目的:探究活性氧（ROS）/硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）信号通路在高糖诱导下人胚胎滋养层细胞焦亡变化情况。方法:体外培养人胚胎滋养层细胞，建立高糖损伤模型，分为对照组、高糖（HG）组、HG+ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（HG+NAC）组。噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率变化情况；二氢乙啶-ROS荧光探针法检测各组细胞的ROS水平；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测转染后各组细胞TXNIP和NLRP3 mRNA表达情况；蛋白免疫印迹分析法检测各组细胞TXNIP、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1和白细胞介素（IL）-1β及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、GSDMD蛋白表达水平；流式细胞术检测各组细胞焦亡情况。结果:高糖诱导人胚胎滋养层细胞损伤的最佳D-葡萄糖浓度为30 mmol/L；与对照组（96.27±3.10）%相比，HG组（55.44±2.15）%人胚胎滋养层细胞存活率显著降低（ P<0.05），7'二氯荧光素（DCF）荧光强度（ROS水平）、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著升高（ P<0.05）；与HG组相比，HG+NAC组（84.75±2.33）%人胚胎滋养层细胞存活率显著升高（ P<0.05），DCF荧光强度（ROS水平）、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著降低（ P<0.05）。 结论:抑制高糖诱导下人胚胎滋养层细胞内ROS水平，可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路，促进细胞增殖，并减少焦亡的发生。

目的:探究负载焦亡抑制剂的活性氧响应性自组装纳米胶束对糖尿病大鼠全层皮肤缺损的影响。方法:采用实验研究方法。用纳米胶束聚乙二醇-嵌段-聚丙烯硫醚（PEG-b-PPS）包封核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）1/2抑制剂（NOD-IN-1），将所得产物称为PEPS@NOD-IN-1。利用透射电子显微镜和粒度分析仪分别观测PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1的形貌和水合粒径，用酶标仪测量并计算PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率和载药率以及PEPS@NOD-IN-1在单纯磷酸盐缓冲液（PBS）和含过氧化氢的PBS中40 h内对NOD-IN-1的累积释放率，样本数均为3。取24只6~7周龄雄性SD大鼠，通过注射链脲佐菌素的方法诱导1型糖尿病，在每只大鼠背部制作6个全层皮肤缺损创面，按随机数字表法将致伤大鼠分为进行相应处理的PBS组、NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组、PEPS@NOD-IN-1组，每组6只。伤后3、7、12 d观察创面愈合情况并计算创面愈合率；伤后3 d，采用免疫荧光法检测创面组织中活性氧水平；伤后7 d，利用苏木精-伊红染色评估创面肉芽组织厚度，采用实时荧光定量反转录PCR法检测创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测创面组织中NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达。前述指标均各取各组不同鼠的共6个创面检测。另取PBS组和PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7 d创面组织（各3个样本），利用高通量测序技术平台进行转录组测序，筛选出PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的差异表达基因（DEG），进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；制作焦亡相关通路NOD样受体通路DEG热图；通过STRING数据库对热图中的DEG进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析，筛选PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、Tukey检验。结果:PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1均为大小较为均一的球形结构，水合粒径分别为（134.2±3.3）、（143.1±2.3）nm。PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率为（60±5）%、载药率为（15±3）%。PEPS@NOD-IN-1在单纯PBS中对NOD-IN-1的释放较缓慢，40 h累积释放率仅为（12.4±2.3）%；PEPS@NOD-IN-1在含过氧化氢的PBS中10 h内对NOD-IN-1的释放十分迅速，10 h累积释放率已达（90.1±3.6）%。伤后3、7 d，4组大鼠创面均逐渐愈合，PEPS@NOD-IN-1组愈合情况优于其余3组；伤后12 d，PBS组创面结痂面积较大，NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组创面上皮化明显，PEPS@NOD-IN-1组创面接近完全上皮化。与PBS组、NOD-IN-1组及PEG-b-PPS组比较，PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7、12 d创面愈合率均显著增高（ P<0.05），伤后3 d创面组织中活性氧水平显著下降（ P<0.05），伤后7 d创面肉芽组织厚度显著增厚（ P<0.05），伤后7 d创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达以及NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达均显著下降（ P<0.05）。KEGG通路分析显示，PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的DEG在NOD样受体、缺氧诱导因子、丝裂原活化蛋白激酶和肿瘤坏死因子（TNF）通路方面显著富集。在NOD样受体通路的DEG热图中，可见调控细胞焦亡的基因主要涉及 NOD1、NOD2、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 、Jun、信号转导及转录激活因子1（ STAT1）、TNF-α诱导蛋白3。PPI结果显示， NOD1、NOD2、STAT1为PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。 结论:PEPS@NOD-IN-1能下调创面局部活性氧水平及细胞焦亡关键调节因子NOD1、NOD2、GSDMD-N端的表达，进而促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复；PEPS@NOD-IN-1还可显著下调创面的焦亡、炎症及缺氧相关通路，通过下调关键基因 NOD1、NOD2、STAT1调控NOD样受体通路。

