目的:探讨单精子测序技术在植入前胚胎结构异常遗传学检测中区分携带者的应用价值.方法:针对1 例罗氏易位携带者45,XY,der(13;14)(q10;q10)应用单精子分离结合单精子测序技术完成单倍型的构建,用机械制动法分离20 份单精子样本并进行全基因组扩增(WGA),再利用ASA基因芯片对WGA产物进行全基因组183 708个单核苷酸多态性(SNP)位点检测,通过CNV测序检测出与易位相关且可作为单体型推断的单精子,推断亲本正常及携带罗氏易位的染色体单倍型.将 3 份胚胎滋养层细胞活检样本作为对象,在完成全基因组扩增后,通过高通量测序进行检测,判断胚胎携带易位染色体的情况,选取可用囊胚进行移植,于孕 18 周抽取羊水样本,确认胎儿是否携带致病变异.结果:通过单精子测序共筛选出6 037个SNP位点,挑选出30 个可区分正常与易位单体型位点成功构建单体型,植入前单体型分析提示 3 枚胚胎均为不携带罗氏易位染色体的整倍体胚胎,妊娠中期羊水基因检测证实胎儿核型为46,XN,未携带罗氏易位染色体.结论:对于男性罗氏易位携带者,可通过单精子测序筛选SNP位点构建单体型,用于区分正常和罗氏易位携带者胚胎,为胚胎植入前染色体结构遗传学检测胚胎选择提供依据.

目的:探讨胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing，PGT）中滋养外胚层细胞活检对冻融胚胎移植后妊娠早期血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotropin，β-hCG）水平及围产期结局的影响。方法:回顾性队列研究分析2017年1月至2021年12月期间于郑州大学第三附属医院生殖中心行冻融胚胎移植患者的临床资料，根据患者助孕方式分为两组：PGT组308例和卵胞质内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）组802例。经1∶2倾向评分匹配后，得到PGT组300例和ICSI组571例。比较匹配前后两组患者一般资料、胚胎移植后第14天血清β-hCG水平及围产期结局，采用多因素线性回归校正混杂因素后，分析滋养外胚层细胞活检对冻胚移植后妊娠早期血清β-hCG水平及围产期结局的影响。结果:匹配前PGT组女方年龄［（31.2±4.1）岁］明显高于ICSI组［（30.4±4.3）岁， P=0.007］，PGT组抗苗勒管激素水平［（4.38±3.62）μg/L］及移植日内膜厚度［（9.1±1.6）mm］明显小于ICSI组［（4.87±3.78）μg/L， P=0.049；（9.6±1.6）mm， P<0.001］；匹配后两组患者一般资料差异均无统计学意义（均 P>0.05）。匹配前后两组患者临床妊娠患者、早期流产患者及活产患者的胚胎移植后第14天血清β-hCG水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）；匹配前后两组生化妊娠率、临床妊娠率、早期流产率及活产率差异均无统计学意义（均 P>0.05）。经多因素线性回归分析显示，是否行PGT对血清β-hCG水平没有影响（ P=0.494），女方体质量指数及移植囊胚类型对β-hCG水平有影响（均 P<0.001）。两组妊娠期高血压疾病发生率、妊娠期糖尿病发生率、妊娠期甲状腺功能减退发生率、胎膜早破发生率、前置胎盘发生率、剖宫产率、早产率、低出生体质量儿率、巨大儿率、性别比、新生儿出生体质量、新生儿身长与新生儿出生缺陷率差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:冻融胚胎移植前行滋养外胚层细胞活检不影响妊娠早期血清β-hCG水平，PGT不增加母婴不良并发症发生风险。

目的:分析囊胚形态学评价参数包括囊胚发育天数（第5天和第6天）、囊胚扩张程度（4、5、6）、内细胞团和滋养外胚层分级对体外受精/卵胞质内单精子注射（ in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection，IVF/ICSI）助孕新鲜或冻融单囊胚移植后稽留流产绒毛染色体核型异常发生的影响。 方法:纳入2015年2月至2023年2月期间于郑州大学第三附属医院生殖医学中心行IVF/ICSI助孕新鲜或冻融单囊胚移植后稽留流产患者的临床数据及绒毛染色体拷贝数变异（copy number variations，CNVs）的检测结果。采用病例对照研究，根据流产组织绒毛染色体CNVs检测结果将数据分为两组：异常染色体核型组（ n=139）和正常染色体核型组（ n=82），比较两组患者的基线数据。应用单因素logistic回归分析囊胚形态学评价参数对流产组织绒毛染色体核型异常发生的影响，同时应用多因素logistic回归调整男方年龄、精子正常形态率和女方年龄混杂因素。 结果:基线数据中，异常染色体核型组男方年龄［（34.12±6.49）岁］、精子正常形态率［5.00（4.00，6.00）%］和女方年龄［33.00（30.00，37.00）岁］高于正常染色体核型组［（32.38±4.69）岁、4.00（2.00，5.00）%和31.50（29.00，34.00）岁］，差异均具有统计学意义（ P=0.022、 P=0.020、 P=0.009）。单因素和多因素logistic回归分析数据显示，囊胚发育天数、扩张程度、内细胞团和滋养外胚层等级均没有增加绒毛染色体核型异常发生的风险（均 P>0.05）。 结论:囊胚形态学评价参数与IVF/ICSI助孕新鲜或冻融单囊胚移植后稽留流产绒毛染色体核型异常无明显相关性。

