旨在探讨哌立福新对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响及其作用机制。本研究通过24孔板静置孵育24 h培养铜绿假单胞菌生物膜，再通过结晶紫染色法检测哌立福新对铜绿假单胞菌培养基底部生物膜的抑制作用，将未加哌立福新的孔设置为对照组；通过玻璃试管静置孵育24 h构建气-液交界面生物膜，并通过结晶紫染色法检测哌立福新对铜绿假单胞菌气-液交界面生物膜形成的影响，将未加哌立福新的孔设置为对照组；将铜绿假单胞菌重悬于含有系列浓度的哌立福新培养基中，置于恒温摇床，连续检测其生长浊度随时间的变化，绘制时间-生长曲线，检测哌立福新对铜绿假单胞菌浮游菌增殖的影响，将未加哌立福新的孔设置为对照组；通过分子对接中的Glide超精确模式将哌立福新与PqsE蛋白进行柔性对接，预测哌立福新与靶蛋白PqsE的结合力及结合模式；通过检测PqsE蛋白的催化底物硫醇的生成量，验证哌立福新对PqsE蛋白催化功能的抑制能力，将未加哌立福新的孔设置为对照组；最后，通过等离子表面共振试验，验证哌立福新与PqsE蛋白的结合能力。结果显示，与未加哌立福新的对照组相比较，4~8 μg/ml的哌立福新可有效抑制铜绿假单胞菌培养基底部和气-液交界面生物膜的形成；哌立福新对铜绿假单胞菌浮游菌的增殖无影响；分子对接试验提示哌立福新与PqsE蛋白具有良好的结合力，对接分数为-10.67 kcal/mol；哌立福新还能有效抑制PqsE蛋白的催化功能，与未加哌立福新的对照组相比，随着哌立福新浓度增高，PqsE蛋白酶受抑制程度越高；通过等离子表面共振试验发现PqsE蛋白与哌立福新具有良好的结合能力，且其结合常数为6.65×10 -5 mol/L。综上，哌立福新可结合PqsE蛋白，干扰PqsE蛋白的催化功能并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成。

通过高通量药物库筛选挖掘针对金黄色葡萄球菌（ S. aureus，简称：金葡）的新型抗菌药物。本研究的类型为实验性研究。金葡临床菌株均于2017年1月至2019年1月分离自中南大学湘雅三医院呼吸科住院患者的痰液标本；通过摇菌培养浮游菌，检测美国食品药品监督管理局（FDA）认证药物库（包含1573种小分子）对金葡浮游菌增殖抑制作用；通过96孔板结合结晶紫染色，检测FDA认证药物库分子对金葡生物被膜形成的抑制作用；通过微量肉汤稀释实验，检测纳入小分子的最低抑菌浓度（MIC）；最后，通过CCK-8实验检测小分子药物的细胞毒性。结果显示，通过将FDA认证药物库中的小分子浓度设置为100 μmol/L，初步筛选出218种对金葡浮游菌具有生长抑制作用的小分子。这些小分子以抗感染药物为主，占118种。其次为抗肿瘤药物、抗炎/免疫类药物、神经系统药物、心血管系统药物、内分泌系统药物和代谢疾病药物，分别占40、19、12、9、8和3种，未分类药物占9种。排除抗感染药物后，针对具有金葡浮游菌生长抑制作用排名前十的小分子主要为抗肿瘤药物，其次为神经系统药物和未分类药物维生素K3，其抑制率均达99.65%~100%。针对具有金葡生物被膜抑制作用的排名前十小分子也以抗肿瘤药物占比最高，其次为神经系统药物和抗炎/免疫类药物，其抑制率为50.22%~92.95%。通过微量肉汤稀释实验检测了第二轮筛选得到的51个小分子的MIC。其中，主要包括抗肿瘤药物、心血管系统药物、内分泌系统药物、抗炎/免疫药物、代谢疾病药物、神经系统药物和其他未分类药物，分别占22、5、3、9、2、5和5种，其MIC分布分别为1.56~50 μmol/L、6.25~25 μmol/L、6.25~25 μmol/L、0.2~50 μmol/L、25~50 μmol/L、1.56~50 μmol/L和0.1~12.5 μmol/L。综上，通过高通量药物库筛选出的小分子最低抑菌浓度值均为微摩尔级别，成药能力强且可改造性高。其高效的浮游菌和生物被膜抗菌作用有望为针对金葡的新药研发提供新的思路。