目的 研究茱萸丸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响及其相关机制.方法 采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除(low density lipoprotein receptor knockout,LDLR-/-)小鼠诱导AS模型,造模周期为12周.造模成功的50只LDLR-/-小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量(130.54、261.08、552.16mg/kg)组和阿托伐他汀(10.40mg/kg)组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组.给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、油红 O 染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;超高液相色谱串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中三甲胺(trimethylamine,TMA)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)含量;16SrRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)mRNA表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P＜0.01),HDL-C水平显著下降(P＜0.01),主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高(P＜0.01),SOD活性显著降低(P＜0.01),Chao1、Ace以及observed species指数降低(P＜0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降(P＜0.01),主动脉中ROS含量增加(P＜0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高(P＜0.01),TRX、ASC、Caspase-1mRNA表达水平升高(P＜0.01).与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P＜0.01),主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO 水平显著降低(P＜0.05、0.01),SOD 活性显著升高(P＜0.01),Chao1、Ace 以及 observed species指数均明显升高(P＜0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高(P＜0.05、0.01),厚壁菌门菌群丰度降低(P＜0.05),主动脉中ROS含量减少(P＜0.05、0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).结论 茱萸丸能够显著抑制LDLR-/-AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用.

目的 研究麻黄水提物通过活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/Nod样受体蛋白 3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用及机制.方法 雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄水提物(400 mg/kg)组、三甲胺N-氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO,110 mg/kg)组、麻黄水提物(400 mg/kg)+ TMAO(110 mg/kg)组,灌胃给药 10d后采用腹腔注射LPS(5 mg/kg)的方法建立LPS诱导ALI模型.造模后 6h,检测肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞分类,血清及BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化力(total antioxidant capacity,T-AOC)含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平.结果 模型对照组大鼠出现肺组织内炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚的病理改变,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3 的表达水平均高于正常对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于正常对照组(P<0.05).麻黄水提物组大鼠肺组织的病理改变较模型对照组改善,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3 的表达水平均低于模型对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量高于模型对照组(P<0.05).麻黄水提物+TMAO组大鼠肺组织的病理改变较麻黄水提物组加重,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于麻黄水提物组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于麻黄水提物组(P<0.05).结论 麻黄水提物可减轻LPS诱导ALI,并抑制炎症反应和氧化应激反应,其可能的分子机制与抑制ROS/TXNIP/NLRP3 通路有关.

