目的:探究内生菌深绿木霉对宿主植物朝鲜淫羊藿生长及药效成分含量的影响.方法:以朝鲜淫羊藿为试验材料,采用大田试验,设置对照组、商品菌组和S6 菌组,商品菌组和S6 菌组分别浇灌 200 mL浓度 1.0×108个/mL的菌悬液,对照组浇灌等量PDB培养基,15 d浇灌一次并测定植物生物量、光合作用参数、抗氧化酶活性、黄酮类化合物合成关键酶活性、总黄酮及总黄酮醇苷含量.结果:S6 菌组与对照组相比,在45、60 d时,鲜重分别显著高出 20.36%、15.38%;15、30、60 d时,Pn 分别显著高出 49.20%、44.79%、345.33%;45、60 d时,Gs 分别显著高出26.83%、33.47%;15 d时,Ci 显著高出 12.79%;15、30、60 d时,WUE分别显著高出 49.27%、77.39%、514.03%;45、60 d时,SOD活性分别显著高出 93.64%、155.03%;15～60 d 期间,POD 活性分别显著高出 23.12%、110.79%、141.98%、174.84%;15、60 d时,PAL 活性分别显著高出 106.85%、35.21%;30、45 d 时,F3H 含量分别显著高出25.17%、66.67%;15 d时,FNS含量显著高出 21.18%;15～60 d 期间,总黄酮醇苷含量分别显著高出 28.96%、28.37%、30.90%、66.56%.结论:深绿木霉能够促进朝鲜淫羊藿的生长及药效成分累积.

[背景]木霉是自然界中常见的纤维素和半纤维素降解菌,在农业废弃物降解中具有重要应用潜力.[目的]筛选可在低温环境降解玉米秸秆的木霉菌株.[方法]测定 31 种木霉 111 个菌株在低温下的生长状况、水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径及部分菌株对玉米秸秆的相对降解率(relative degradation rate,RDR);利用DNS法测定不同RDR代表菌株的纤维素滤纸酶(filter paper cellulase,FPase)、羧甲基纤维素酶(carboxymethyl cellulase,CMCase)和木聚糖酶(xylanase)活性,并分析它们在不同发酵阶段的酶活与秸秆降解率的关系.[结果]在 10℃和 5℃培养分别有100 株和 42株供试菌株能够生长,在 15℃均能生长,其中 19个菌株培养 6 d产生的水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径大于 60 mm、培养 10 d对玉米秸秆的RDR为 0.45%-8.09%;菌株 9145、TC425、TC505 和 8987 的FPase、CMCase和xylanase活性随着培养时间呈现动态变化,其中前两者的活性变化趋势基本一致,与 RDR 的关系密切.[结论]钩状木霉、西蒙斯木霉、深绿木霉和深褐木霉菌株在低温条件下对玉米秸秆具有较高的降解能力,将为后续玉米秸秆腐熟剂开发、降解机理研究及秸秆资源化利用提供种质资源.

为从青蒿(Artemisia annua L.)内生真菌中筛选有促生作用的菌株,用组织分离法从青蒿侧枝中分离内生真菌并进行分子鉴定,对其中1株真菌深绿木霉对青蒿幼苗的促生作用进行了研究.结果表明,从青蒿侧枝中获得23株内生真菌,鉴定出16种,以炭疽菌属占优势.深绿木霉发酵液对青蒿种子发芽和幼苗生长具有显著抑制作用;深绿木霉液体发酵菌丝体在4-5月对青蒿幼苗生长具有显著的促进作用,但7月以后没有明显促进作用.因此,深绿木霉可作为青蒿苗肥,与化肥配合可施用于成株.

为探索设施栽培条件下蔬菜根围土壤中木霉种群多样性特征及其抗常见植物病原真菌及有机磷农药降解活性,从连续20多年种植番茄的设施大棚根围土样中以及番茄根系内部分离木霉菌,并以tef1-α 序列和系统发育分析进行种类鉴定,估算各菌株的相对种群密度;对其生防和农残降解活性进行了测定.结果共分离不同木霉菌株27株,结合形态学特征和tef1-α 序列分析,鉴定出分属6个不同的木霉种,即绿色木霉(Trichoderma virens)、深褐木霉(T.atrobrunneum)、西蒙斯木霉(T.simmonsii)、深绿木霉(T.atroviride)、厚木霉(T.crassum)和1个疑似木霉新种(T.sp.nov.);木霉各菌株产孢簇常呈鲜绿色到暗绿色,分布不均匀,常形成同心圆结构.对峙条件下这些木霉对土壤中常见土传病原菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)均有普遍的不同程度的抑菌活性;除深褐木霉两个菌株对毒死蜱的降解效果不明显外,其它种类的木霉均有菌株能有效降解毒死蜱,木霉菌株在根围土壤中的相对种群密度仅为104 cfu/g,且菌株间差异较大.研究结果表明设施农业土壤中木霉菌具有丰富的种质资源多样性,在形态特征及功能活性方面表现明显的菌株差异;木霉对3种常见植物病原真菌有普遍的抑菌作用,少数菌株对常用有机磷农药降解作用明显,可以发挥生防和农化残留降解方面的协同效应.该结果对于研究设施农业土壤中木霉的多样性,指导功能菌株筛选及应用,更好挖掘利用木霉菌资源有着较好的借鉴意义.

