目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)通过自分泌运动因子(ATX)/溶血磷脂酸(LPA)信号对糖稳态的损伤作用及相关机制.方法 利用基因芯片数据库分析HBV对ATX表达的影响.Western blotting检测HBV细胞株HepG2215、稳定表达HBV反式调节蛋白HBx和PreS2的HBx-HepG2和PreS2-HepG2细胞、对照组HepG2细胞的ATX蛋白表达水平.双萤光素酶报告基因检测HBx和PreS2对ATX启动子作用.构建稳定表达HBx和Pre-S2的小鼠分泌胰岛素细胞HBx-NIT、PreS2-NIT,检测两者对胰岛素分泌的影响.利用rAAV8-1.3HBV经尾静脉注射C57BL/6小鼠复制HBV小鼠模型,NC为注射同体积生理盐水的C57BL/6小鼠.小鼠按2 g/kg腹腔注射葡萄糖进行糖耐量试验(GTT).采用液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附试验和血糖分析仪分别检测小鼠血清LPA、血清胰岛素和血糖浓度.结果 HepG2215细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2(P＜0.05).PreS2与ATX启动子共转染组萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P＜0.05),HBX与ATX启动子共转染组的萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P＜0.05).HBx-HepG2细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2细胞(P＜0.05),PreS2-HepG2细胞高于HepG2细胞(P＜0.05).添加不同浓度LPA后NIT细胞胰岛素分泌表达量比较,差异有统计学意义(P＜0.05).1～3 μmol/L LPA相对表达量与胰岛素分泌呈负相关(r=-0.990,P＜0.05).HBx-NIT细胞添加Ki16425前的胰岛素水平低于NIT细胞(P＜0.05),PreS2-NIT细胞低于NIT细胞(P＜0.05).NIT、HBx-NIT和PreS2-NIT细胞添加Ki16425后的胰岛素水平较添加前高(P＜0.05).实验组血清LPA相对表达量、平均空腹血糖浓度、注射葡萄糖后的60、120 min平均血糖浓度和血糖浓度曲线下面积(AUC)平均值较对照组高(P＜0.05).实验组注射葡萄糖后15 min血清胰岛素浓度、血清胰岛素水平的AUC值较对照组低(P＜0.05).用HBV小鼠GTT血糖AUC绘制的ROC曲线显示,曲线面积为 0.770(95％CI:0.556,0.984),特异性为 60.00％(95％CI:0.122,0.738),敏感性为 90.00％(95％CI:0.555,0.998).用HBV小鼠空腹血糖浓度绘制的ROC曲线显示,曲线面积为0.865(95％CI:0.703,1.027),特异性为80.00％(95％CI:0.444,0.975),敏感性为60.00％(95％CI:0.262,0.878).实验组胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感指数均小于对照组,胰岛素抵抗指数大于对照组(P＜0.05).结论 HBV反式调节蛋白HBx和Pre-S2上调ATX的表达,增强ATX/LPA信号,导致胰岛素分泌抑制,糖耐量异常,糖稳态受损.

目的:筛选微小病变肾病（minimal change disease，MCD）的差异表达基因及其作用通路，探讨MCD发病的分子机制。方法:芯片数据来源于美国国立生物技术信息中心（NCBI）平台下的基因表达综合数据库（GEO）。选取含MCD信息的数据芯片GSE104948和GSE104954，数据集包含19例MCD肾活检组织和36例正常对照肾组织的基因表达阵列数据。利用生物信息学方法分析基因芯片数据，使用在线工具GEO2R分析数据及筛选差异表达基因，通过DAVID 6.8数据库对差异表达基因进行GO和KEGG功能富集分析，以及参与代谢通路基因之间的网络分析。用String 11.0数据库和Cytoscape 3.7.2软件分析MCD差异表达基因之间的关系，以及对基因之间进行可视化分析。采用Cyto Hubba插件分析蛋白质相互作用网络的关联度，筛选关键表达基因。结果:用在线工具GEO2R共筛选出MCD患者302个高表达的差异基因。GO分析结果显示，差异表达基因的产物多定位在细胞外基质、细胞外泌体、细胞核周等区域，发挥细胞黏附分子结合、脱氧胞苷脱氨酶活性、蛋白质二聚化活性、2'-5'-寡腺苷酸合成酶活性等功能，以及参与细胞外基质形成、细胞溶解、细胞凋亡、炎性反应和免疫反应等生物过程。KEGG分析结果显示，差异表达基因在局部黏附、NOD样受体等信号通路中富集。结合GO分析和Cyto Hubba分析结果，筛选出 PYCARD基因为诱导MCD肾脏炎性反应发生的关键基因。 结论:炎性反应可能参与了MCD的发生发展， PYCARD基因可能为诱发MCD炎性反应的关键基因。