目的 观察积雪草苷(Asiaticoside,ASI)对脑缺血再灌注(Cerebral ischemia reperfusion,CIR)大鼠皮层中核因子相关因子-2(Nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf-2)、氧还蛋白相互作用蛋白(Thiredoxin-interactive protein,TXNIP)、NOD样受体蛋白-3(Nod-like receptor protein-3,NLRP-3)通路蛋白表达水平的影响.方法 改良Longa法阻塞大脑中动脉制备CIR大鼠模型,分为CIR组、低、中、高剂量ASI组,15只/组,另取15只不插入线栓为Sham组,低、中、高剂量ASI组分别给予10、20、40 mg/mL ASI溶液灌胃,Sham组、CIR组生理盐水灌胃,容积2 mL·kg-1·d-1,连续3 d,末次给药6 h后麻醉处死大鼠,取脑组织,红四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)法检测脑梗死体积,苏木素伊红(Haematoxylin-eosin,HE)法观察脑皮层病变,免疫荧光法检测脑皮层小胶质细胞活化,试剂盒检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、总抗氧化能力及白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平,Western blot法检测脑皮层组织Nrf-2/TXNIP/NLRP-3通路蛋白表达水平.结果 Sham组大鼠脑皮层组织无损伤;CIR组大鼠脑皮层可见神经元变性、细胞萎缩及炎性细胞浸润等;低、中、高剂量ASI组大鼠脑皮层组织损伤依次减轻,高剂量ASI组仅可见个别神经细胞萎缩.与Sham组比较,CIR组大鼠脑梗死体积、脑皮层钙离子结合蛋白1(Ionized calcium binding a-dapter molecule 1,Iba1+)活化小胶质细胞、ROS及IL-1β水平、TXNIP、斑点样蛋白(Apotosis-associated speck-like protein,ASC),NLRP-3及天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase-1)蛋白表达水平升高(P均<0.05),总抗氧化能力、Nrf-2核移位及血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平降低(P均<0.05);与CIR组比较,低、中、高剂量ASI组大鼠脑梗死体积、脑皮层Iba1+活化小胶质细胞、ROS及IL-1β水平、TXNIP,ASC,NLRP-3及Caspase-1蛋白表达水平剂量依赖性降低(P均<0.05),总抗氧化能力、Nrf-2核移位及HO-1蛋白表达水平剂量依赖性增高(P均<0.05).结论 ASI可促进脑皮层中Nrf-2通路蛋白表达,降低氧化应激,抑制TXNIP/NLRP-3通路蛋白表达,抑制IL-1β等释放,减轻小胶质细胞活化,改善CIR所致大鼠脑损伤.

目的 从炎症小体活化和活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)通路考察牛舌草总黄酮(total flavonoids of Anchusa italica Retz.,TF)抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制.方法 小鼠采用冠状动脉左前降支结扎模型模拟心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤.将模型制备成功的30只小鼠随机分为模型组(L/R)、TF 30 mg·kg-1处理组(I/R+ TF30)和100 mg·kg-1处理组(I/R+ TF100),再灌同时给予生理盐水、TF.于再灌注24 h时,检测小鼠心功能,测定心肌梗死范围和血清心肌酶谱,心肌冰冻切片染色观察活性氧(ROS)水平,Western blotting分析NLRP3炎症小体活化以及TXNIP与NLRP3相互作用的变化.结果 TF在剂量为30和100 mg·kg-1时均可改善心功能,减少心肌梗死范围,降低血清心肌酶水平.另外,TF处理减少心肌炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)α含量,降低心肌ROS水平.TF在30和100 mg·kg-1均显著降低TXNIP、NLRP3、cleaved caspase-1和cleaved IL-1β,并抑制TXNIP/NLRP3相互作用.结论 牛舌草总黄酮通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路,从而减轻NLRP3炎症小体活化,发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用.

