目的 对12 个月份采收期枇杷叶的氨基酸成分组成及含量变化进行分析,为确定枇杷叶采收期及资源利用提供理论依据.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定不同月份枇杷叶氨基酸组成及含量;采用SPSS22.0 版软件进行数据统计学差异及相关性分析;根据世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)提出的理想模式及朱圣陶提出的氨基酸比值系数法,对不同采收期的枇杷叶氨基酸进行评分.结果 不同采收期枇杷叶中均含有17种氨基酸,7 种人体必需氨基酸(EAA)、9 种儿童必需氨基酸(CEAA)及9 种药用氨基酸.17 种氨基酸分别是天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸,它们的平均含量分别为3.41～7.23、4.64～9.66、2.05～3.75、2.99～4.95、0.01～1.56、2.33～4.85、2.10～4.03、2.67～5.48、5.37～7.64、1.45～3.49、2.70～5.53、0.01～0.48、3.64～4.78、1.91～4.15、3.96～7.83、2.39～4.60、1.85～3.65 mg·g-1.不同采收期枇杷叶中17 种氨基酸、总氨基酸(TFAA)、EAA总量、CEAA总量、药用氨基酸、苦味氨基酸的含量间差异有统计学意义(P＜0.05);苦味氨基酸在总氨基酸中的百分含量较稳定.不同采收期枇杷叶的EAA含量为44.26%～50.33%,明显高于WHO/FAO模式值(35.00%);EAA/非必需氨基酸(NEAA)均值(55.67%)和EAA/TFAA均值(35.74%)分别接近WHO/FAO模式值的60%、40%;不同采收期枇杷叶的17 种氨基酸含量峰值前2 位是7 月和11 月;氨基酸比值系数分(SRC)值为62.53～76.17,前3 位为11 月、8 月及7 月.赖氨酸为枇杷叶的第一限制氨基酸.苦味氨基酸与药用氨基酸、TFAA呈正相关(P＜0.01).结论 枇杷叶中氨基酸种类齐全,组成合理,具有较佳开发利用价值;不同月份氨基酸的含量差异大,7 月和11 月是枇杷叶氨基酸合理开发利用的较佳时期.

目的 建立测定大鼠血浆中熊果酸浓度的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,探讨熊果酸及其氨基酸酯前体药物在大鼠体内的药动学变化.方法 取雄性大鼠,经口给药70 mg·kg-1(以熊果酸含量计)的熊果酸原料药,熊果酸-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯混合液,熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯盐酸盐-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯溶液.采用沉淀蛋白法处理血浆样品,以塞来昔布作为内标,色谱柱为Acquity UPLC?BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)柱,流动相为体积分数0.025%氨水乙腈-10 mmol·L-1乙酸铵-体积分数0.1%氨水溶液(体积比70∶30),流速0.4 mL·min-1,采用大气压化学电离源,负离子多反应监测模式扫描.结果 血浆中熊果酸在质量浓度100～10 000 μg·L-1内线性良好.与原料药比较,熊果酸-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯混合液组和熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯盐酸盐-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯溶液组的熊果酸生物利用度分别提高了8.43 倍和19.52 倍(P<0.05).结论 经口给药后熊果酸在大鼠体内的生物利用度较低,前体药物熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯可提高熊果酸的经口给药生物利用度.分析方法符合生物样品的测定要求,适用于大鼠血浆中熊果酸质量浓度的测定.

目的:测定不同产地枇杷叶的氨基酸组成,并进行营养价值分析,为枇杷叶资源开发利用提供参考.方法:采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法(PITC-HPLC)测定枇杷叶中氨基酸的含量.采用SPSS 22.0 软件对各氨基酸组分、类型及海拔进行相关性分析;根据世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)提出的理想模式及氨基酸比值系数法,对不同产地枇杷叶进行营养价值分析.结果:不同产地枇杷叶均含有 17 种氨基酸,包括 7种人体必需氨基酸、9 种药用氨基酸.不同产地枇杷叶中 17 种氨基酸含量存在显著差异,必需氨基酸含量占总氨基酸的 43.85%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值平均值为 78.26%,均高于 WHO/FAO 模式值(40.00%、60.00%);SRC值为 45.38～74.74.不同产地枇杷叶的药用氨基酸与总氨基酸呈极显著正相关,苦味氨基酸与药用氨基酸、总氨基酸亦呈极显著正相关,海拔与各氨基酸(酪氨酸除外)、总氨基酸、必需氨基酸、药用氨基酸及苦味氨基酸等均无统计学意义上的正负相关.结论:不同产地枇杷叶具有较优的营养价值,但差异显著.海拔可能不是导致不同产地枇杷叶氨基酸含量差异的主要因素.