目的:探讨环状RNA circLPAR1对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测2018年1月至2019年6月在河南省人民医院骨科接受治疗的40例骨肉瘤患者的肿瘤组织和对应的瘤旁组织环状RNA溶血磷脂酸受体(circLPAR1)的表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、集落形成实验、细胞迁移和侵袭实验来探讨circLPAR1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。此外，通过生物信息学分析、双荧光素酶报告实验和RNA下拉实验，以阐明circLPAR1在骨肉瘤细胞中的潜在分子机制。组间比较采用配对 t检验或独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，计数资料组间比较采用 χ2检验。 结果:骨肉瘤组织中circLPAR1的水平高于瘤旁组织(3.546±1.624比1.654±0.832， t＝19.734， P<0.01)，circLPAR1表达水平高与年龄和性别无明显相关( χ2＝3.194、0.530， P>0.05)，但与临床分期和远处转移有关( χ2＝6.328、9.337， P<0.05)，U-2OS和MG-63的si-circLPAR1组穿膜细胞数显著低于si-NC组(72.772±9.662、66.332±8.571比335.821±21.529、276.529±16.332， P<0.01)；qRT-PCR显示circLPAR1探针结合的RNA中具有显著的miR-647富集(U-2OS：7.132±0.568比1.133±0.141， t＝21.881， P<0.01；MG-63：7.524±1.813比1.532±0.015， t＝19.228， P<0.01)。野生型circLPAR1 WT与miR-647共转染组细胞的荧光素酶活性明显低于其他组(U-2OS：0.247±0.072比0.983±0.088、0.987±0.092、0.923±0.079， F＝63.228， P<0.01；MG-63：0.276±0.083比0.973±0.152、1.021±0.226、0.977±0.135， F＝58.335， P<0.01)；si-circLPAR1＋anti-miR-647组比si-circLPAR1组的集落细胞数(U-2OS：152.449±7.332比43.283±4.288， t＝－38.662， P<0.05；MG-63：192.344±8.668比71.223±12.384， t＝－32.891， P<0.05)、迁移细胞数(U-2OS：327.263±21.632比89.448±6.335， t＝21.836， P<0.05；MG-63：278.332±16.527比72.682±6.893， t＝19.772， P<0.05)及侵袭细胞数(U-2OS：341.883±11.392比67.663±7.421， t＝8.633， P<0.05；MG-63：325.823±10.284比62.739±8.883， t＝9.156， P<0.05)显著增高。 结论:circLPAR1通过吸附miR-647，从而促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。

目的:对2个遗传性异常纤溶酶原血症家系进行表型及基因突变分析，探讨遗传性异常纤溶酶原血症与脑梗死之间的关系。方法:回顾性分析2021年1月和3月温州医科大学附属第一医院神经内科确诊的2例发生脑梗死患者的临床资料，采集先证者1及其家系成员（共4代8人）和先证者2及其家系成员（共3代5人）的外周静脉血标本，检测纤溶酶原活性（PLG：A）、蛋白C活性、蛋白S活性、抗凝血酶活性及纤溶酶原抗原（PLG：Ag）、纤维蛋白原、D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物含量等指标进行分析。采用聚合酶链反应扩增PLG基因的所有19个外显子及其5′和3′侧翼区，用DNA直接测序法分析其扩增产物；测序结果使用Chromas软件与美国国家生物技术信息中心数据库中公布的人类PLG基因参考序列进行比对，寻找突变位点，采用反向测序法予以证实。结果:2例脑梗死患者均为青年起病，先证者1的PLG：A降低为21%，其4名家庭成员的PLG：A降低至50%左右；先证者2及2名家庭成员的PLG：A降低至50%左右；2例先证者及其家系成员的PLG：Ag和其余检测指标均基本正常。通过基因分析发现，先证者1的PLG基因第15号外显子存在c.1858G>A纯合错义突变，先证者1的4名家系成员和先证者2及其2名家系成员的PLG基因第15号外显子存在c.1858G>A杂合错义突变，导致纤溶酶原的第620位丙氨酸突变为苏氨酸（p.Ala620Thr）。结论:PLG：A水平降低与PLG基因p.Ala620Thr错义突变有关，先证者出现脑梗死可能与p.Ala620Thr错义突变导致机体纤维蛋白溶解功能受抑制有关。

