76)%, P<0.001]。 结论:pET-16b和pHEN1载体均能表达出抗IL-1β纳米抗体,且pHEN1载体表达的纳米抗体具有更好的抗原亲和作用。此外,pHEN1-5MVZ-VHH治疗可减少缺氧小鼠心肌细胞凋亡。
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编辑人员丨6天前
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基于髓样分化蛋白-2靶点探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制
编辑人员丨6天前
目的:以髓样分化蛋白-2(MD-2)为研究载体,探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制。方法:应用生物膜干涉技术测定熊果酸与MD-2的亲和力,基于分子对接技术测定熊果酸与MD-2的键合方式。RPMI 1640培养基培养巨噬细胞Raw 264.7,细胞密度达到80%~90%时进行传代培养,取第2代细胞进行实验,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测8、40和100 mg/L熊果酸对细胞活性的影响。将细胞分为空白组、内毒素组(LPS 100 μg/L)和熊果酸组(加入8、40或100 mg/L熊果酸后给予100 μg/L LPS处理)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)评价熊果酸对一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)等细胞因子释放的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评价熊果酸对TNF-α、IL-6、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测熊果酸对内毒素-Toll样受体4/MD-2-核转录因子-κB(LPS-TLR4/MD-2-NF-κB)通路中蛋白表达的影响。结果:熊果酸可能进入MD-2的疏水性空腔,通过疏水键与MD-2的氨基酸残基结合表现出与蛋白的较高亲和力〔解离常数(KD)=1.43×10 -4〕。随着熊果酸浓度升高,细胞活性略有降低,8、40和100 mg/L熊果酸处理的细胞活性分别为96.01%、94.32%和92.12%,与空白组(100%)比较差异均无统计学意义。与空白组比较,LPS组细胞因子水平明显升高;而8、40和100 mg/L熊果酸处理可使细胞因子水平显著下降,且浓度越高作用越明显〔100 mg/L熊果酸与LPS组比较:IL-1β(μmol/L):38.018±0.675比111.324±1.262,IL-6(μmol/L):35.052±1.664比115.255±5.392,TNF-α(μmol/L):39.078±2.741比119.035±4.269,NO(μmol/L):40.885±2.372比123.405±1.291,均 P<0.01〕。与空白组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达均明显升高,LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)和iNOS的蛋白表达明显上调。与LPS组比较,100 mg/L熊果酸与MD-2蛋白作用,可使TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达明显下降〔TNF-α(2 -ΔΔCt):4.659±0.821比8.652±0.787,IL-6(2 -ΔΔCt):4.296±0.802比11.132±1.615,IL-1β(2 -ΔΔCt):4.482±1.224比11.758±1.324,iNOS(2 -ΔΔCt):1.785±0.529比4.249±0.811,COX-2(2 -ΔΔCt):5.591±1.586比16.953±1.651,均 P<0.01〕,并显著下调LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、MyD88、p-NF-κB p65和iNOS的蛋白表达(MD-2/β-actin:0.191±0.038比0.704±0.049,MyD88/β-actin:0.470±0.042比0.875±0.058,p-NF-κB p65/β-actin:0.178±0.012比0.571±0.012,iNOS/β-actin:0.247±0.035比0.549±0.033,均 P<0.01)。但3组间NF-κB p65的蛋白表达差异无统计学意义。 结论:熊果酸抑制细胞因子和介质的释放及表达,通过阻断MD-2蛋白调控LPS-TLR4/MD-2-NF-κB信号通路,从而起到抗脓毒症的作用。
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编辑人员丨6天前
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建立基于适体-纳米金的比色生物传感器用于快速检测Lp-PLA2
编辑人员丨6天前
目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的DNA适体,并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体,利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性,并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物,利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化,分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度,建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5,解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L;并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法,其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml,反应时间30 min,可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。
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编辑人员丨6天前
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基于网络药理学预测中药在抗卡波西肉瘤血管生成治疗中的潜在有效成分及分子作用机制
编辑人员丨6天前
目的:基于网络药理学方法分析中药抗卡波西肉瘤血管生成的潜在有效成分及分子作用机制,预测中药在抗卡波西肉瘤血管生成中的关键靶点和信号通路。方法:根据既往网络药理学研究结果,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取虎杖、桑白皮、土茯苓、紫苏子的主要化学成分和靶点;通过GeneCard、OMIM、DrugBank、TTD数据库检索获取血管生成及卡波西肉瘤治疗靶点,构建韦恩图,得到卡波西肉瘤与抗血管生成药物成分相互作用的靶点;利用STRING 11.5平台构建蛋白质互作模型;应用Cytoscape3.6.0软件构建成分-靶点网络,并进行可视化。同时利用Metascape平台对核心靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。最后将得到的主要活性成分和核心靶点进行分子对接验证。结果:抗卡波西肉瘤血管生成药物的核心成分为白藜芦醇[连接度(degree)142]、槲皮素(degree:141)、山柰酚(degree:56)、木樨草素(degree:56)、β谷甾醇(degree:37)、花生四烯酸(degree:36)、柚皮素(degree:36)等,核心靶点是前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)。利用KEGG分析筛选出抗卡波西肉瘤血管生成相关的重要通路为癌症信号通路;GO分析显示在生物学过程中靶点主要集中在细胞迁移的正调控。分子对接结果显示白藜芦醇、槲皮素、山柰酚和木樨草素与PTGS2均有较好的亲和力,其中槲皮素和木樨草素与PTGS2结合能力最高,结合能分别为-9.4、-9.5 kcal/mol。结论:本研究表明中医药百科全书数据库所录入的4种中药可能通过调控癌症信号通路,作用于PTGS2等靶点发挥抗血管生成作用,从而预测了中药抗卡波西肉瘤血管生成的可能作用机制。
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编辑人员丨6天前