目的:探究多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）小鼠卵母细胞中miR-320-3p低表达对胚胎发育潜能的影响，并初步探讨相关分子机制。方法:脱氢表雄酮皮下注射法构建40只PCOS小鼠模型，40只对照组小鼠注射等量油剂。通过发情周期变化和卵巢组织苏木素-伊红染色，评估模型构建效果，超数排卵获取模型鼠的M II期卵母细胞，胞质内注射miR-320-3p模拟物（miR-320-3p mimics）或阴性对照物（negative control，NC），分为对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组。①通过qRT-PCR方法检测三组小鼠M Ⅱ期卵母细胞中miR-320-3p的表达；②三组M Ⅱ期卵母细胞行卵胞质内单精子注射，收集双原核（two pronuclei，2PN）受精卵进行体外培养，于受精后48 h、84 h记录4-细胞期胚胎和囊胚的数量。③三组囊胚分别进行滋养外胚层分子标志物CDX2染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法细胞凋亡检测，统计各组总细胞数、滋养外胚层（trophectoderm，TE）细胞数、内细胞团（inner cell mass，ICM）细胞数和凋亡细胞数；④通过qRT-PCR方法检测三组4-细胞胚胎中miR-320-3p的靶基因（ Ulk1、 Pbx3、 Kdm5b、 Satb2）及发育相关基因（ Pou5f1、 Myc、 Klf4、 Ago2、 Dppa3、 Wdr5）的表达变化。 结果:①qRT-PCR显示，与对照+NC组相比，PCOS+NC组小鼠卵母细胞中miR-320-3p表达相对下调，差异具有统计学意义（ P=0.009）；PCOS+miR-320-3p mimics组中miR-320-3p表达量显著多于PCOS+NC组（ P=0.002）；对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间差异无统计学意义（ P=0.146）。②对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组的4-细胞率组间差异均无统计意义（均 P>0.05）；三组囊胚形成率分别是75.89％（85/112）、59.22％（61/103）、72.64％（77/106），与对照+NC组相比，PCOS+NC组囊胚率显著降低（ P=0.009）；与PCOS+NC组相比，PCOS+miR-320-3p mimics组囊胚率显著升高（ P=0.041）。③对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+miR-320-3p mimics组囊胚的总细胞数分别是85.81±9.26、67.29±7.07、82.71±8.40，TE细胞数分别是69.19±7.01、52.38±6.34、65.38±8.30，ICM细胞数分别是17.62±3.60、14.90±2.39、17.29±3.90，凋亡细胞数分别是8.64±2.80、11.73±2.07、9.55±2.81，凋亡率分别是9.64%±2.78%、16.68%±2.81%、11.18%±2.61%。对照+NC组囊胚的总细胞数、TE及ICM细胞数均显著多于PCOS+NC组（ P<0.001、 P<0.001、 P=0.011），凋亡细胞数、凋亡率均显著低于PCOS+NC组（均 P<0.001）；PCOS+miR-320-3p mimics组总细胞数、TE及ICM细胞数也均显著多于PCOS+NC组（ P<0.001、 P<0.001、 P=0.025），凋亡细胞数、凋亡率均显著低于PCOS+NC组（ P=0.007、 P<0.001）。对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间囊胚的总细胞数、TE及ICM细胞、凋亡细胞数、凋亡率差异均无统计学意义（均 P>0.05），三组TE/ICM的比值组间差异无统计学意义（ P>0.05）。④与对照+NC组相比， Ulk1、 Pbx3、 Myc、 Dppa3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中相对表达下调（ P=0.012、 P=0.002、 P<0.001、 P=0.001）， Kdm5b、 Satb2相对表达上调（ P<0.001、 P<0.001）；与PCOS+miR-320-3p mimics组相比， Ulk1、 Pbx3、 Myc、 Dppa3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中相对表达下调（ P=0.005、 P=0.001、 P=0.001、 P=0.004）， Kdm5b、 Satb2相对表达上调（ P<0.001、 P=0.001），对照+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组组间差异均无统计学意义（均 P>0.05）；与对照+NC组相比， Wdr5在PCOS+NC组和PCOS+miR-320-3p mimics组中相对表达均上调（ P=0.001、 P=0.003），PCOS+NC组与PCOS+miR-320-3p mimics组中差异无统计学意义（ P>0.05）。 Pou5f1、 Klf4、 Ago2在三组间差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:PCOS小鼠卵母细胞中miR-320-3p低表达影响胚胎植入前的囊胚形成率和囊胚质量，PCOS卵母细胞中补偿miR-320-3p能够改善胚胎发育潜能，提高胚胎质量。