患者男，34岁。因左眼视力下降2年于2020年7月到北京协和医院眼科就诊。2018年7月，患者曾因左眼红、痛、视力下降在当地医院诊断为"左眼葡萄膜炎"，测得房水巨细胞病毒（CMV）-免疫球蛋白G（IgG）、单纯疱疹病毒（HSV）-IgG、水痘-带状疱疹病毒（VZV）-IgG、风疹-IgG均为阳性；白细胞介素（IL）-6、IL-8、IL-10及血管内皮生长因子（VEGF）水平升高，给予眼局部及口服糖皮质激素治疗效果不佳。2019年3月接受左眼玻璃体切割手术治疗，最佳矫正视力（BCVA）由0.08提高至0.5。5个月后患者左眼视力再次下降至眼前数指，于外院行白内障超声乳化、人工晶状体植入及玻璃体腔灌洗手术，玻璃体液病毒、细菌、结核杆菌和真菌检测均为阴性。第二次手术后患者BCVA提高至0.3，但其后视力逐渐下降，并反复出现眼痛。患者既往史：17岁时曾患"左眼葡萄膜炎"，治疗后好转。本次就诊眼部检查：右眼、左眼BCVA分别为1.5、光感；右眼、左眼眼压分别为17、25 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）。右眼眼前后节均未见异常。左眼结膜混合充血，角膜轻度水肿，细小灰白角膜后沉着物（KP），房水闪辉（++），浮游体（++++），下半前房积脓，虹膜新生血管，瞳孔膜闭，眼底观察不清（图1A）。B型超声检查，左眼玻璃体混浊，局部视网膜脱离。超声生物显微镜（UBM）检查，左眼睫状体、虹膜占位（图1B）。入院诊断：左眼葡萄膜炎，左眼虹膜及睫状体占位，左眼人工晶体眼，左眼玻璃体切割手术后。患者入院后在球后麻醉下行左眼玻璃体切割+人工晶状体取出+前房成形+硅油填充+睫状体活检手术，冲洗前房后发现瞳孔区新生血管膜并予以切除（图1C），手术中见局部渗出性视网膜脱离，视网膜下有黄白色病变。睫状体活检病理结果提示，睫状体组织伴散在淋巴细胞、浆细胞浸润。玻璃体液培养结果为羊布鲁菌感染，布鲁菌血清凝集试验阴性。追问病史，患者发病前饲养羊多年，2014年无明显诱因出现发热、胸痛、腹痛及膝关节痛，CT检查显示左侧胸腔积液、左肺下叶受压和肺不张（图2）；血液和胸腔积液培养结果均为阴性，经抗感染、对症治疗后症状好转。最终诊断：左眼羊布鲁菌眼内炎。给予盐酸米诺环素、利福平和复方磺胺甲恶唑治疗。患者左眼手术后出现虹膜新生血管膜复发，经玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗后病情稳定。最终左眼视力无光感，随访至今眼内炎症未复发。

目的 保障静脉用药调配中心(PIVAS)输液调配质量及患者的用药安全.方法 医院依托PIVAS洁净室安全生产监测及预警平台,与某公司联合开发了可实现洁净室净化空调系统与操作台智能控制,以及浮游菌及尘埃粒子、压差及温湿度、净化机组状态等的动态监测及预警功能的智能环境实时监控系统.比较系统运行前(2021 年 7 月至 12 月)、运行后(2022 年 1 月至 6 月)的相关指标监测结果.结果 与系统运行前比较,系统运行后异常监测结果月均发现次数与压差月均正常天数均显著增多(P<0.05);异常监测次均处理用时与浮游菌检测及报告用时均显著缩短(P<0.05);各监测位置(除百级操作台外)浮游菌及尘埃粒子的实时监测数值均显著下降(P<0.05).结论 该系统实现了PIVAS洁净室环境关键指标的实时收集、动态监测及预警,有效地保证了PIVAS输液的安全生产及全流程信息可追溯,推动了智慧PIVAS体系的建设,进一步保障了患者的用药安全.

