目的:研究制备丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）RNA检测实验室能力验证质控品，并应用于HCV检测实验室能力验证工作，以评估实验室HCV RNA检测的能力，提高检测工作质量。方法:收集HCV RNA阴性及阳性人源血浆样本，使用丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）进行RNA定量检测，制备5支/套能力验证质控品（编号197101~197105），每套中3支HCV RNA阳性样品、2支HCV RNA阴性样品；每编号质控品随机抽取10管进行均一性评价，每编号质控品在37 ℃下放置1~7 d后进行稳定性评价；将能力验证质控品应用于14家临床实验室的能力验证中，收集分析检测结果，评价各实验室HCV RNA检测能力。结果:均一性评价结果显示，编号197102及197104阴性质控品均未检出HCV RNA，编号197101、197103、197105阳性质控品RNA定量值（log10）CV%分别为8.59%、9.58%、9.95%；稳定性评价结果显示，37 ℃放置1~7 d后，编号197102及197104阴性质控品均未检出HCV RNA，编号197101、197103、197105阳性质控品RNA定量值（log10）CV%分别为8.26%、6.09%、6.12%；参加能力验证的14家实验室对5支质控品的检测结果定性判定均与预期结果一致，得分均为100分；14家实验室对编号197101、197103、197105检测的标准差I分别为-0.99~2.05，-1.16~1.84，-1.78~2.30。结论:本研究制备的HCV RNA能力验证质控品具有较好的均一性和稳定性。通过HCV RNA能力验证质控品的应用，反映出个别实验室存在系统误差或随机误差。

目的:比较两种实时荧光定量PCR试剂检测HIV-1病毒载量间的相关性和一致性，以及性能参数。方法:两种检测试剂各采用3个批号对系列稀释的定值质控品检测，分析两种检测试剂的检测线性度和精密度。再用两种试剂对166例HIV抗体阳性样品和27例阴性样品分别进行检测，比较两者的相关性和一致性。结果:TaqMan病毒载量检测试剂与系列浓度定值质控品检测结果的决定系数为 R2=0.978，Xpert病毒载量检测试剂与系列浓度定值质控品检测结果的决定系数为 R2=0.987；对不同浓度定值质控品检测结果的不同批号间和总变异系数均<7%。两种试剂不同批号检测定值质控品的结果差异无统计学意义。两种试剂对血浆样本检测结果显示，对阴性样品检测的符合率为100%，在40 cps/mL的临界值处的观察一致性为50%，在其量化下限附近缺乏一致性，线性范围内检测结果之间的决定系数为 R2=0.946。Bland-Altman分析显示，偏差均值为0.41 log10（IU/mL）。 结论:两种试剂检测性能均良好，在HIV-1病毒载量检测中具有较好的临床等效性。

目的:建立一种可单管同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法:收集2020年2月至2022年2月广州白云机场海关入境人员新型冠状病毒核酸阳性样本30份和336份排查样本，以及2020年发生新型冠状病毒肺炎疫情前3年期间同样来自广州白云机场海关入境人员的其他呼吸道病原体阳性样本64份和呼吸疾病国家重点实验室提供的呼吸道病原体阳性毒株7份。选取新型冠状病毒 ORF和N基因，以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域，设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合，同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针，建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法，应用制备的假病毒阳性质控品和样本盘，评估方法的敏感度、特异度，并进行临床样本应用性验证。结果:所建立的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法可特异性检出新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒，新型冠状病毒的最低检出限约为125拷贝/ml，甲、乙型流感病毒的最低检出限约为250拷贝/ml；检测101份各类呼吸道病原体阳性样本，显示新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的检测敏感度分别为96.67%、92.86%和96.15%，三者的特异度均为100%，超过300份临床样本的应用性检测中，未见假阳性检出。结论:建立了一套新型冠状病毒、甲、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法，该方法具有良好的灵敏度和特异性，可用于新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的大批量样本快速筛查。