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对辐射诱导的小鼠肾脏损伤的防护作用及其硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路机制.方法:将小鼠分为正常对照组(Control)、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组、辐射组(IR)、20 mg/kg AS-IV预防组(IR+AS-20 mg/kg)和40 mg/kg AS-IV预防组(IR+AS-40 mg/kg),每组各20只.IR+20 mg/kg和IR+40 mg/kg组小鼠每天分别于腹腔注射20 mg/kg、40 mg/kg的AS-IV;DMSO组和IR组于腹腔注射体重对应的DMSO;Control组腹腔注射生理盐水.腹腔注射一个月后,IR、IR+20 mg/kg和IR+40 mg/kg组小鼠接受8 Gy的60Coγ辐射,总时长7 min,并于辐射完5d后采集肾脏组织,检测其形态学变化、活性氧(ROS)水平、TXNIP和NLRP3蛋白的表达部位及TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达情况.结果:与DMSO组相比,辐射组小鼠肾小球和肾小管表现出明显的病理学特征,ROS水平显著升高,TXNIP及NLRP3蛋白阳性表达于各级肾小管上皮细胞且TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白TXNIP、N LRP3、半胱氨酸天冬酶1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)的表达显著升高(P＜0.01);与IR组相比,40 mg/kg的AS-IV预防能明显改善辐射所致的病理反应,显著降低ROS水平和TXNIP、NLRP3的阳性表达,TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达显著减少(P＜0.01或P＜0.05).结论:40 mg/kg的AS-IV给药可显著抑制辐射诱导的肾脏病理变化及ROS的产生,并通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路发挥肾脏保护作用.

目的 考察牛舌草总黄酮(TF)抗心肌缺血再灌注(I/R)损伤作用及其机制,探讨炎症小体活化和活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)通路是否参与其中.方法 采用冠状动脉左前降支结扎制备小鼠I/R损伤模型.将模型制备成功的30只小鼠随机分为I/R模型组和I/R+TF(30和100 mg·kg-1)处理组,再灌同时给予生理盐水或TF.于再灌注24 h时,检测小鼠心功能,测定心肌梗死范围和血清心肌酶谱,心肌冰冻切片染色观察ROS水平,Western印迹法分析NLRP3炎症小体活化以及TXNIP与NLRP3相互作用的变化.结果 TF 30和100 mg·kg-1均可明显改善心功能,减少心肌梗死范围,降低血清心肌酶水平.另外,TF处理减少心肌炎症因子IL-1β,IL-6和TNFα含量,降低心肌ROS水平.TF 30和100 mg·kg-1均显著降低TXNIP、NLRP3、活化的胱天蛋白酶1和活化的IL-1β,并抑制TXNIP与NLRP3相互作用.结论 TF通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路减轻NLRP3炎症小体活化,从而发挥抗心肌I/R损伤作用.

目的:通过观察大黄泄浊方对5/6肾切除大鼠肾脏病理变化,肾组织活性氧(ROS)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路表达的变化,研究其保护肾功能,延缓肾间质纤维化的作用机制及可能性.方法:90只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄泄浊方低、中、高剂量(6.825、13.65、27.30 g·kg-1)组和尿毒清颗粒(2.60g·kg-1)组.除假手术组外其余5组均采用5/6肾切除术复制CRF大鼠模型.造模成功后,各给药组分别给予相应剂量的药物混悬液灌胃,每日1次,连续8周.给药结束后,检测大鼠血清中肌(酑)(SCr)、尿素氮(BUN)水平和24 h尿蛋白定量(UTP)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测硫氧还蛋白(TRX)、TXNIP和NLRP3蛋白的表达情况;免疫组化法检测NLRP3、TRX、TXNIP、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和调纤连蛋白(FN)的表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠血SCr、BUN、24 h UTP水平明显增高(P＜0.05),TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著增高(P＜0.01),肾间质发生显著纤维化;与模型组比较,大黄泄浊方各剂量组和尿毒清颗粒组血SCr、BUN、24 hUTP水平均有不同程度降低(P＜0.05),TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著降低(P＜0.01),肾间质纤维化不同程度改善.结论:大黄泄浊方可保护慢性肾衰竭大鼠肾功能、延缓肾间质纤维化.