目的 探讨氟西汀单独使用及联用氟康唑对白念珠菌的抑制作用.方法 采用白念珠菌标准株、白念珠菌临床分离株和白念珠菌耐药株进行实验,分别制备相应菌株的浮游状态和生物膜状态.XTT减低法检测氟西汀对白念珠菌的作用,改良时间-杀菌曲线测定氟西汀对白念珠菌生物膜的药效学性能,扫描电镜观察氟西汀处理后白念珠菌生物膜的形态变化,棋盘稀释法检测氟西汀与氟康唑联用对生物膜状态白念珠菌的影响.结果 氟西汀对 3 种生物膜状态的白念珠菌均有抑制作用,抑制生物膜状态白念株菌标准株和氟康唑耐药株 50%活性的最低药物浓度(sessile minimal inhibitory concentration 50%,SMIC50)为 32 μg/mL,对生物膜状态白念珠菌临床株的SMIC50 为 64 μg/mL.改良时间-杀菌曲线显示在氟西汀浓度为 1×SMIC50和 2×SMIC50时,3 种白念珠菌生物膜活性均较对照组显著下降.扫描电镜观察显示,氟西汀处理后白念珠菌生物膜较无药物处理时菌丝数量减少,形态发生皱缩.棋盘稀释法显示氟西汀与氟康唑联用时对生物膜状态的白念珠菌标准株表现出协同作用,对其余两种菌株表现出无关或拮抗作用.结论 氟西汀单独使用对不同种类生物膜状态的白念珠菌均有较好的抑制作用,联用氟康唑对生物膜状态白念珠菌标准株有协同抑制作用.

目的:通过对洁净手术室条件下白内障超声乳化手术空气质量进行动态检测分析,了解不同时间点术中空气质量情况,为白内障连台手术空气质量管理提供参考依据.方法:采用空气质量检测仪和空气微生物采样器,对温州医科大学附属眼视光医院洁净手术室白内障超声乳化手术术中空气质量进行动态检测分析与评价.结果:白内障超声乳化手术从患者入室到切口关闭整个过程空气洁净度呈"N"字型,以麻醉开始空气中颗粒物浓度为最高,周边区颗粒物浓度略高于手术区,差异有统计学意义(P＜0.01),各采样时间点细菌数均符合洁净级别标准;12台连台白内障超声乳化手术第1至第7台手术区气溶胶浓度呈平稳波动态势,第8台开始PM2.5(0.17 μg/m3)、PM10(0.27 μg/m3)有上浮趋势,在第12台有较明显高值(PM2.50.3 μg/m3、PM10 0.4 μg/m3、粒子数21.67个/L),且浮游菌检测在第12台检测为2 cfu/m3;周边区PM2.5(0.1～0.2 μg/m3)、PM10(0.17～0.23 μg/m3)、粒子数(9.67～16.67个/L)均呈平稳波动态势,浮游菌检测浮动范围为0～1 cfu/m3,符合动态标准.结论:洁净手术室能够持续有效维持手术间的空气清洁,白内障超声乳化手术连台方式可取,考虑到临床人力安排与实际工作,建议白内障超声乳化手术可在连台11～12台(手术开展4～4.5 h)后进行术间自净,使手术室管理更加高效.

