目的:探讨胆道局部抗生素冲洗治疗慢性增生性胆管炎(chronic proliferative cholangitis，CPC)的疗效。方法:建立大白兔CPC模型，随机分为CPC组20只(胆管不冲洗氧氟沙星)和实验组20只(胆管内冲洗0.5%氧氟沙星)。仅切除胆囊，游离胆总管(假手术)大白兔20只设为正常组。对正常组、CPC组和实验组胆管组织内炎症情况、胆管细胞增生及胆管纤维化程度、胆管结石形成能力进行对比分析。结果:实验组与CPC组相比，胆管组织中炎症指标脂多糖和白介素-6[(1.21±0.13)比(3.24±0.21)，(1.52±0.22)比(3.10±0.23)]、胆管细胞增生指标环加氧酶-2和血管内皮生长因子[(2.15±0.12)比(4.07±0.22)，(2.44±0.14)比(3.22±0.21)]、纤维化指标转化生长因子-β和胶原1[(2.44±0.28)比(4.36±0.44)，(1.54±0.13)比(2.22±0.18)]及结石形成指标β-葡萄糖醛酸酶和粘蛋白5AC [(1.74±0.20)比(3.42±0.31)，(1.47±0.15)比(2.81±0.22)]相对表达均明显下调，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:胆道局部持续冲洗抗生素可有效缓解胆道慢性炎症，抑制胆管细胞的过度增殖和胆管纤维化，并降低结石形成能力，进而发挥控制CPC的作用。

目的:探讨褪黑素对脂多糖和缺血缺氧诱导的新生大鼠脑白质损伤的保护作用及机制。方法:选择3日龄新生Sprague-Dawley（SD）大鼠72只，随机分为假手术组、模型组和褪黑素组各24只。假手术组仅游离右侧颈动脉、不进行结扎，不予低氧处理；模型组和褪黑素组采用脂多糖预处理+缺血缺氧法制作脑白质损伤动物模型。褪黑素组在注射脂多糖前1 h和之后每天腹腔注射褪黑素15 mg/kg，假手术组和模型组在相同时间点给予等体积含1%无水乙醇的生理盐水腹腔注射。实验第7天处死大鼠，取脑室周围白质，采用HE染色和TUNEL染色观察脑白质损伤和凋亡情况，IBA1免疫荧光染色观察小胶质细胞分布和形态，活性氧（reactive oxygen species，ROS）试剂盒检测ROS水平，实时荧光定量聚合酶链反应检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（nucleotide-binding domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-18、PTEN诱导假定激酶1、帕金森病蛋白的表达情况。结果:与假手术组相比，模型组大鼠脑白质结构破坏、细胞变性坏死、细胞凋亡数量增加，脑白质NLRP3炎症小体及下游的IL-1β、IL-18等炎症因子表达增加；与模型组相比，褪黑素组脑白质损伤、细胞凋亡、小胶质细胞浸润情况减轻，炎症因子表达减少，脑白质线粒体自噬标志物PTEN诱导假定激酶1、帕金森病蛋白表达增加，ROS产生减少。结论:褪黑素通过增强线粒体自噬减少ROS的产生，从而抑制NLRP3炎症小体过度激活，缓解内毒素和缺血缺氧导致的新生大鼠脑白质损伤。

目的 优化虎杖多糖提取工艺,研究其对RAW264.7细胞活性的影响以及在脂多糖诱导的炎症过程中的作用机制.方法 用Sevage法对虎杖多糖粗提取物中游离蛋白进行处理,然后进行单因素实验,最后利用响应面法筛选虎杖多糖提取及除蛋白方案.将RAW264.7细胞分为正常组和不同浓度虎杖多糖组(5、10、20、40、80、120μg·mL-1),采用CCK-8试剂盒检测虎杖多糖对细胞活力的影响.将RAW264.7细胞分为空白组,模型组(100 μg·L-1脂多糖),不同浓度给药组(20、40、80 μg·mL-1虎杖多糖溶液),采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-(IL-6)分泌水平;采用Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-KBp65蛋白表达水平.结果 筛选得虎杖多糖最优提取方案为Sevage试剂与供试液体积比1∶4、振摇强度8档、振摇时间12 min、除蛋白4次.虎杖多糖质量浓度在20～40μg·mL-1内使细胞活力显著提升,对RAW264.7细胞生长有明显促进作用.与空白组相比,模型组细胞活力升高,TNF-α和IL-6分泌水平及TLR4、NF-κBp65和MyD88蛋白表达水平显著升高,表明巨噬细胞炎症模型构建成功.与模型组相比,虎杖多糖20、40、80 μg·mL-1组RAW264.7细胞活力显著降低.此外,在细胞上清液中发现TNF-α和IL-6分泌水平明显减少,并且TLR4、MyD88和NF-κBp65蛋白表达水平也显著降低.结论 虎杖多糖可以减少脂多糖诱导的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-6分泌,抑制NF-κB信号通路可能是其发挥抗炎作用的一种机制.

