目的:为提高小鼠肠管组织石蜡切片的整体质量，探讨一种改进型“瑞士卷”法在肠道组织病理切片中的应用。方法:分别采用常规“瑞士卷”制作方法和改进型“瑞士卷”法脱水包埋小鼠回肠、结直肠组织样本，制成组织切片。HE染色用于评估组织切片整体形态质量、组织器械性损伤及黏膜下层与肌层分离的情况；免疫组织化学染色LYVE-1标记淋巴管、染色CD31标记血管，分析黏膜下层结构完整性；采用免疫荧光染色对小鼠回肠潘氏细胞（溶菌酶阳性）及结直肠杯状细胞（MUC2阳性）予以标记。结果:HE染色显示改进型“瑞士卷”组小鼠肠管组织切片整体形态及外观更加规整，组织未发生器械性损伤，且极少见黏膜下层与肌层分离的现象；免疫组织化学结果显示，改进型“瑞士卷”组小鼠肠管组织切片黏膜下层多见完整的淋巴管和血管结构，计数其黏膜下层完整淋巴管和血管的数量分别为（701.0±46.7）条和（881.6±58.7）条，显著高于常规方法组（149.5±23.6）条和（122.9±20.2）条（ P<0.05）；免疫荧光发现，改进型“瑞士卷”组小鼠回肠潘氏细胞及结直肠杯状细胞定位准确，极少见细胞结构缺失的情况。 结论:改进型“瑞士卷”法保护全层和全段肠管的完整性，减少操作带来的组织损伤，改善黏膜下层和肌层分离的现象，为小鼠肠道疾病的研究提供了一种更为可靠的技术。

目的 探讨孕前和孕期高脂饲料喂养对新生大鼠肠道菌群的影响.方法 12只3周龄无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级雌性Sprague-dawley(SD)大鼠,适应性喂养一周后,按体重随机分为对照组与高脂组,孕前分别用基础饲料与高脂饲料喂养至12周龄,与同周龄SPF级雄性SD大鼠合笼,次日观察到阴道栓或阴道涂片中发现精子后,判定受孕.孕鼠单笼饲养,孕期的饲料与孕前相同.收集出生后第0.5天(postnatal day 0.5,PD 0.5)仔鼠,称量体重,采集肠道组织并称量质量,计算肠道系数;进行回肠和结肠组织病理和相关基因检测;提取肠道内容物的细菌总DNA,通过16SrRNA测序分析肠道菌群.采用t检验或Mann-Whitney U检验分析数据.结果 与对照组相比,高脂组PD 0.5仔鼠体重、肠道质量、肠道系数无显著改变(t=-0.682,P=0.499;t=0.269,P=0.790;t=0.674,P=0.506);肠道病理形态无改变;结肠闭合蛋白-1(Claudin-1)、溶菌酶(Lysozyme)、再生胰岛衍生蛋白3伽马(regenerating islet derived protein 3 gamma,Reg3γ)和 a-防御素 5(Alpha-defensin 5)的基因表达水平显著增加(t=-3.136,P=0.011;t=-3.303,P=0.019;t=-3.093,P=0.011;t=-3.575,P=0.005);肠道菌群的 α 多样性和 β多样性无显著改变(t=-1.407,P=0.190;t=-1.410,P=0.189;t=-2.017,P=0.071;U=6.000,P=0.055;F=1.030,P=0.141);肠道瘤胃球菌属、考拉杆菌属、Lachnospiracea_incertae_sedis、韦荣氏球菌属、黄杆菌属和Bacteroides_sp._SLC1-38 的丰度显著增加(U=3.500,P=0.013;U=7.000,P=0.050;U=6.000,P=0.022;U=6.000,P=0.022;U=7.000,P=0.050;U=3.000,P=0.007);线性判别分析效应量(Linear discriminant analysis Effect Size,LEfSe)分析表明高脂组中对差异影响贡献较大的物种有埃希氏菌属/志贺氏菌属、瘤胃球菌属、考拉杆菌属、Lachnospiracea_incertae_sedis和Bacteroides_SP._SLC1-38.结论 孕前和孕期高脂饲料喂养导致PD 0.5仔鼠肠道代谢相关菌和致病菌的丰度增加.