木霉菌(Trichoderma spp.)是一种广泛存在于土壤及植物根系生境中的丝状真菌,具有拮抗植物病原真菌和促进植物生长的双重功效.碳代谢抑制子CRE1全局性调控细胞生长代谢过程,保障木霉在不同生境中的存活及拮抗病原茵特性.比较深绿木霉(T.atroviride)T23及其Crel突变株(T23△cre1)在不同培养基中的生长和代谢特性,结果表明:crel基因沉默后,T23△crel较T23菌丝生长变慢,产孢滞后且降低一个数量级,crel对茵丝生长和产孢的调控依赖于培养基组分.此外,crel基因抑制几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶基因转录,区别性调控部分次级代谢合成的非核糖体肽合成酶NRPS和聚酮合成酶PKS基因的表达.综上,碳代谢因子CRE1作为一个多效性的转录调控因子,抑制细胞壁降解酶和代谢产物合成相关的基因表达,赋予木霉菌在环境中的适应性和竞争性,是深绿木霉T23生长的必要因子.

漆酶是一种重要的木质素降解酶,并与木霉属种类Trichoderma spp.的重寄生等生防抑菌作用密切相关.本文利用含有丰富木质素含量的柑橘园枯枝为基质研究其对深绿木霉Trichoderma atroviride产漆酶活性的影响,并结合单因素方差分析研究了柑橘树枝粉末用量、碳源含量、环境pH值等变量与该菌株产漆酶能力的关系,为进一步探索柑橘园的枯枝在木霉重寄生过程中漆酶活性的变化与影响以及对柑橘园枝干病害的生物防治提供了理论基础.

目的 研究深绿木霉D16固体菌肥不同剂量在盆栽和大田环境下对丹参苗生长和次生代谢的影响,为深绿木霉生物菌肥在生产上的应用提供参考.方法 分别在温室和陕西商洛丹参规范化生产基地开展实验,设置不同剂量(5、15、25 g)的D16菌肥处理组3组,25 g不加菌的固体菌种培养基为对照组,测定不同剂量D16菌肥对丹参苗生物量、有效成分含量的影响.结果 不同剂量的D16菌肥对丹参生长和有效成分积累均有显著影响,施用15 g的菌肥用量效果较优,收获时在盆栽和大田环境下干重分别是同期对照组的5.61倍和1.42倍,有效成分含量最高可达盆栽同期对照组的27.91倍和大田同期对照组的1.89倍.结论 15 g的深绿木霉菌肥能显著促进丹参苗的生长和有效成分积累,为内生真菌提升中药质量的生产实践做出了有益的探索.

目的:研究中华地鳖虫肠道内生真菌及其抑菌活性,为发现新型活性天然产物提供一条重要的途径.方法:采用平板分离法从地鳖虫肠道内分离内生真菌,利用滤纸片法对其进行抑菌活性研究,并对菌株的总DNA进行提取,利用通用引物ITS1和ITS4对菌株18S rDNA ITS序列进行扩增和测序,将测序结果进行同源性比对分析,确定活性菌株的分类地位.结果:从中华地鳖虫肠道中共分离出8株内生真菌.其中,菌株DB-1对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌都有一定的抑制作用,经比对分析后鉴定菌株DB-1为深绿木霉Trichoderma atroviride.结论:中华地鳖虫肠道内具有抑菌活性的内生真菌资源可做进一步研究利用.

油桐是我国重要的木本油料植物,其生产的桐油作为天然的优良干性油在工业上具有广泛用途.但由油桐专化型尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum f.sp.fordiis(Fof-1)侵染引起的枯萎病给油桐产业造成了毁灭性灾害,目前尚无有效防治手段.众多实践证明,利用生防菌可以有效防治土传枯萎病.本研究发现,在抗病油桐根围土壤中木霉菌的相对丰度较高,并从中分离获得了16株木霉菌;通过形态学鉴定和ITS-TEF1双基因联合构建系统进化树,鉴定出4种木霉菌:拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis(TkonT1)、螺旋木霉T.spirale(TspiT2)、深绿木霉T.atroviride(TatrT3)和哈茨木霉T.harzianum(TharT4);通过对峙培养试验,发现木霉菌株TkonT1、TharT4和TspiT2具有较好的抑菌效果;进一步显微观察发现菌株TkonT1和TatrT3可缠绕在尖孢镰孢菌菌丝体上或穿入菌丝体内营寄生生长,吸收病菌菌丝体养分进而导致病菌菌丝体破裂和细胞原生质消解.结果 表明,从抗病油桐根围土壤中获得的拮抗木霉菌株可用于油桐枯萎病的生物防治.

目的:纤维素酶水解天然纤维素产生易被微生物利用的葡萄糖是进行生物炼制的关键.丝状真菌分泌的纤维素酶大多数是经过糖基化修饰的,研究丝状真菌纤维二糖水解酶(Cel7A)的催化功能域N-糖基化修饰对其分泌及酶活的影响,有助于优化纤维素酶的表达.方法:利用定点突变将草酸青霉和深绿木霉Cel7A催化功能域的N-糖基化位点去除,构建突变体PoCel7A*和TaCel7A*.以草酸青霉为宿主构建分泌表达PoCel7A*、TaCel7A和TaCel7A*的重组菌,检测N-糖基化去除对Cel7A分泌和酶活力的影响.结果:PoCel7A催化功能域的N-糖基化去除对其蛋白分泌和酶活力无影响.TaCel7A催化功能域的N-糖基化去除不影响其蛋白分泌;但突变体的pNPCase、FPase和Avicelase酶活力分别下降了21.2％,15.2％和17.6％.去除Cel7A催化功能域N-糖基化,加强了细胞内UPR响应.外源蛋白TaCel7A和TaCel7A*的表达也加强了胞内UPR响应.结论:不仅可以为丝状真菌Cel7A的酶工程改造提供理性设计思路,而且为进一步了解糖基化在纤维素酶降解纤维素过程中的作用及机理奠定一定基础.