目的:分析剥脱综合征(XFS)患者房水蛋白质的表达差异。方法:收集2020年6月至2021年1月在和田地区人民医院拟行手术治疗的维吾尔族年龄相关性白内障患者和XFS伴白内障患者各10例，分别作为白内障组和XFS组。术中借助超声乳化手术通道吸取前房中部50～100 μl房水。通过非标记定量蛋白质组学质谱分析技术对房水中提取的蛋白进行分析，以白内障组作为对照组，并根据 P<0.05、差异倍数>1.5的标准筛选得到XFS组的差异表达蛋白。通过基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析来探讨XFS组差异表达蛋白的功能及调控信号通路。 结果:与白内障组相比，XFS组共鉴定出25个差异表达蛋白，这些蛋白主要涉及细胞黏附、受体、水解酶、分子运输等。表达下调的蛋白有14个，包括补体H因子相关蛋白1(CFHR1)、内质网分子伴侣BiP(HSPA5)、双糖链蛋白多糖(BGN)、FRAS1相关的细胞外基质蛋白2(FREM2)、血红蛋白亚基δ(HBD)、血红蛋白亚单位γ1(HBG1)、棕榈酰蛋白水解酶2(PPT2)等。表达上调的蛋白有11个，包括转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)、极低密度脂蛋白受体、层粘连蛋白亚基α2(LAMA2)、凝血因子Ⅸ(F9)等。其中，FREM2为XFS组差异表达最显著的蛋白，其在XFS组个体样本中表达水平基本一致。GO分析显示，这些差异蛋白主要定位于胶原蛋白的细胞外基质、结合珠蛋白－血红蛋白复合物、血浆脂蛋白颗粒和溶酶体腔；分子功能和生物学过程显示，HBD和HBG1参与细胞解毒过程，PPT2参与水解酶活性，BGN和LTBP2参与糖胺聚糖结合。KEGG信号通路分析显示，CFHR1和F9参与补体和凝血级联通路；FREM2和LAMA2参与细胞外基质相互作用通路。结论:XFS的进展可能与细胞外基质蛋白的改变、血－房水屏障破坏以及潜在的炎症反应有关。显著下调的FREM2可能作为XFS潜在的生物学标志物。

目的:探讨1例晚发型糖原贮积症Ⅱ型(LOPD)型患儿的临床特征、 GAA基因变异特点及溶酶体酶α-葡萄糖苷酶(GAA)活性改变情况。 方法:收集2020年8月在四川大学华西第二医院临床确诊的1例GSDⅡ患儿的病历资料，采集患儿及其父母的外周血样，分别用于外周血白细胞、淋巴细胞分离及基因组DNA提取，检测2种细胞中加入GAA同工酶抑制剂阿卡波糖和不加抑制剂时溶酶体酶GAA的活性。同时收集20例健康受试者的外周血样，混合后分别分离白细胞与淋巴细胞，与患儿家系同批次进行GAA活性测定，作为正常参考值。基因组DNA用于神经肌肉病基因panel检测，并对候选变异进行Sanger测序验证和保守性分析。结果:患儿为9岁女性，2岁11个月时发现语言运动发育落后，就诊时走路不稳、上台阶困难及明显脊柱侧弯，患儿血清肌酸激酶显著升高、肌电图异常，心脏彩色多普勒超声未见异常。基因检测发现其携带 GAA基因c.1996dupG(p.A666Gfs*71)和c.701C>T(p.T234M)复合杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南，分别评级为致病变异(PVS1+PM2_Supporting +PM3)和可能致病变异(PM1+PM2_Supporting +PM3+PM5+PP3)。患儿、患儿父亲、母亲白细胞中GAA活性在不加抑制剂时分别为同批次正常值的76.1%、91.3%、95.6%，加入抑制剂时分别为同批次正常值的70.8%、112.9%、128.2%，白细胞中GAA活性在加入抑制剂后降低约6 ~ 9倍；患儿、患儿父亲、母亲淋巴细胞中GAA活性在不加抑制剂时分别为同批次正常值的68.3%、59.0%、59.5%，在加抑制剂时分别为同批次正常值的41.0%、89.5%、57.7%，淋巴细胞中GAA活性在加入抑制剂后降低约2 ~ 5倍。 结论:患儿被诊断为LOPD，其 GAA基因的c.1996dupG和c.701C>T复合杂合变异可能是其遗传学病因。LOPD患儿GAA残余酶活性范围较宽，酶活性改变不典型，在诊断时不能仅依据酶活性检测，而需要结合临床表现、基因检测和酶活性检测进行综合诊断。