目的:观察超声介导药物靶向递送技术直肠导入美沙拉嗪,结合肛肠疾病手术术后局部换药,治疗轻度、中度溃疡性结肠炎(UC)合并肛肠疾病的临床疗效.方法:选择经内镜检查临床确诊的轻度、中度UC合并肛肠疾病患者200例,随机分为治疗组合和对照组,各100例.治疗组:术后第1天开始,在术后切口常规护理、消毒、局部手术切口换药的基础上,予美沙拉嗪超声介导药物靶向递送技术直肠导入,每日1次,每次30min.对照组:术后第1天开始,在术后切口常规护理、消毒、局部手术切口换药的基础上,予美沙拉嗪口服,疗程均为8周.观察两组患者的总有效率.收集患者治疗前后血清,分别检测CRP、PCT、ESR水平.术中取新鲜的感染组织,避免采集浅表的组织碎屑,术后20d观察创面愈合情况,取创面肉芽组织,行HE染色,及HE染色和免疫组化检测两组患者治疗后组织中CD68、溶菌酶Lyn、血管内皮生长因子VEGF、成纤维细胞生长因子SMA在切口肉芽组织中的表达.结果:治疗组和对照组总有效率为(90%vs80%P<0.05),有统计学差异显著;术后8周治疗组血清CRP、PCT、ESR明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组切口肉芽组织中CD68、溶菌酶Lyn、血管内皮生长因子VEGF、成纤维细胞生长因子SMA均表达阳性,其中治疗组CD68、VEGF、SMA在切口肉芽组织中阳性细胞率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:超声介导药物靶向递送技术直肠导入美沙拉嗪结合肛肠疾病手术术后局部换药治疗轻度、中度溃疡性结肠炎(UC)合并肛肠疾病较单用美沙拉嗪口服结合肛肠疾病手术术后局部换药能更好地改善患者的临床症状,具有更好的临床疗效.

目的 探讨口炎清颗粒联合溶菌酶肠溶片治疗复发性口腔溃疡的临床疗效.方法 选取2017年5月-2018年5月在天津市宝坻区人民医院治疗的复发性口腔溃疡患者150例,根据就诊号分为对照组(75例)和治疗组(75例).对照组口服溶菌酶肠溶片,100mg/次,3次/d;治疗组在对照组的基础上口服口炎清颗粒,20g/次,2次/d.两组患者均治疗14d.观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者临床症状评分、炎症因子水平和T淋巴细胞亚群水平.结果 治疗后,对照组临床有效率为81.33％,显著低于治疗组的94.67％,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组患者症状积分均显著降低(P＜0.05),且治疗组患者上述临床症状评分明显低于对照组(P＜0.05).治疗后,两组患者血清白细胞介素-6 (IL-6)、IL-8、IL-17、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平均下明显降低(P＜0.05),且治疗组患者上述炎症因子水平明显低于对照组(P＜0.05).治疗后,两组患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均显著升高(P＜0.05),而CD8+水平显著降低(P＜0.05),且治疗组患者上述T淋巴细胞亚群水平明显好于对照组(P＜0.05.结论 口炎清颗粒联合溶菌酶肠溶片治疗复发性口腔溃疡能够明显改善临床症状,降低机体炎症反应,具有一定的临床推广应用价值.

目的 分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征. 方法 根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物,PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、signalP 4.1、TMHMM2.0、Smart、MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析,并构建系统进化树.取含有广州管圆线虫I期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,感染后24 h统一饲养,分别于感染后1、10、20、30 d各取3～5只福寿螺采集肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,未感染的福寿螺为阴性对照组.提取各个感染时期福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA,荧光定量PCR分析福寿螺G型溶菌酶mRNA的组织表达特征,设定对照组福寿螺各组织的G型溶菌酶mRNA的相对表达量为1.0±0.0. 结果 PCR扩增福寿螺G型溶菌酶基因片段,长度约为800 bp.测序结果显示,为一段828 bp的完整开放读码框,编码275个氨基酸.生物信息学分析结果显示,G型溶菌酶基因编码产物为稳定的疏水性蛋白,在1～19位存在1个信号肽,主要在细胞外包括细胞壁发挥作用,在18～85位氨基酸处存在1个SH3b结构域.系统进化树分析显示,福寿螺G型溶菌酶与尖膀胱螺的亲缘关系最近,序列一致性达79％;其次与海湾扇贝等其他软体动物较近,并聚类在一个大的分支上.荧光定量PCR结果显示,对照组雌性成年螺肝胰腺组织中,G型溶菌酶mRNA的拷贝数为2 238±158,高于雄性的685±27 (P＜ 0.05).福寿螺感染广州管圆线虫后,肝胰腺、肾脏、肠道、鳃和头足部的G型溶菌酶基因相对表达量,与对照组相比均有不同程度的下降(P＜0.01).感染后1、10、20、30 d鳃中G型溶菌酶mRNA的相对表达量分别为0.002±0.002、0.012±0.050、0.001±0.000、0.004±0.003,均低于对照组(P＜ 0.01);肾脏组织中10d和20 d的相对表达量低于对照组(P＜0.05);肝胰腺组织中1、10和20 d的相对表达量低于对照组(P＜0.05);感染后1、10、20、30 d肠道组织中的相对表达量分别为0.280±0.040、0.070±0.030、0.039±0.002、0.120±0.050,均低于对照组(P＜0.05),头足部组织中的相对表达量分别为0.280±0.150、0.150±0.008、0.031±0.011、0.120±0.030,均低于对照组(P＜0.05). 结论 福寿螺感染广州管圆线虫后,G型溶菌酶基因在鳃、肠、头足组织中各个感染时期表达均下调,肝胰腺组织中感染后1、10、20 d表达下调,肾脏组织中感染后10d、20 d表达下调.

