目的 检测泛素化特异性蛋白酶39(ubiqutin-specific protease,USP39)在结肠癌组织中的表达情况,并分析USP39的表达水平与77例结肠癌患者的临床病理特征、生存及预后之间的相关性.方法 利用免疫组织化学技术检测结肠癌石蜡组织标本中USP39蛋白的表达情况,利用卡方分析结肠癌组织及癌旁组织中USP39的表达差异,利用Spearman秩相关分析USP39与结肠癌患者临床病理特征的相关性,利用K-M生存曲线分析USP39与结肠癌患者5年总体生存率的相关性,利用Cox风险比例模型分析USP39与结肠癌患者预后的相关性.结果 免疫组织化学结果显示USP39在结肠癌组织中的阳性率显著高于癌旁组织;Spearman秩相关分析显示USP39的表达水平与结肠癌患者TNM分期及淋巴转移情况呈正相关,而与其他临床病理特征无显著相关性;K-M生存曲线结果显示USP39阳性表达的结肠癌患者术后5年总体生存率低于USP39阴性表达的结肠癌患者(P =0.009).Cox风险比例模型结果显示USP39可作为独立判断结肠癌患者预后的分子指标.结论 USP39在结肠癌组织中表达升高,可作为预测结肠癌患者生存周期及预后的潜在分子标志物.

目的 检测泛素特异性蛋白酶39(USP39)在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达情况,并分析USP39的表达水平与85例非小细胞肺癌患者的临床病理特征的相关性,及USP39对非小细胞肺癌细胞系增殖、凋亡和周期的影响.方法 利用免疫组织化学技术检测非小细胞肺癌石蜡组织标本中USP39蛋白的表达情况,分析非小细胞肺癌组织及癌旁组织中USP39的表达差异,利用Spearman秩相关分析USP39与非小细胞肺癌患者临床病理特征的相关性,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌细胞系及支气管上皮样细胞系中USP39的表达,利用CCK-8实验检测USP39对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,利用流式细胞术检测USP39对非小细胞肺癌细胞凋亡和周期的影响.结果 USP39蛋白在非小细胞肺癌组织中的阳性率高于癌旁组织(P<0.05);USP39蛋白的表达水平与非小细胞肺癌患者TNM分期呈正相关(P<0.05),而与其他临床病理特征无相关性(P>0.05);非小细胞肺癌细胞系中USP39的表达水平高于支气管上皮样细胞(P<0.05);转染USP39 siRNA的非小细胞肺癌细胞增殖能力低于转染USP39 NC者(P<0.05);转染USP39 siRNA的非小细胞肺癌细胞早期凋亡细胞比例高于转染USP39 NC者(P<0.05),细胞周期被阻滞于G1期.结论 USP39在非小细胞肺癌中表达升高,与患者TNM分期密切相关,可促进非小细胞肺癌的增殖.

目的 观察结直肠癌组织中泛素特异性蛋白酶39 (USP39)蛋白的表达情况,以及USP39基因敲低对结直肠癌细胞系SW1116和HCT116细胞生长和细胞周期的影响.方法 ①采用免疫组织化学染色方法检测USP39蛋白在结直肠癌组织中的表达情况.②选取结直肠癌SW1116和HCT116细胞系作为研究对象,将细胞分为4组(每组5个复孔):KD-1组和KD-2组,采用慢病毒短发夹RNA (shRNA)敲低肿瘤细胞中USP39基因的表达;shCon组细胞感染阴性对照慢病毒,Con组细胞未接受任何处理.采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞的周期分布.结果 ①免疫组织化学染色结果显示,USP39蛋白在结直肠癌组织中的高表达率高于癌旁组织(P=0.007).②不管是在SW1116细胞还是在HCT116细胞中,第3、4及5天时,KD-1组和KD-2组细胞的增殖能力均明显低于shCon组和Con组(P＜0.05).③不管是在SW1116细胞还是在HCT116细胞的KD-1组中,G0/G1期细胞百分比均较Con组和shCon组降低(P＜0.05),G2/M期细胞的百分比和亚G1期细胞数均增加(P＜0.05).结论 USP39蛋白高表达于结直肠癌组织中.结直肠癌细胞系中敲低USP39基因的表达可抑制肿瘤细胞的增殖形成能力,促进肿瘤细胞早期发生凋亡.