目的 探究滇黄精Polygonatum kingianum传统炮制过程化学成分变化规律.方法 按照九蒸九晒法进行滇黄精炮制,应用分光光度法和HPLC测定炮制过程中总多糖、总皂苷、总多酚、总黄酮和游离氨基酸的含量.应用UPLC-MS/MS的广泛靶向代谢组学技术检测原料和炮制后的代谢产物.结果 随着炮制次数的增加,颜色逐渐加深,第3次蒸制后为深褐色,第4次至炮制结束缓慢转变为黑色.滇黄精原料具有麻味,第4蒸之后麻味消失,变为酸甜味.炮制过程中多糖和16种游离氨基酸含量降低,总皂苷、总黄酮和总多酚含量增加.广泛靶向代谢组学共检测到419个代谢物,氨基酸及其衍生物66个,脂质65个,酚酸类52个,黄酮类51个,有机酸42个,生物碱41个,核苷酸及其衍生物32个,甾体9个,木脂素和香豆素7个,异黄酮1个,萜类3个,其他类物质50个.结论 系统阐述了滇黄精九蒸九晒炮制过程中化学成分的变化,九蒸九晒对滇黄精中的化学成分影响较大,随着炮制时间的增加,氨基酸及其衍生物和生物碱类化合物的相对丰度降低,有机酸和酚酸类相对丰度增加等.该研究可为炮制滇黄精有效成分的筛选与质量评价提供参考,同时差异性成分的发现为研究滇黄精生熟饮片中差异性物质的分析提供新思路,对滇黄精的扩大开发利用有重要意义.

目的 探讨黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharide,PSP)对低压低氧大鼠心肌能量代谢的改善作用并探讨其机制.方法 将 24 只 Wistar 大鼠随机分为对照组(control)、低压低氧组(HH)和低压低氧+PSP 组(HH+PSP),每组 8 只.HH组和HH+PSP组大鼠在低压氧舱模拟海拔 6000 m进行慢性低压低氧干预 2 w,HH+PSP组灌胃给予 PSP 400 mg/kg,其余两组灌胃给予等体积生理盐水.每周检测 2 次体重、2 次摄食量,处死前超声心动图检测各组大鼠心功能指标,测定大鼠血清及心肌组织中游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)、葡萄糖(glucose,GLU)、乙酰辅酶A(acetyl coenzyme A,A-CoA)以及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量评价能量代谢情况,Western blotting检测大鼠心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPARα)、肉碱棕榈酰转移酶 1(carnitine palmitoyltransferase 1,CPT-1)、丙酮酸脱氢酶 4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)、葡萄糖转运蛋白 4(glucose transporter,GLUT4)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的表达水平.结果 与对照组相比,HH组大鼠体重和摄食量显著降低(P＜0.05);超声心动图显示心输出量、心室末期容积及每搏输出量均降低(P＜0.05),心室后壁厚度显著增高(P＜0.05);能量代谢相关指标检测显示GLU、ATP显著降低(P＜0.05),FFA、A-CoA 含量显著升高(P＜0.05);Western blotting 结果显示心肌组织 PPARα、CPT-1、PDK4表达水平显著降低(P＜0.05),GLUT4、GAPDH的表达显著升高(P＜0.05).与HH组相比,HH+PSP组大鼠体重及摄食量无显著变化(P>0.05);心输出量、心室末期容积、心室后壁厚度及每搏输出量均得到显著改善(P＜0.05);GLU、ATP含量显著升高(P＜0.05),FFA、A-CoA含量显著降低(P＜0.05).此外,PPARα、CPT-1、PDK4、GLUT4、GAPDH的蛋白表达水平也得到显著下调(P＜0.05).结论 低压低氧暴露导致大鼠心功能损伤与能量代谢紊乱密切相关,PSP干预可以显著缓解低压低氧暴露导致的大鼠心肌能量代谢水平变化,并显著改善心功能损伤,可能与调控心肌组织PPARα-CPT-1/PDK4、GLUT4、GAPDH表达相关.