目的:基于蜡螟幼虫感染模型探讨光滑念珠菌临床分离株胞外酶活性与致病性之间的关系。方法:采用实验性研究方法，收集青海省人民医院2021年6月至2022年1月临床分离的非重复光滑念珠菌71株。采用牛血清蛋白琼脂培养基、卵黄琼脂培养基、羊血琼脂培养基、吐温-80琼脂培养基和三丁酸甘油酯琼脂培养基分别检测光滑念珠菌的天冬氨酰蛋白酶、磷脂酶、溶血素、酯酶和脂肪酶的活性；采用光滑念珠菌ATCC2001不同浓度（1.25×10 8 CFU/ml、2.50×10 8 CFU/ml、3.75×10 8 CFU/ml、5.00×10 8 CFU/ml）的菌悬液感染蜡螟幼虫并计算半数致死浓度（LC 50）；采用蜡螟幼虫组织病理学及病原学分析，确定感染模型构建是否成功；将光滑念珠菌临床分离株配制成LC 50浓度，通过注射感染蜡螟幼虫以检测对蜡螟幼虫致病性；采用Spearman检验或Pearson检验分析光滑念珠菌临床分离株胞外酶活性与蜡螟幼虫体内致病性之间的相关性。 结果:71株临床分离的光滑念珠菌，培养2 d后均表现为低溶血活性；培养4 d后均可检测到天冬氨酰蛋白酶，其中有7株（9.86%）、19株（26.76%）、45株（63.38%）分别表现出低、中、高天冬氨酰蛋白酶活性；培养7 d后71株均未检测到磷脂酶、酯酶和脂肪酶活性。光滑念珠菌对蜡螟幼虫LC 50= 2.50×10 8 CFU/ml；实验组蜡螟幼虫，肠道组织病理切片检见真菌孢子，培养后经微生物质谱鉴定为光滑念珠菌，而对照组病理切片及培养均未发现真菌。Spearman检验显示，天冬氨酰蛋白酶活性指数与蜡螟幼虫生存率呈线性正相关（ r= 0.73， P<0.01），差异有统计学意义；Pearson检验显示，溶血活性指数与蜡螟幼虫生存率之间没有明显的线性关系（ r=0.16， P>0.05），差异无统计学意义。 结论:本研究中光滑念珠菌临床分离株均有天冬氨酰蛋白酶活性和低溶血活性，无磷脂酶、酯酶和脂肪酶活性。光滑念珠菌天冬氨酰蛋白酶活性与蜡螟幼虫体内致病性呈正相关性。

