目的 探讨滇桂艾纳香提取物通过促进子宫平滑肌收缩治疗功能失调性子宫出血(DUB)的作用机制.方法 利用米非司酮联合米索前列醇建立DUB大鼠模型,成模的雌性大鼠40只,随机分5组:正常妊娠组、DUB模型组、益母草颗粒3.125 g·kg-1组、滇桂艾纳香提取物0.4 g·kg-1组以及0.2 g·kg-1组,另取8只未受孕性成熟雌性大鼠作空白对照组,观察滇桂艾纳香提取物对DUB模型大鼠子宫平滑肌收缩的影响,Western blotting法测定大鼠子宫平滑肌中β2肾上腺素受体(β2AR)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及p-CREB蛋白表达水平,并检测大鼠子宫平滑肌中蛋白激酶A(PKA)活性和Ca2+离子浓度.结果 与DUB模型组相比,滇桂艾纳香提取物可提高大鼠子宫收缩频率(P＜0.05),增加子宫平滑肌Ca2+离子浓度,并且增加p-CREB/CREB蛋白表达(P＜0.05);滇桂艾纳香提取物还可降低子宫平滑肌PKA活力(P＜0.01),但对β2受体表达没有明显影响.结论 滇桂艾纳香提取物可能是通过抑制β2受体的活化,间接增强转录调节因子CREB对与子宫平滑肌收缩相关的转录调控,从而促使子宫肌层收缩,产生治疗DUB的作用.

目的 探究滇桂艾纳香活性部位(BRA)对功能失调性子宫出血症(DUB)大鼠的治疗作用及潜在的作用机制.方法 通过流产不全建立功能失调性子宫出血大鼠模型,随机分空白对照组、正常妊娠组、DUB模型组、益母草组及BRA低、高剂量组,连续灌胃至妊娠第14天,记录子宫出血量,并检测凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)及血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量.结果 与DUB模型组子宫出血量(0.272±0.067)mL相比,BRA高剂量组和BRA低剂量组子宫出血量[(0.197±0.035)mL、(0.175±0.051)mL]均减少,差异均有统计学意义(P均＜0.05).与DUB模型组FIB含量(19.184±2.879)mg/dL相比,BRA低剂量组FIB含量(24.865±4.587)mg/dL显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与DUB模型组PT(23.313±3.741)s相比,BRA高剂量组PT(18.889±1.061)s显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05).与 DUB 模型组 TXB2/6-keto-PGF 1α(1.26±0.18)相比,BRA 低剂量组大鼠TXB2/6-keto-PGF 1α(1.50±0.10)显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BRA具有减少DUB大鼠子宫出血的作用,其作用机制可能是通过影响外源性凝血途径、诱导生成纤维蛋白原,并通过提升TXB2/6-keto-PGF1α调节凝血系统障碍,从而对功能失调性子宫出血症发挥治疗作用.

目的:建立滇桂艾纳香药材中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和芦丁4种成分的含量测定方法,同步测定4种成分含量,为滇桂艾纳香药材的质量控制提供参考.方法:采用HPLC转换波长法,Inertsil ODS-3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0～25 min,10％～18％A;25～45 min,18％～40％A),检测波长256 nm(0～15 min,原儿茶酸),327 nm(15～30 min,绿原酸、咖啡酸),360 nm(30 ～ 60 min,芦丁),柱温20℃,流速1.0 mL· min-.结果:滇桂艾纳香中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、芦丁进样量分别在0.007～0.13 μg(r=0.999 98),0.219 ～4.38 μg(r=0.999 94),0.014 ～0.28 μg(r =0.999 97),0.049～0.98 μg(r =0.999 97)与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.84％ (RSD 2.2％),101.16％ (RSD 0.9％),98.00％ (RSD 2.8％),101.73％ (RSD 1.4％).含量测定结果显示,百色平果县所产药材中原儿茶酸、绿原酸和芦丁含量均较高,百色靖西县和四川药材咖啡酸含量较高.结论:所建立的方法稳定可靠,灵敏度高,重复性好,可同时测定滇桂艾纳香药材中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和芦丁4种成分的含量,可为滇桂艾纳香药材质量评价提供参考.

目的:建立滇桂艾纳香药材HPLC指纹图谱分析方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2％磷酸溶液,梯度洗脱;流速1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长280nm.建立滇桂艾纳香指纹图谱,并对其进行相似度评价、聚类分析和主成分分析.结果:建立了10批滇桂艾纳香药材的指纹图谱共有模式,标定了15个共有峰,指认了原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和芦丁4个指标性成分.10批药材相似度均＞0.9;聚类分析结果将药材聚为3类,主成分分析筛选出影响药材质量的5个主要组分.结论:所建立的指纹图谱及其分析模式稳定可靠,可为滇桂艾纳香的质量控制提供参考.