该研究以脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)刺激的J774A.1巨噬细胞建立细胞焦亡体外模型,探讨大黄游离蒽醌(free total rhubarb anthraquinones,FTRAs)对细胞焦亡的干预机制.体外培养J774A.1巨噬细胞,实验分组为空白对照组、不同质量浓度脂多糖(LPS,0.25、0.5、1 μg·mL-1)+ATP(1.25、2.5、5 mmol·L-1)组,通过CCK-8法检测细胞活力、碘化丙锭(PI)凋亡细胞染色法、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素(IL)-18和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放,建立巨噬细胞焦亡体外模型.之后将J774A.1巨噬细胞随机分为6组:空白对照组,LPS+ATP组,FTRAs高剂量单独作用组,FTRAs低、中、高剂量预保护组.检测上述细胞焦亡的表型特征和关键指标作为评判FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡的影响依据.Western blot法和RT-PCR法检测半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1/11细胞焦亡通路相关蛋白和mRNA表达水平,阐明其抗焦亡效应的分子机制.结果显示巨噬细胞焦亡体外模型以0.50 μg·mL-1 LPS+5.00 mmol·L-1 ATP的刺激条件效果最佳.FTRAs预保护细胞24 h,能够提高焦亡条件下细胞的活力、减轻细胞的受损程度、降低PI染色阳性率并减少LDH、IL-18和TNF-α的释放.FTRAs能够明显抑制GSDMD蛋白的活化,并且显著下调焦亡通路特征分子TLR4、NLRP3、cleaved-caspase-1、cleaved-caspase-11的蛋白表达,但是对ASC蛋白无明显影响.FTRAs还能够明显抑制caspase-1、caspase-11和GSDMD的mRNA表达.这些研究结果表明,FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡模型具有抑制作用,且FTRAs通过调控经典和非经典细胞焦亡信号通路,减少炎性炎症因子的产生,发挥抗焦亡效应.

旨在优选体外诱导中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的条件,以建立相对稳定的实验技术平台.通过比较不同条件,包括大鼠和小鼠等常用的实验动物,利用percoll密度梯度离心法分离骨髓中性粒细胞、外周血中性粒细胞等多种细胞来源,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)不同诱导剂体外诱导,通过MPO/CitH3/DAPI免疫荧光标记法以及细胞培养上清游离DNA(cell free DNA,cfDNA)含量检测综合评价,筛选体外诱导NETs形成的优选条件;在上述平台选择基础上,进一步通过给予中药有效单体川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)进行验证,综合评估优选的体外NETs诱导条件的稳定性.结果显示,包被多聚赖氨酸可一定程度促进小鼠骨髓中性粒细胞NETs形成.LPS和PMA均可显著促进小鼠骨髓中性粒细胞MPO、CitH3 蛋白表达,并提高大鼠外周血中性粒细胞培养上清中cfDNA含量;且与LPS相比,PMA诱导cfDNA水平升高更显著(P<0.05).与PMA共孵育后小鼠骨髓中性粒细胞、大鼠骨髓中性粒细胞和大鼠外周血中性粒细胞中MPO、CitH3 蛋白表达均显著升高,以大鼠外周血中性粒细胞升高最明显.TMP可以显著下调PMA诱导的大鼠外周血中性粒细胞中MPO、CitH3 和NE蛋白的表达.综上,PMA诱导大鼠外周血中性粒细胞是体外诱导NETs形成的较优条件.该研究为基于NETs的体外研究提供优选平台,并为以调控NETs为靶标的中药作用研究提供前期基础.