目的:研究胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing， PGT）周期中，卵裂期（第3日）胚胎质量、囊胚活检时间、囊胚扩张程度、囊胚内细胞团（inner cell mass， ICM）评分及囊胚滋养层（trophectoderm，TE）评分对其整倍体状态的影响。方法:回顾性病例对照分析郑州大学第三附属医院生殖医学科2017年1月至2019年10月期间255个行PGT助孕周期的患者临床资料，分析囊胚相关形态学参数与整倍体状态的相关性。结果:①977枚囊胚进行活检，共937枚囊胚成功获得染色体结果（95.9%），其中整倍体396枚（42.3%），非整倍体541枚（57.7%）。②在夫妻双方有染色体异常的周期中，633枚囊胚整倍体率与女方年龄未呈现明显相关趋势，无染色体异常的周期中304枚囊胚整倍体率随着女方年龄的增加呈显著下降趋势（ P=0.000 1）。③校正女方年龄及不同周期的影响后，第6日、第7日活检囊胚整倍体率显著低于第5日活检囊胚（ OR=0.7， 95% CI=0.5~0.9， P=0.009 1； OR=0.4， 95% CI=0.1~0.6， P=0.001 2）；ICM级别为B的活检囊胚整倍体率显著低于级别为A的囊胚 （OR=0.4， 95% CI=0.3~0.7 ， P=0.000 1）；TE级别为C的活检囊胚整倍体率显著低于级别为A的囊胚（ OR=0.4， 95% CI=0.2~0.7， P=0.000 4）。但囊胚扩张程度及已经形成囊胚后第3日胚胎质量对囊胚整倍体率无显著影响。 结论:形成囊胚后第3日胚胎质量、囊胚扩张程度与囊胚整倍体状态无关，活检时间、ICM级别及TE级别与整倍体状态显著相关。

目的:探讨移植囊胚数、质量及形成时间对<38岁女性冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer，FET）临床结局的影响。方法:回顾性队列研究分析2017年1月至2020年1月期间在中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院生殖中心行冻融囊胚移植且年龄<38岁女性1441个周期的临床资料。根据囊胚移植数、质量［内细胞团 （inner cell mass，ICM）、外胚滋养层细胞 （trophectoderm， TE）评分］分为单优质囊胚移植组（单优组）、双优质囊胚移植组（双优组）；再根据囊胚移植数、质量及形成时间将非优质囊胚分为双BC级囊胚移植组（双BC组）、双CB级囊胚移植组（双CB组）、BC级+CB级双囊胚移植组（BC+CB组）、单BC级囊胚移植组（单BC组）、单CB级囊胚移植组（单CB组）、第5日（day 5， D5）单BC级囊胚移植组（D5 单BC组）、D5单CB级囊胚移植组（D5 单CB组）及第6日（day 6， D6）单BC级囊胚移植组（D6 单BC组），比较各组的临床妊娠率、种植率、早期流产率、多胎妊娠率和异位妊娠率。结果:单优组的临床妊娠率、早期流产率、异位妊娠率与双优组间差异均无统计学意义（ P均>0.05），多胎妊娠率［2.96%（14/473）］则显著低于双优组［55.65%（69/124）］、双BC组［42.55%（20/47）］、双CB组［63.49%（473/745）比35.22%（31/83）］、BC+CB组［45.57%（36/79）］（ P<0.001）；单优组的临床妊娠率和种植率显著高于单CB组［63.49%（473/745）比45.59%（30/68）， 63.49% （473/745）比 45.59%（30/68）， P均=0.002］，与单BC组间差异无统计学意义（ P>0.05），各单囊胚移植组间多胎妊娠率、早期流产率、异位妊娠率差异均无统计学意义（ P均>0.05）；D5 单BC组的临床妊娠率、种植率均显著高于D6 单BC组［65.79%（50/76）比39.47%（15/38），65.79%（50/76）比 39.47%（15/38）， P均<0.001］；D5 单CB组的临床妊娠率、种植率均高于D6 单BC组，但差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:冻融囊胚移植周期，年龄<38岁女性应行单优质囊胚移植；无优质囊胚时，应优先选择D5 ICM评分更高的单囊胚移植，其次选择D5 TE评分更高的单囊胚移植。