目的:通过正交试验设计对滇桂艾纳香的提取工艺进行优化.方法:建立HPLC测定滇桂艾纳香中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和芦丁含量的方法, 采用L9 (34) 正交试验法, 选择提取溶剂、溶剂用量和提取时间3个因素, 以原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和芦丁4种成分含量建立综合评价指标, 优化滇桂艾纳香提取工艺.结果:优选出滇桂艾纳香提取工艺, 采用回流提取法, 加入10倍量60％甲醇, 提取30 min.结论:所建立的提取工艺稳定可靠, 提取效率高, 对滇桂艾纳香药材及其相关制剂的质量控制具有一定的参考和指导意义.

目的 基于BP人工神经网络分析滇桂艾纳香止血作用的谱效关系.方法 以20批不同产地的滇桂艾纳香为研究对象,建立滇桂艾纳香HPLC指纹图谱;采用华法林化模型大鼠,测定给药后各组凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)水平.采用灰色关联度法,筛选对止血作用密切相关的色谱峰;利用B人工神经网络技术,将化学信息与药效指标数据相关联,建立谱效关系数学模型.结果 20批样品指纹图谱中13个共有峰与药效指标的相关系数均大于0.740,均与药效具有较密切的相关性,以此为基础建立了谱效关系模型.运用神经网络模型预测综合药效值,相对误差的绝对值均小于或等于13.60％,大部分数值的相对误差小于6.7％,模型预测具有较高的精度,性能良好.结论 该谱效关系模型及综合评价体系更加合理,可用于滇桂艾纳香质量标准的完善.

目的 从分子水平快速、准确鉴别壮药材滇桂艾纳香的2个常混淆基原植物假东风草Blumea riparia(小花种)和东风草B.megacephala(大花种),研究假东风草(小花种)和东风草(大花种)的亲缘关系.方法 采用SCoT分子标记研究,利用23条引物对30个植物样本进行扩增,NTSYS软件进行聚类分析,SPSS 20.0软件进行主成分分析,并构建DNA指纹图谱,利用R语言进行Mantel test分析.结果 从23条SCoT引物中筛选出多态性较好且条带清晰、重复性高的引物11条,共扩增出213条带,不同引物扩增出的多态性条带数为8～30条,平均为19.0条,多态性比率为98.12％.UPGMA聚类分析结果显示,供试品种间Dice遗传相似系数为0.373～0.849,遗传相似性(genetic similarity coefficients,GS)在0.421处可将30个样本分为3大类,其中第Ⅰ类为假东风草(小花种),第Ⅱ类与第Ⅲ类均为东风草(大花种),主成分分析结果与聚类结果一致.SCoT引物3所构建的指纹图谱多态性好、条带清晰、种间差异明显,可用于2个品种的鉴定.Mantel test分析结果显示遗传距离与地理距离呈显著相关性(r=0.3929,P=0.01).结论 SCoT分子标记可以准确地区分开假东风草(小花种)和东风草(大花种)2个物种,为壮药材滇桂艾纳香的鉴别提供了新的方法.

目的 建立滇桂艾纳香正丁醇部位HPLC指纹图谱,并测定原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C含量.方法 分析采用ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.2％磷酸,梯度洗脱,建立HPLC指纹图谱,采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件进行相似度评价,SPSS 23.0软件进行聚类分析及主成分数据分析,同时测定6种成分含量.结果 12批滇桂艾纳香有12个共有峰,各批次药材相似度均大于0.9.聚类分析结果显示12批滇桂艾纳香药材可分为2类,主成分分析表明,前2个成分的累计方差贡献率为96.689％.6种成分在其各自的范围内线性关系良好(r≥0.9990),精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于3％,加样回收率平均值为97.1％～102.7％,RSD为1.81％ ～2.82％.结论 该方法稳定准确,可为滇桂艾纳香正丁醇活性部位质量评价提供参考依据.

滇桂艾纳香为壮医常用妇科产后止血药材,疗效好,临床应用广泛.滇桂艾纳香的质量标准不够完善,随着近年化学成分和药理活性研究不断深入,使其质量标志物(quality marker,Q-Marker)的预测成为可能.对滇桂艾纳香进行本草考证、化学成分和主要药理活性总结,并在此基础上结合Q-Marker的核心概念,从化学成分特有性、有效性、可测性和可入血成分方面对滇桂艾纳香Q-Marker进行预测分析,可推测滇桂艾纳香中异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C的含量比例或许可作为滇桂艾纳香化学成分特异性不足的Q-Marker专属性补充,为其质量评价提供了理论依据.

目的 优化滇桂艾纳香配方颗粒喷雾干燥工艺.方法 以提取液相对密度、进风温度、进样速度为影响因素,原儿茶酸含量、喷雾干燥粉末得率、含水量的OD值为评价指标,AHP-CRITIC法结合星点设计-效应面法优化喷雾干燥工艺.结果 最佳条件为提取液相对密度1.00(25℃),进风温度160℃,进样速度10 r/min,OD值为95.58.结论 该方法合理可行,可为滇桂艾纳香配方颗粒的制备及工业化大生产提供基础.