目的:探讨康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗阿弗他溃疡的临床疗效观察及对血清炎症因子和SIgA(免疫球蛋白A)表达的影响.方法:选取我院2015年1月到2019年1月共收治的100例阿弗他溃疡患者,根据治疗方法分为观察组与对照组,每组50例患者.给予对照组患者口服葡萄糖酸锌、维生素C、维生素B联合口腔溃疡散常规治疗,给予观察组患者在对照组治疗基础上应用康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗,对比两组患者的临床疗效果,对比两组患者血清炎症因子指标,对比两组患者SIgA和IgG,并对比两组患者的疾病复发情况.结果:对照组患者治疗总有效率为84.00％,观察组患者治疗总有效率为95.00％,观察组明显高于对照组(P＜0.05);对比两组患者治疗前后的炎症因子水平发现,两组患者治疗前肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、血栓素B2 (thromboxane B2,TXB2)水平对比无明显差异(P＞0.05),两组患者治疗后TNF-oα、IL-1β、TXB2水平明显降低,且观察组低于对照组(P＜0.05);两组患者治疗前免疫球蛋白A(secretory im-munoglobulinA,SIgA)和免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)指标对比无明显差异(P＞0.05),治疗后,观察组患者的SIgA指标明显高于对照组(P＜0.05),观察组患者的IgG指标明显低于对照组(P＜0.05);通过对比两组患者的疾病复发情况发现,观察组患者3个月、6个月和12个月的疾病复发率明显低于对照组(P＜0.05).结论:对阿弗他溃疡患者应用康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗,能够提升患者的治疗效果,减轻患者炎症情况,减少患者疾病复发情况,值得临床应用推广.

背景:肠黏膜更新是维持机体稳态的关键生理过程,其中隐窝干细胞是肠上皮增殖和分化的驱动力.沉默信息调节因子(silent information regulator,SIRT)参与细胞的基因修复、代谢、能量平衡和寿命的调节,在肠上皮稳态中的研究逐步成为热点.肠类器官由单个隐窝干细胞经3D培养形成,可体外呈现肠上皮更新及受损后修复过程,是研究肠黏膜更新的最新模式.目的:探究SIRT6基因特异性敲除(SIRT6-i/-i)小鼠模型肠黏膜形态、肠类器官形成及其转录组学的特征性变化.方法:①采用Cre-loxp方法建立SIRT6-i/-i小鼠模型,制备小肠组织石蜡切片并进行苏木精-伊红染色,观察其病理变化,免疫组化检测肠干细胞标记物Lgr5和潘氏细胞标记物溶菌酶的表达;②体外构建SIRT6-i/-i小鼠肠类器官模型,Western-blot检测类器官SIRT6蛋白变化,免疫荧光检测肠类器官Lgr5、细胞角蛋白20和黏蛋白2蛋白表达变化;③采用肠组织进行转录组测序,分析该模型小鼠差异基因及相关功能的特征变化.结果 与结论:①与野生型对照小鼠肠黏膜形态比较,SIRT6-i/-i小鼠肠黏膜出现绒毛稀疏、变短,隐窝高度变浅,且杯状细胞数目增多,潘氏细胞数目明显减少,Lgr5和溶菌酶的表达明显降低;②SIRT6-i/-i小鼠肠类器官中SIRT6蛋白表达明显降低,培养中出芽率明显减少,且Lgr5表达降低,吸收上皮细胞标记物细胞角蛋白20和杯状细胞标记物黏蛋白2表达水平升高;③转录组结果显示,与野生型对照小鼠比较,模型小鼠肠组织的差异基因有846个,其中上调基因438个,下调基因408个,差异基因在京都基因与基因组百科全书通路富集前5位的分别是化学致癌、药物代谢、视黄酸代谢、亚油酸代谢和类固醇生物合成,显著富集通路中关联的基因主要为Cyp2c29、Cyp2c65、Cyp3a11、Cyp3a25等Cyp450家族的改变;④结果表明,SIRT6缺失会导致肠道干细胞增殖和分化功能失衡,其机制可能与SIRT6调控代谢通路有关,其中SIRT6对细胞色素P450家族的调控与肠黏膜更新稳态关系密切.

目的:观察清心脾颗粒联合常规西药治疗心脾实热证小儿疱疹性口腔炎的临床疗效.方法:选取80例心脾实热证疱疹性口腔炎患儿,按数字奇偶法随机分为治疗组与对照组各40例.对照组给予单磷酸阿糖腺苷、溶菌酶肠溶片等常规西药治疗,治疗组在对照组基础上给予清心脾颗粒治疗.治疗7d后评估2组临床疗效、中医证候积分、症状缓解时间及血清炎症因子[C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平.结果:治疗组总有效率为97.50％,对照组为85.00％,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,2组中医证候积分均较治疗前降低(P＜0.05),且治疗组中医证候积分低于对照组(P＜0.05).治疗后,治疗组退热时间、疱疹消退时间、疼痛缓解时间、饮食恢复时间均短于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,2组CRP、TNF-α水平均较治疗前降低(P＜0.05),IL-10水平较治疗前升高(P＜0.05);且治疗组CRP、TNF-α水平低于对照组(P＜0.05),IL-10水平高于对照组(P＜0.05).结论:清心脾颗粒联合常规西药治疗心脾实热证小儿疱疹性口腔炎疗效确切,可减轻机体炎症反应,促进临床症状体征缓解.