[目的]干旱严重影响药材的产量和品质.揭示外源钙缓解桔梗干旱胁迫伤害的潜在生理机制,可为利用外源钙提高干旱、半干旱地区桔梗耐旱性和药用品质提供理论依据.[方法]以桔梗幼苗为材料,采用盆栽试验在干旱条件下叶面喷施10 mmol/L CaCl2,研究外源钙对桔梗幼苗生长、光合气体交换参数、抗氧化酶活性及药用部位品质等的影响.[结果](1)外源钙能促进干旱胁迫下桔梗根长和干鲜生物量增加,同时促使其叶片气孔开度、叶绿素a含量、总叶绿素含量、类胡萝卜素含量、净光合速率、气孔导度和蒸腾速率分别显著增加30.28％、57.67％、44.44％、100.33％、89.53％、60.00％和83.11％.(2)外源钙使干旱胁迫下桔梗叶片丙二醛、过氧化氢含量分别显著降低13.82％和18.66％,同时使其叶片过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性分别增加了25.43％、7.90％和33.92％,也显著提高其根中可溶性蛋白含量.(3)外源钙促进桔梗根中皂苷D、多糖、总黄酮、游离氨基酸在正常条件下分别显著增加35.34％、34.87％、4.19％和6.52％,在干旱胁迫分别显著增加10.94％、7.53％、6.07％和5.78％.(4)桔梗地上部和地下部N、P、K、Ca、Cu、Mn含量在干旱胁迫下显著降低,而在外源钙处理下能不同程度地提高.[结论]喷施10 mmol/L CaCl2能增强干旱环境中桔梗叶片抗氧化系统活性和渗透调节能力,提高光合色素含量和光合性能,协同促进次生代谢产物和矿质元素累积,改善药用部位品质,缓解干旱对桔梗幼苗的伤害.

目的:探讨槲皮素(QUE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用及其机制.方法:将小鼠RAW264.7巨噬细胞分为正常对照组、LPS组和QUE +LPS组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6水平,流式细胞仪检测FluoZin-3标记细胞内游离锌含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中ZIP8 mRNA表达,western blotting法检测ZIP8蛋白表达.结果:与LPS组(1 μg/mL)相比,QUE +LPS组上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6含量降低(P＜0.01);与LPS组相比,QUE +LPS组巨噬细胞内游离锌含量降低(P＜0.05),并可抑制LPS诱导的ZIP8表达(P＜0.05).结论:QUE可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其作用可能与下调ZIP8表达,抑制锌内流,减少巨噬细胞内游离锌含量有关.

目的 通过快速高效获取小鼠骨髓有核细胞,建立小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cell,BMDC)模型,并对BMDC进行表面特异性标志物及功能鉴定.方法 利用小鼠股骨和胫骨肌肉群分布的位置特点,快速游离出C57BL/6 雄性小鼠的股骨和胫骨,获取骨髓细胞,使用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant murine granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(recombinant murine interleukin-4,rmIL-4)诱导培养成BMDC.光镜下观察细胞形态,流式细胞术检测BMDC的特异标志物CD11c,进行纯度鉴定.将BMDC分为2 组:对照组和LPS组(1 μg/ml),采用流式细胞术检测特异性标志物CD11c、CD86、CD80、CD40 和MHCⅡ分子,CCK-8 实验检测BMDC对脾脏淋巴细胞增殖能力的影响,qRT-PCR和Western blot检测BMDC中NF-κB的表达情况,进行功能鉴定.结果 诱导培养7d,镜下观察BMDC具有树突状突起的典型形态,CD11 c表达可达97.4%,表明BMDC纯度能够满足后续实验需要.流式细胞术结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中特异性标志物CD86、CD80、CD40 和MHC Ⅱ分子的荧光强度和阳性率显著增强(P＜0.01).CCK-8实验结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC刺激淋巴细胞增殖的能力明显增强(P＜0.01).qRT-PCR结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中NF-κB的表达上调(P＜0.001).Western blot结果表明,与对照组比较,LPS组BMDC内p-NF-κB的表达上调(P＜0.01).结论 成功建立了简单高效的体外诱导培养的BMDC模型,为DC免疫功能的基础研究和转化应用奠定了实验基础.