研究血府逐瘀汤对冠心病心血瘀阻证模型大鼠心肌代谢产物的影响,探讨活血化瘀法疗效机制.SD大鼠随机分为假手术组、模型组、血府逐瘀汤组(14.04 g·kg-1)、曲美他嗪组(5.4 mg·kg-1),假手术组只穿线不结扎,其余组通过冠状动脉左前降支结扎法制备冠心病心血瘀阻证模型,造模 3 d后进行药物干预,干预 14 d后取材.观察一般状态,检测心电图、心脏彩超指标,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察组织病理形态学,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,利用超高效液相色谱-质谱联用(ultra high performance liquid chromatography-quantitative exactive-mass spectrometry,UHPLC-QE-MS)技术筛选心肌组织差异代谢物,并进行代谢通路富集分析.结果表明,血府逐瘀汤可以显著改善模型大鼠的一般状态,降低心电图心率、ST段抬高幅度,升高左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS),降低左室舒张末内径(left ventricular intemal diameter in diastole,LVIDd)和左室收缩末内径(left ventricular intemal diameter in systole,LVIDs);HE染色与Masson染色显示,血府逐瘀汤可有效减轻模型大鼠的心肌组织结构紊乱、炎性细胞浸润与胶原纤维沉积;ELISA结果显示,血府逐瘀汤有效调节模型大鼠的血清TG、TC水平.各组心肌样本的代谢表型差异明显,共鉴定出血府逐瘀汤组回调的 14 种差异代谢物,涉及 5 条代谢通路,包括精氨酸和脯氨酸代谢,甘油磷脂代谢,氨酰基tRNA生物合成,醚脂代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢.血府逐瘀汤改善冠心病心血瘀阻证模型大鼠的心功能、心肌结构损伤,其生物学机制涉及调节脂质代谢、胆碱代谢、氨基酸代谢、能量代谢、蛋白质合成等相关途径.

目的 探讨快松饮防治便秘的作用机制.方法 采用复方地芬诺酯片建立小鼠和大鼠的慢传输型便秘模型.取2批小鼠,分别分为空白组,模型组,阳性对照组(麻仁软胶囊,0.64 g/kg),快松饮低、中、高剂量组(3.2、6.4、12.8 g/kg),每组10只;通过小鼠肠推进实验、小鼠排便实验考察快松饮防治便秘的效果.取大鼠分为空白组,模型组,阳性对照组(麻仁软胶囊,0.36 g/kg),快松饮低、高剂量组(2.4、4.8 g/kg),每组7或8只;每天给药1次,连续给药1周后,利用超高效液相色谱-飞行时间质谱技术对大鼠血清、尿液进行代谢组学分析.结果 与模型组比较,快松饮高剂量组小鼠墨汁推进率显著升高、5 h内排便数量显著增加(P＜0.05),快松饮中、高剂量组小鼠的首次排便时间显著缩短、5 h内排便质量显著增加(P＜0.05或P＜0.01).血清代谢组学筛选得到16个差异代谢物(如脯氨酸、丙酰基肉碱、硬脂酰溶血性磷脂酰胆碱等)和6条代谢通路(如鞘磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、鞘糖脂生物合成-乳糖和新内酯系列等);尿液代谢组学筛选得到20个差异代谢物(如前列腺素A2、L-缬氨酸、硬脂酰磷脂酰胆碱、鞘磷脂等)和8条代谢通路(如缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,鞘磷脂代谢,丙酮酸代谢等).结论 快松饮可通过回调硬脂酰溶血性磷脂酰胆碱、硬脂酰磷脂酰胆碱、前列腺素A2、L-缬氨酸、脯氨酸等差异代谢物以及调节多种氨基酸代谢途径、鞘磷脂代谢通路等来发挥改善便秘的作用.

目的:基于高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及聚类分析对市售阿胶进行质量评价,以期探索可靠的质量控制方法.方法:收集市售的10批阿胶商品药材,采用盐酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)和三乙胺柱前衍生化后进行HPLC分析.采用Welch ultimate amino acid (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93:7)、流动相B为乙腈-水(80:20),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃.经梯度洗脱,得到各批阿胶中氨基酸含量,测定不同批次阿胶药材中17种氨基酸类成分的含量;使用相似度评价软件及SPSS 21.0软件进行相似度分析和聚类分析(HCA).结果:阿胶中氨基酸衍生溶液36 h内保持稳定,17种氨基酸在线性范围内相关系数r均＞0.995,加样回收率在85.8％～120.2％;10批阿胶的氨基酸指纹图谱具有专属性,相似度均＞0.95,聚类分析结果与相似度结果相似.结论:该方法可靠,操作简便,精密度和重复性良好,可用于阿胶中17种水解氨基酸含量测定;10批阿胶中所含的氨基酸分布及比例比较稳定,将指纹图谱与聚类分析运用于不同来源阿胶的质量鉴别,可为药材特征评价方法的建立提供依据.