为获得微生物分布的基础数据、帮助工厂识别微生物风险点并评价防腐体系的有效性.文章对洗涤剂厂的生产环境和生产过程中的微生物风险进行了调查研究.连续 3 个月对工厂的空气、水样、原材料、设备表面、包装材料和生产过程进行微生物采样并检测,利用分子生物学方法对生产过程中的污染菌进行了菌种鉴定,并通过最小抑菌浓度(MIC)测定和防腐挑战试验评价工厂所用防腐剂的有效性及其对所生产成品的防腐效能.实验表明,原材料、设备表面和包装材料中均未检出微生物;空气中有两个位点的浮游菌总数超标,达到了 2 010 CFU/m3 和 2 030 CFU/m3,分别位于4月份的乳化间和5月份的生产车间,其他时间和位点浮游菌总数均＜1 000 CFU/m3,在合格范围内;生产用水在3个月份的抽检中均存在菌落超标的现象,菌落总数在 102～105 CFU/mL之间;生产过程取样均在加入活性物和助剂的步骤中检出了微生物,从中分离出了 25 株细菌,MIC值均＜0.01%,优势菌为肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌.添加标准菌株和优势菌株到生产成品中进行防腐挑战测试均能通过,说明所用防腐剂有效且产品防腐性能良好.该工厂微生物风险点为空气、水样及生产过程中添加活性物和助剂的步骤,成品及时添加防腐杀菌剂后防腐效能良好.因此,建议工厂加强对风险点的监督管理,降低微生物污染风险.

目的:分析高速动力系统对鼻内镜下经筛径路手术空气质量的影响,为手术室医护人员的术中防控提供建议.方法:选择2021年9月至11月在温州医科大学附属眼视光医院进行鼻内镜下经筛径路手术时的空气为研究对象.采用空气质量检测仪和空气微生物采样器,分别于手术划刀时、金刚砂磨钻在鼻内使用时、微动力刨削刀头在鼻内使用时、污染的高速动力系统在体外激活时以及停止使用高速动力系统10 min后,实时检测患者鼻孔、距患者鼻孔50 cm处、距患者鼻孔1.5 m处、手术室周边区产生的PM2.5、PM10和粒子数及浮游菌浓度变化并分析.结果:随着术中高速动力系统的使用,PM2.5、PM10及粒子数均呈现波动上升趋势,并在体外激活时达到峰值,颗粒物浓度从高到低依次为:污染的高速动力系统在体外激活时＞微动力刨削刀头在鼻内使用时＞金刚砂磨钻在鼻内使用时,差异有统计学意义(P＜0.01).不同采样位置之间的PM2.5、PM10及粒子数差异均有统计学意义(P＜0.01),从高到低依次为:患者鼻孔＞主刀口鼻＞器械护士口鼻＞手术室周边区.术中不同采样位置的浮游菌浓度均高于初始基线,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:鼻内镜下经筛径路术中高速动力系统的使用会使手术室区域空气中颗粒物和细菌数增加,且随着不同使用模式和工作距离产生不同影响.术中医护人员应采取相应的防控措施,减少职业暴露,预防手术感染.

研究从生物可利用性角度出发,筛选出2个高效且特异响应氮、磷生物可利用度的聚球藻启动子,驱动细菌荧光素酶报告基因,构建了用于直接检测环境样品中营养盐生物可利用度的微藻细胞生物报告器,获得了生物发光与标准氮(NO3-)、磷(PO43-)营养盐浓度的关系曲线,可用于水体氮、磷生物可利用度的快速检测.同时,使用国标法与本方法对南海航次水样进行了测定,国标法测得的磷浓度为0.17-3.00 μmol/L,氮浓度为1.04-49.34 μmol/L,而本方法测定的磷浓度为0.10-1.13 μmol/L,与国标法测定的结果接近;氮浓度为32.57-98.06 μmol/L,比国标法测得的浓度高,可能是由于水样中还含有其他形式的氮.研究提出了利用生物报告器检测并量化海水氮、磷生物可利用性的方法,是对水体营养盐化学浓度指标的重要补充,为环境样品营养盐生物可利用性检测提供了新的方向和思路.

目的 设计并组织实施洁净环境生物污染检测实验室间比对项目,评价实验室的生物污染检测能力,识别实验室间存在的差异.方法 制备洁净环境检测用阳性质控品,并进行均匀性和稳定性考察,对实验室间比对结果进行统计分析并评价.结果 样品均匀性和稳定性符合要求.7 家实验室参加洁净环境生物污染检测项目,满意数为 7 家,满意率 100%.结论 各实验室检测能力维持良好,洁净环境检测用阳性质控品可用于生物污染检测能力的实验室间比对,为今后开展洁净环境生物污染检测能力验证项目提供参考.