目的:评估时差成像培养系统（time-lapse imaging，TLI）对小鼠胚胎发育潜能及组蛋白表观修饰的影响。方法:选择SPF级雌性ICR小鼠，促排卵后取成熟M Ⅱ卵子进行体外受精（ in vitro fertilization，IVF），获取成功受精的合子，分别在TLI和常规培养体系（standard incubators，SI）中进行体外培养，记录两组胚胎的2-细胞率、4-细胞率、8-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵出率。通过Hoechst、OCT4及CDX2抗体进行免疫荧光染色，分别统计囊胚细胞总数、内细胞团数和滋养外胚层细胞数。两组囊胚移植入第2.5天代孕母鼠子宫，统计植入率及活胎率。通过对组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化（H3K9me2）和组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）的免疫荧光染色，评估两组胚胎组蛋白表观修饰情况。 结果:TLI组和SI组的早期胚胎发育情况、内细胞团和滋养外胚层细胞数、植入率和活胎率比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。两组囊胚的组蛋白H3K4me3、H3K9me2和H3K9ac的表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:利用TLI体外培养不会影响胚胎的发育潜能以及组蛋白修饰。

染色体嵌合型(CM)是胚胎植入前遗传检测(PGT)中可观察到的普遍现象。CM胚胎中滋养外胚层(TE)细胞的遗传状态不一定与未来发育成为胎儿的内细胞团(ICM)相同。部分低比例CM胚胎移植后仍能获得健康活产儿，但是其具有较高流产率等妊娠风险。为了对CM胚胎有更加全面的认识，本文拟就CM胚胎的定义、发生机制、分类、PGT技术、自我纠正机制、移植结局及处理原则等最新研究进展进行系统性阐述。

目的:探究活性氧（ROS）/硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）信号通路在高糖诱导下人胚胎滋养层细胞焦亡变化情况。方法:体外培养人胚胎滋养层细胞，建立高糖损伤模型，分为对照组、高糖（HG）组、HG+ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（HG+NAC）组。噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率变化情况；二氢乙啶-ROS荧光探针法检测各组细胞的ROS水平；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测转染后各组细胞TXNIP和NLRP3 mRNA表达情况；蛋白免疫印迹分析法检测各组细胞TXNIP、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1和白细胞介素（IL）-1β及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、GSDMD蛋白表达水平；流式细胞术检测各组细胞焦亡情况。结果:高糖诱导人胚胎滋养层细胞损伤的最佳D-葡萄糖浓度为30 mmol/L；与对照组（96.27±3.10）%相比，HG组（55.44±2.15）%人胚胎滋养层细胞存活率显著降低（ P<0.05），7'二氯荧光素（DCF）荧光强度（ROS水平）、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著升高（ P<0.05）；与HG组相比，HG+NAC组（84.75±2.33）%人胚胎滋养层细胞存活率显著升高（ P<0.05），DCF荧光强度（ROS水平）、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著降低（ P<0.05）。 结论:抑制高糖诱导下人胚胎滋养层细胞内ROS水平，可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路，促进细胞增殖，并减少焦亡的发生。

利用滋养外胚层（TE）细胞活检对植入前胚胎进行遗传学筛查已经有20多年的历史，但其在选择整倍体胚胎方面的优势仍然存在争议。近年来，胚胎废弃培养液中游离脱氧核糖核酸（cfDNA）的发现，为获得胚胎的细胞遗传学信息提供了一种潜在的无创替代方法。有研究报道胚胎cfDNA分析与TE、内细胞团（ICM）和整个囊胚（WB）的活检结果高度一致。然而，在cfDNA成为可靠的胚胎基因组信息来源应用于临床之前，仍然面临很多挑战。本文综述了基于培养液中的cfDNA的无创胚胎植入前遗传学检测（niPGT）的产生和现状，并对其局限性和未来前景进行了探讨，为niPGT应用于临床提供参考。