目的:研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸提取效率的差异。方法:2021年3月5日，在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份，将阳性质控品混入其中，作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样本RNA，用微量紫外分光光度计测量核酸的纯度（ A260/ A280比值）及浓度，并进行荧光定量PCR扩增实验，比较其循环阈值（CT）和提取效率。用3种方法提取模拟弱阳性标本，比较其扩增后的CT值差异。服从正态分布的计量资料以 xˉ±s表示，组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:磁珠法、离心柱法、一步法提取的2019-nCoV核酸均能扩增出阳性结果。磁珠法与一步法提取的RNA扩增CT值差异无统计学意义（ t=?0.995， P=0.376）。离心柱法提取的RNA较另外2种方法提取的RNA扩增后CT值小，离心柱法、磁珠法、一步法提取的模拟阳性样本扩增后ORF1ab基因的CT值分别为29.28±0.06、30.82±0.14、29.79±0.01，差异有统计学意义（ F=11.196， P=0.041）；E基因的CT值分别为28.52±0.40、27.33±0.78、27.38±0.13，差异有统计学意义（ F=3.407， P=0.169）；N基因的CT值分别为28.61±1.02、27.24±0.20、27.25±0.47，差异有统计学意义（ F=2.880， P=0.020）；离心柱法、磁珠法、一步法提取的人源性标本扩增后人源基因CT值分别为19.68±0.36、20.14±0.06和20.58±0.49，差异有统计学意义（ F=4.904， P=0.048）。人源性标本稀释2倍即对扩增人源基因CT值有影响，未稀释标本较稀释2倍标本CT值较小，相差2.95±0.22，差异有统计学意义（ t=?3.025， P=0.039）。一步法、磁珠法、离心柱法提取时间分别为（15.00±1.50）、（20.00±1.50）和（40.00±5.5）min，差异有统计学意义（ F=688， P=0.027）。 结论:磁珠法、离心柱法及一步法均可用于2019-nCoV核酸提取，离心柱法提取效率较磁珠法及一步法高。

目的:探讨实验室抗CCP、AKA、APF这3种自身抗体自制质控品的制备及评价，为其他自身抗体自制质控品的制备提供参考。方法:将阳性血清和体检健康人群的阴性血清按比例进行混合，调制成所需浓度的混合血清，再进行56 ℃加热30 min灭活，离心过滤后分装，置-20 ℃以下冰箱保存。检测20瓶质控品以及连续检测20次同瓶质控品计算变异系数（ CV）值来测定混合血清的瓶间差。37 ℃水浴储存条件下每天检测10次求出偏差，来判断37 ℃条件下的稳定性。-20 ℃冷冻储存，每周检测1次，求出每月 CV值，来判断长期稳定性。 结果:37 ℃条件下，在长达8 d的时间中，抗CCP抗体的偏倚都小于±20%的偏倚要求，AKA、APF的结果都在上下一个滴度的可接受范围内。在瓶间差测试中，抗CCP抗体的 CV瓶间为3.2%，远<20%的瓶间差要求，而AKA、APF的瓶间差可视为0。在-20 ℃长期稳定性实验中，累计9个月的检测结果，抗CCP抗体总 CV为10.6%，<20%的要求，AKA、APF结果都在上下一个滴度的可接受范围内。所有阴性质控品的检测结果均为阴性。 结论:抗CCP、AKA、APF这3种抗体自制混合血清质控品的性能良好，且该方法简单，可操作性强，适用于各级医院和实验室，也为其他自身抗体室内质控品的制备提供参考。