[目的]蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis(简称球囊菌)是一种特异性侵染蜜蜂幼虫肠道的致死性真菌病原.微小RNA(microRNA,miRNA)是一种在转录后水平对mRNA进行负调控的关键调控因子.本研究旨在对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的差异表达miRNAs(DEmiRNAs)及其靶基因进行深入分析,为揭示DEmiRNAs在胁迫应答中的作用提供重要信息.[方法]利用small RNA-seq (sRNA-seq)技术对正常及球囊菌侵染的意蜂6日龄幼虫肠道(分别表示为AmCK和AmT)进行测序,通过相关生物信息学软件对DEmiRNAs进行预测和分析.利用TargetFinder软件预测DEmiRNAs的靶基因,然后利用Blast软件对靶基因进行GO和KEGG数据库的功能注释.通过Cytoscape软件构建DEmiRNAs与其靶mRNAs的调控网络.通过茎环实时荧光定量PCR(stem-loop RT-qPCR)验证测序数据的可靠性.[结果]AmCK和AmT的测序分别得到9 230 496和10 823 667条有效序列标签;AmCKvsAmT比较组中包含15个上调和6个下调miRNAs,分别结合3 503和3 252个靶基因,它们可分别注释到40和39个GO terms以及104和99条代谢通路;进一步分析发现调控网络中的17个DEmiRNAs靶向结合116个与丝氨酸蛋白酶相关的mRNAs,14个DEmiRNAs靶向结合54个与泛素介导的蛋白水解相关的mRNAs.Stemloop RT-qPCR验证结果显示随机选择的4个DEmiRNAs(miR-251-x,miR-9277-y,miR-1672-x和miR-4968-y)的表达量变化趋势与测序结果一致,表明测序数据真实可信.[结论]本研究率先对意蜂幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的DEmiRNAs及其靶基因进行预测与分析,提供了miRNAs的表达谱和差异表达信息.ame-miR-927b,miR-429-y和miR-8440-y等DEmiRNAs可能参与对丝氨酸蛋白酶的调控和对泛素介导的蛋白水解的调控,DEmiRNAs与靶基因之间存在复杂的调控网络关系.DEmiRNAs可参与到意蜂幼虫肠道与球囊菌间的互作.

目的:探讨USP39在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义.方法:收集2011～2014年郑州大学第一附属医院病理科的118例上皮性卵巢癌组织(54例卵巢浆液性囊腺癌、28例卵巢黏液性囊腺癌、19例卵巢内膜细胞癌、17例卵巢透明细胞癌)及40例卵巢良性肿瘤组织(20例卵巢浆液性囊性瘤、20例卵巢黏液性囊腺瘤)、24例正常卵巢组织的石蜡包埋组织.免疫组化法检测USP39表达,分析其表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的相关性.结果:卵巢癌组织中USP39高表达率为72.03％(85/118),与卵巢良性肿瘤(19/40)及正常卵巢组织(5/24)相比,差异有统计学意义(P<0.05).浆液性癌的USP39高表达率是85.19％(46/54),高于其他类型的癌,差异有统计学意义(P=0.032).浆液性囊腺瘤(12/20)与黏液性囊腺瘤(7/20)相比,USP39高表达率无统计学差异(P=0.113).上皮性卵巢癌中,USP39表达与患者年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(P>0.05),而与病理类型、FIGO分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05).USP39高表达、FI-GO分期及淋巴结转移是影响上皮性卵巢癌预后的独立危险因素(P<0.05).结论:USP39表达升高与上皮性卵巢癌的发生发展有关,可能成为治疗上皮性卵巢癌的新靶点和评估预后的有力指标.

目的 通过对卵圆细胞恶性转化相关差异性甲基化基因的筛选及验证,初步探索卵圆细胞发生恶性转化的表观遗传学调控机制.方法 利用简化甲基化测序(Reduced representation bisulfite sequencing,RRBS)对转染肝细胞癌基因HBV X(HBX)发生恶性转化的卵圆细胞(HBX-LE6)与正常大鼠肝卵圆细胞(LE6)进行甲基化测序,获得差异性甲基化区域(Differen-tially methylated region,DMR)与相关差异性甲基化基因(Differentially methylated gene,DMG),通过实时定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)、蛋白质印迹法(Western Blot)、甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)进行检测,验证甲基化对DMG表达的调控作用.结果 共筛选相关DMR 1434个,其中高甲基化DMR 623个(位于启动子128个);低甲基化DMR 811个(位于启动子216个),DMG共1987个.挑选启动子均存在高甲基化DMR的相关基因如泛素特异性蛋白酶18基因(USP18)、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶6(MAP3K6)、SWI/SNF染色质重塑复合物(SMARCB1)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤抑制因子(CYLD)、环指蛋白39(RNF39)、含16的锌指和BTB结构域蛋白(ZBTB16)、同源异型盒基因D8(HOXD8)进行验证.USP18、SMRCB1、CYLD、ZBTB16在LE6和HBX-LE6中的mRNA相对表达量分别为[(4.50±0.43),(2.09±0.18)]、[(7.34±0.11),(2.57±0.29)]、[(7.30±0.27),(3.44±0.13)]、[(7.01±0.06),(1.29±0.32)],与LE6相比,其在HBX-LE6中表达显著下调(P<0.05).与LE6相比,SMARCB1在HBX-LE6中的蛋白表达明显下降[(6.26±0.25)比(1.53±0.34),P<0.05].USP18、ZBTB1、CYLD的蛋白表达在三组间差异无统计学意义(P>0.05).5-Aza-CdR对HBX-LE6细胞干预后,MSP证实SMARCB1在HBX-LE6中的高甲基化被5-Aza-CdR抑制,其mRNA与蛋白表达水平均显著上调(P<0.05).结论 DNA甲基化参与卵圆细胞恶性转化的表观遗传学调控机制,DNA高甲基化下调卵圆细胞中抑癌基因SMARCB1可能参与了癌变的过程,但机制仍需要进一步研究明确.

泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin-specific protease 39,USP39)是泛素特异性蛋白酶家族的成员之一,在多种肿瘤细胞中高表达.USP39不仅能够参与剪接体的形成,参与pre-mRNAs的剪接过程,在维持纺锤体的稳定、调节细胞周期方面也起着重要的作用.USP39可以通过多种信号通路调节细胞的增殖、迁移、细胞周期阻滞、增加肿瘤细胞对化疗药物和放射的耐受性,导致肿瘤的恶性进展等.本文就USP39的生物学功能及其在肿瘤发生发展中的作用进行综述,为基于USP39的肿瘤诊断和治疗提供理论依据.

目的 探究泛素特异性蛋白酶(USP)39在胶质瘤组织及细胞中的表达变化及其作用机制.方法 收集112例胶质瘤组织样本及癌旁正常组织,采用RT-PCR检测胶质瘤组织及细胞中USP39的表达水平.进一步分析USP39表达水平与胶质瘤患者临床上病理因素之间的相关性.采用CCK-8检测USP39对胶质瘤细胞增殖能力的影响,采用Transwell小室分析其对细胞迁移和侵袭能力的影响.Western印迹分析USP39调控高迁移率族蛋白(HMG)A2的表达.结果 USP39在胶质瘤组织和细胞中显著高于正常对照组(P<0.05).USP39的表达与胶质瘤分级具有相关性(P<0.05).敲降USP39的表达显著抑制细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05).USP39调控HMGA2的表达(P<0.05).结论 胶质瘤患者中高表达的USP39通过调控HMGA2从而发挥促癌作用.

目的 研究T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)及乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)、泛素特异性蛋白酶39(USP39)与早期胃癌免疫浸润的关系.方法 选取2019年4月至2021年12月于我院行内镜下黏膜剥离术(ESD)治疗的87例早期胃癌患者,收集其术后病理组织及其癌旁组织;采用免疫组织化学法检测组织TIM-3、BAP1、USP39及CD3+、CD4+、CD8+、CD68+阳性表达,实时荧光定量PCR法检测其mRNA表达;采用Spearman法分析相关性;并比较TIM-3、BAP1、USP39阳性表达的病理参数,随访统计阴阳性表达者生存时间,COX回归分析影响预后的危险因素.结果 TIM-3、BAP1、USP39在胃癌组织中阳性表达率高于癌旁组织(P＜0.05).胃癌组织TIM-3 mRNA、BAP1 mRNA、USP39 mRNA表达量高于癌旁组织(P＜0.05).胃癌组织中CD3+、CD4+阳性率高于癌旁组织,CD8+、CD68+阳性表达率低于癌旁组织(P＜0.05).TIM-3、BAP1、USP39阳性表达在年龄、性别方面,无统计学意义(P＞0.05);在分化程度、淋巴结转移方面,具有统计学意义(P＜0.05).经Spearman分析显示,TIM-3、BAP1、USP39表达与CD3+、CD4+浸润量呈正相关(P＜0.05),与CD8+、CD68+浸润量呈负相关(P＜0.05).术后随访1年,TIM-3、BAP1、USP39 阳性表达者生存率分别为 75.68％(56/74)、73.33％(44/60)、71.43％(40/56),阴性表达者分别为 100.00％(13/13)、92.59％(25/27)、93.55％(29/31);阴阳性表达患者生存率差异有统计学意义(P＜0.05).经COX多因素分析显示,分化程度对胃癌预后无显著影响(P＞0.05),淋巴结转移、TIM-3、BAP1、USP39阳性表达为影响预后的危险因素(P＜0.05).结论 TIM-3、BAP1、USP39在胃癌组织中阳性表达率高,其表达与组织免疫浸润有关,且TIM-3、BAP1、USP39阳性表达者预后差.

背景 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的肿瘤.与大多数肿瘤相比,肺癌的治疗现状仍不容乐观,严重威胁着人类的健康.蛋白质泛素化是翻译后修饰之一,以不同的方式调节许多的细胞过程.泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin?specific?protease?39,USP39)与多种肿瘤的发生发展密切相关,但其在肺癌中的作用机制仍有待探索.目的 构建USP39稳定过表达的人肺癌A549细胞系,观察USP39过表达对肺癌A549细胞的生物学影响.方法 采用慢病毒感染法构建USP39稳定过表达的A549?USP39细胞系,并用Western?blot进行验证.利用克隆形成实验检测USP39过表达对A549细胞增殖的影响;利用划痕实验检测USP39过表达对A549细胞迁移能力的影响.结果 Western?blot结果显示,A549 USP39稳定过表达的A549细胞系构建成功.与对照组相比,克隆形成实验表明USP39稳定过表达可明显促进细胞增殖,划痕实验显示USP39过表达可显著增加A549细胞的迁移能力,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 本实验成功构建了USP39稳定过表达的A549细胞系,并初步验证USP39过表达与肺癌细胞的增殖和迁移相关.