探讨银杏二萜内酯葡胺注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(MCAO)的保护作用,并探讨其可能的作用机制.雄性SD大鼠140只,随机分为假手术组、模型组、银杏提取物注射液(金纳多,1.0 mL· kg-1)、尼莫地平注射液(0.2 mg·kg-1)组、银杏二萜内酯葡胺注射液(5.2,2.6,1.3 mg·kg-1)组;所有动物手术前4d尾静脉注射给药(模型组及假手术组给予生理盐水).除假手术组,其他动物通过右侧大脑中动脉线栓塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型.缺血3h后,所用动物再次尾静脉注射给药.大鼠缺血再灌注后进行神经行为学评分并采用TTC染色法观察脑组织梗死率;测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、乳酸(LA)含量及脑脊液中Ca2,谷氨酸(Glu),天冬氨酸(Asp)以及磷酸肌酸激酶(CK-BB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化.与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死率显著增加,神经严重缺损;脑组织匀浆中MDA、LA含量升高,GSH、SOD含量降低;脑脊液中Ca2+浓度降低,Glu和Asp的含量及CK-BB、LDH含量显著升高.与模型组相比,银杏二萜内酯葡胺注射液高、中剂量组能显著减少脑梗死率,改善脑神经功能缺损症状;提高SOD、GSH活性,减少血清中MDA、LA含量;升高脑脊液中Ca2+浓度,减低神经递质Glu和Asp的含量及CK-BB、LDH的含量.银杏二萜内酯葡胺注射液能明显改善模型动物的神经功能缺损,其机制可能与修复血脑屏障,减少自由基,减少细胞外游离钙内流,降低脑脊液中兴奋性氨基酸含量等有关,从而保护脑缺血.

目的 观察溴氰菊酯暴露对抗性白纹伊蚊幼虫氨基酸的影响,探索溴氰菊酯毒性相关氨基酸标志物.方法 从广州市越秀区采集白纹伊蚊幼虫,实验室饲养,取F1代幼虫进行溴氰菊酯抗性测定;将抗性白纹伊蚊F1代幼虫分成药物暴露组、丙酮暴露组和空白对照组(每组10条),前两组分别用溴氰菊酯丙酮溶液和相同浓度的丙酮暴露,空白对照组不做处理;用LC-MS/MS检测三组幼虫体内的氨基酸水平,每组重复检测6次.结果 F1代幼虫LC50=0.065 mg/L,确定为抗性种群;药物组幼虫体内12种氨基酸与空白对照组出现差异(P<0.05),其中丙氨酸、瓜氨酸、酪氨酸、甘氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和苏氨酸11种氨基酸水平在暴露后降低(P<0.05),组氨酸水平在暴露后升高(P<0.05);药物组幼虫体内的丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸的变化与丙酮暴露组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 溴氰菊酯丙酮溶液暴露可导致抗性白纹伊蚊幼虫体内12种氨基酸水平改变,其中丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和瓜氨酸浓度水平降低与溴氰菊酯暴露有关.

目的:建立金边土鳖氨基酸HPLC指纹图谱分析方法,并同时定量分析了6种氨基酸成分,为制订金边土鳖的质量标准提供参考.方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)-高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,以Waters XBridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;流动相A为0.1 mol·L-1乙酸钠(pH 6.5)-乙腈(95∶5),B为乙腈-水(4∶1);检测波长254 nm;流速0.8 mL·min-梯度洗脱;柱温40℃.采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”和SPSS 22.0软件分别对其进行相似度评价和聚类分析.结果:初步建立了金边土鳖游离氨基酸HPLC指纹图谱共有模式,确定了21个共有峰,并指认了13种氨基酸成分;综合14批金边土鳖相似度分析、聚类分析和定量分析,结果显示相似度分析和聚类分析基本一致,且发现精氨酸含量的高低可能与产地有一定的关系.结论:建立了金边土鳖HPLC指纹图谱分析方法,可较全面反映该药材中氨基酸成分的信息,为金边土鳖药材鉴定和质量标准的制订提供参考.

目的:建立柱前衍生-高效液相色谱法测定金铁锁药材中的氨基酸含量.方法:以0.1 mol/L盐酸提取,105℃水解,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂衍生后进样分析.采用Venusil AA氨基酸分析专用柱,柱温:40℃.流动相A为醋酸钠缓冲液,流动相B为80％乙腈溶液,进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.结果:建立的氨基酸测定方法方法学验证结果良好,并测定了金铁锁中16种氨基酸含量,其中鲜品和干品的氨基酸含量有明显差异.结论:本方法可用于金铁锁药材的氨基酸含量测定,对其药材的质量进行评价.