目的:无创产前检测胎儿非整倍体（NIPT）自制血浆质控物的研制及其性能验证。方法:对2019年1月1日到2021年6月30日来绍兴市妇幼保健院遗传咨询门诊就诊、并选择NIPT检测结果为阴性的孕妇随访新生儿性别，将对应储存的孕妇血浆分成男婴孕妇组19份、女婴孕妇组120份。顺序收集2020年9月至2021年9月的9 360例病例作为临床验证病例。第1步：用1例47岁未孕健康女性空白血浆作为基质，每管200 μl血浆分别加入5个不同体积（0.1、0.2、0.5、2.5和5 μl）的胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测试剂盒自带的阳性DNA，根据检测结果选择0.5 μl的阳性DNA加样量。第2步：将男婴孕妇组血浆（19份）和女婴孕妇组血浆（20份）分别作为基质，每管（205 μl）加入0.5 μl的阳性DNA，发现女婴孕妇组血浆的检测结果重复性好，敏感度为100%。第3步：对120份女婴孕妇组血浆的自制血浆质控品进行性能评价，通过计算Z值、胎儿游离DNA浓度的 CV值变化等指标来评价储存稳定性、基质均匀性、加入不同批号阳性DNA时的影响。 结果:女婴孕妇组混合血浆为基质重复性好，敏感度为100%，而男婴孕妇组留存血浆为基质的敏感度只有84%。批内重复性结果显示女婴孕妇组血浆作为基质中胎儿游离DNA浓度的 CV值为3.9%；加入0.5 μl阳性DNA后，自制阳性血浆质控品的胎儿游离DNA浓度为5.63%±0.42%，Z值均>6，放置3个月，胎儿游离DNA浓度的 CV值为7%。阳性DNA的批号不同，浓度会有差异，当阳性DNA的胎儿游离DNA浓度值低于10%时，要加入1 μl的阳性DNA。经2020年9月至2021年9月9 360例临床检测中的应用，发现所有阳性血浆质控物均呈阳性结果，患者21三体的阳性预测值为100%。 结论:成功研制NIPT自制阳性血浆质控物，初步实验结果证实重复性好，较为稳定，适合在临床上推广。

目的:旨在建立脑脊液寡克隆区带（OCB）检测标准流程（SOP），并验证不同实验室采用该SOP检测脑脊液OCB的一致性。方法:通过启动脑脊液免疫球蛋白G寡克隆区带多中心临床研究（“CNS-OCB”）形成的多中心的SOP，选择国内具有代表性的三家研究型医院神经免疫实验室，采用商业化检测自动化操作系统与OCB试剂盒，采用美国病理学会（CAP）提供的质控品及Sebia医疗诊断器械（上海）有限公司提供的质控品进行各自的室内质控及相互比对。采用单中心重复实验获得可靠的检测稀释倍数参考范围。对17份血清和脑脊液配对样本进行检测。采用验视方法和Kappa检验或Kendall W检验进行各中心室间一致性评价。 结果:单中心重复实验结果提示，2倍和4倍稀释度OCB检测结果均为阳性；64倍和128倍OCB检测结果均为阴性；8、16和32倍稀释度出现阳性/阴性不一致结果；增加重复次数后结果显示，16倍和32倍均为阴性结果；8倍为阴性（重复40次出现2次阳性，符合率为95%）。此外，多中心室间质评结果验视表明，三家中心检测一致率均为100%（Kappa值=1）。结论:采用CNS-OCB研究形成的多中心的SOP来检测脑脊液OCB，具有良好的重复性和稳定性，可为国内医疗检测机构建立脑脊液OCB检测方法提供参考。

目的:建立新型冠状病毒质控品体系，为以荧光PCR法为原理的新型冠状病毒核酸检测及其试剂盒的性能评价提供可靠的质控物质。方法:将新型冠状病毒毒株原液10倍梯度稀释得到浓度依次为10 6、10 5、10 4、10 3、10 2拷贝/ml的5组阳性质控品，进行核酸提取和荧光定量PCR检测 Ct值，计算 Ct值的均值、标准差、变异系数、变化趋势，对质控品进行均一性和稳定性评价。 结果:在本实验5个浓度梯度内， Ct值与质控品浓度成线性相关。均一性评价中，各浓度组质控品的变异系数分别为4.60%、2.67%、2.22%、2.04%和2.50%。稳定性评价中，在4 ℃保存条件下的质控品的检测结果不随时间延长而改变。 结论:建立的新型冠状病毒质控品在4 ℃保存条件下均一性和稳定性好，可用于新型冠状病毒核酸检测及相关试剂盒的性能评价。