目的:基于单细胞转录组测序分析百草枯（PQ）诱导的帕金森病（PD）样小鼠大脑小胶质细胞亚群差异基因和相关信号通路，为阐明PQ致动物大脑PD样改变的机制研究提供线索。方法:于2021年9月，将6周龄C57BL/6雄性小鼠6只随机分为对照组和实验组（每组3只），分别以生理盐水、10.0 mg/kg PQ进行腹腔注射，每3天1次，连续10次注射造模。染毒结束后取小鼠大脑，进行10× Genomics单细胞转录组测序。根据基因表达特征筛选小胶质细胞亚群，进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。进一步筛选实验组和对照组间小胶质细胞亚群的差异基因，利用生物信息学工具进行功能显著性富集分析。采用0、60、90 μmol/L的PQ溶液处理小鼠小胶质细胞（BV2细胞），通过实时荧光定量PCR实验验证差异基因己糖激酶2（Hk2）、ATPase H+转运V0亚基b（Atp6v0b）、神经调节蛋白1（Nrg1）的表达情况。结果:根据特征基因肌醇多磷酸-5-磷酸酶d（Inpp5d）和转化生长因子β受体1（Tgfbr1）将Cluster 7和Cluster 20亚群识别为小胶质细胞亚群，且该亚群反映小胶质细胞活化M2表型。生物信息学分析结果显示，所识别小胶质细胞亚群特征基因均富集到内吞作用；在分子功能方面主要富集跨膜受体蛋白激酶活性和细胞因子结合等功能。Cluster 7亚群上调基因主要富集于溶酶体通路、内吞作用等通路；下调基因主要富集于神经退行性疾病等信号通路。Cluster 20亚群上调基因主要富集于与PD相关的信号通路；下调基因主要富集于环磷酸腺苷（cAMP）信号传导途径、神经系统发育、突触功能等信号通路。实时荧光定量PCR检测结果显示，与0 μmol/L比较，90 μmol/L PQ溶液处理后BV2细胞的Hk2 mRNA和Atp6v0b mRNA表达水平升高，Nrg1 mRNA表达水平降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:小胶质细胞在PQ诱导的PD样小鼠模型中被激活，且向M2表型极化，其功能与溶酶体（内吞）、突触功能及PD相关信号通路的调节有关。

目的:评估流动注射-串联质谱法(FIA-MS/MS)应用于溶酶体贮积症(LSDs)筛查的可行性。方法:病例对照研究。使用含酸性β葡糖脑苷脂酶(ABG)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、β半乳糖脑苷脂酶(GALC)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、α半乳糖苷酶A(GLA)和酸性α葡糖苷酶(GAA)6种酶的底物及化学结构与相应产物类似的同位素内标准品缓冲液孵育，经液液萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价精密度、准确度、回收率、稳定性和携带污染。使用2022年7月至2023年3月上海市儿童医院2 845份新生儿筛查样本和10例明确诊断的LSDs患儿样本进行临床验证。结果:6种低浓度酶活性检测值，批内变异系数(CV%)为4.650%～9.020%，批间CV%为6.990%～11.350%，高浓度酶活性检测值批内CV%为6.553%～8.690%，批间CV%为6.590%～12.850%；6个酶活性检测值与靶值的偏倚在－20.59%～20.45%；不同稀释浓度酶活性检测回收率为46.00%～136.67%，实测值与系列理论值间相关系数( R2)为0.986～0.997；稳定性评价6种酶活性差异均<15.00%；携带污染评价6种酶活性差异均<20.00%；6种酶活性在人群呈偏态分布，10例LSDs患儿酶活性明显低于切值，能有效检出相应疾病。 结论:FIA-MS/MS检测ABG、ASM、GALC、IDUA、GLA和GAA有较高的精确性和准确度，有临床应用价值，可作为戈谢病、尼曼-皮克病A/B、克拉伯病、黏多糖贮积症Ⅰ型、法布里病和糖原贮积症Ⅱ型的筛查技术。

目的:分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis，ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点，为选择酶学检测指标提供依据。方法:检测两例确诊为ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性，比较患者与健康个体的差异；分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词，检索PubMed、CNKI、万方数据库，分析总结已报道的ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果:两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高，程度由高至低分别为：芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A，ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase，IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase，GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1，GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A，GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase，NAGLU)(2倍)，葡萄糖脑苷酯酶(glucocerebrosidase，GBA)(无明显变化)。两例患儿白细胞中多种溶酶体酶的活性与健康个体相比无差异，均在正常范围。筛选出22篇文献，共报道了15个溶酶体酶学指标，血浆中升高最明显的是总己糖胺酶(hexosaminidase A and B，Hex A+B)(平均升高24.4倍)和α-甘露糖苷酶(α-mannosidase，α-man)(24.7倍)，其次是ASA(22.4倍)，GUSB为18.8倍；选用较多的指标分别是Hex A+B(12篇)、α-man(11篇)和GUSB(10篇)。结论:溶酶体酶学分析是ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β不可或缺的辅助诊断手段，通过对两例患儿的血浆酶学的分析和文献复习，推荐选用ASA、GUSB、Hex A+B和α-man为二者的血浆溶酶体酶学分析指标。