目的:建立BCR：：ABL1 p210转录本荧光定量PCR（RQ-PCR）实验室自建检测方法和分析性能确认。方法:本研究采用欧洲抗癌计划（EAC）公布的BCR：：ABL1 p210转录本RQ-PCR检测的引物和探针序列建立了BCR：：ABL1 p210转录本RQ-PCR实验室自建检测（LDT）方法，通过WHO国际参考品获得转换系数（CF），并使用K562和HL60细胞系混合物构建两个不同水平的实验室内部质控品。回顾性分析慢性髓细胞性白细胞（CML）患者阳性标本，参考CLSI MM01-A3等指南评价实验室自建BCR：：ABL1 p210 RQ-PCR 方法的精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度和分析特异性等参数。采用Bland-Altman法对LDT方法与美国FDA批准的BCR：：ABL1 p210转录本定量检测体外诊断（IVD）试剂盒检测结果进行一致性分析。结果:本中心通过WHO国际参考品校准获得的BCR：：ABL1国际标准值（BCR：：ABL1 IS）的CF为0.535。本研究建立的LDT方法在4个分子学反应（MR）水平（0.5、1.5、2.5、3.5）的BCR：：ABL1 IS 的重复性变异系数（ CV）分别为7.44%、5.33%、9.12%、18.06%，室内总不精密度 CV分别为7.99%、5.49%、10.95%、17.99%。2020至2022年本实验室所有美国病理学家协会（CAP）能力验证（PT）样本的MR值均在CAP允许的变异范围内，MR结果与CAP-PT MR 平均值强相关（ r=0.999， P<0.01），所有差值均在一致性界限范围内。本研究建立的LDT方法与Qiagen IVD试剂盒检测结果相关性高（ r=0.997， P<0.01）。e13a2转录本的BCR：：ABL1 IS线性范围为0.001%~7.454%，最大 CV值为64.09%。e14a2转录本的BCR：：ABL1 IS线性范围为0.002%~12.398%，最大 CV值为43.37%。e13a2转录本和e14a2转录本的最低检测限（LoD）分别为MR5.0（0.001% IS）和MR4.8（0.002% IS）；e13a2和e14a2转录本定量检测限（LoQ）均为MR4.7（0.002% IS）。该方法分析特异性为100%，与BCR：：ABL1 p190转录本检测无交叉反应性。 结论:本实验室自建的BCR：：ABL1 p210转录本RQ-PCR定量检测体系分析性能良好，可满足CML患者BCR：：ABL1融合基因的临床检测需求。

目的:对发色底物法测定凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性进行方法学建立以及临床应用评价。方法:选取2018年1月至2019年5月于上海交通大学医学院附属瑞金医院确诊的血友病A患者40例，获得性血友病A患者20例，狼疮抗凝物质阳性患者26例和表观健康者60名，根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）相关文件要求，分别对该检测方法的准确度、不精密度、检测下限、线性范围、携带污染率、参考范围、可报告范围等指标进行验证，并与FⅧ活性检测（一期凝固法）进行方法学比较。同时对发色底物法在获得性血友病A和狼疮抗凝物质阳性患者标本的临床应用进行评估。结果:两个水平的定值质控品的检测结果均在厂商提供的定值范围内（偏倚为3.93%~6.79%）。批内不精密度变异系数（ CV）为1.86%~2.06%（均≤5%），日间不精密度 CV为4.83%~6.90%（均≤15%）。灵敏度 CV为11.23%（<20%）。试剂盒提供的参考范围（60.00%~168.00%）适用于本实验室。最大稀释度为1∶16。线性范围为5.00%~193.50%（ a=1.024 3， R2=1.000）。临床可报告范围为0.50%~387.00%。携带污染率为0.04%。与FⅧ活性检测（一期凝固法）结果一致性高（ R2=0.961）。FⅧ抑制物滴度检测结果与一期凝固法结果一致性高（ R2=0.973）。狼疮抗凝物质阳性伴FⅧ活性（一期凝固法）降低患者的FⅧ∶C结果与一期凝固法结果间的差异有统计学意义（ t=9.232， P<0.05）。 结论:FⅧ活性检测（发色底物法）试剂盒具有优越的检测性能，各方面均呈现出良好的结果，可用于FⅧ活性水平测定，且临床应用范围更广，干扰因素更少。