目的 采用高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)结合特征分子网络(feature-based molecular networking,FBMN)技术,对滇白珠 Gaultheria leucocarpa var.crenulata 水提物化学成分进行快速分析.方法 采用Agilent Zorbax EclipseXDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.8mL/min,在正、负离子模式下,采集滇白珠水提物MS/MS数据,并在全球天然产物社会分子网络(Global Natural Products Social Molecular Networking,GNPS)网站(http://gnps.ucsd.edu)上创建 FBMN.根据 Compound Discoverer软件及GNPS数据库匹配结果,结合化合物的精确相对分子质量、特征碎片离子、色谱保留时间,参考对照品、文献及Pubchem、Massbank数据库,快速鉴定滇白珠水提物的化学成分.结果 共从滇白珠水提物中鉴定出130个成分,并区分了同分异构体,包括黄酮类40个、苯丙素类22个、糖苷类19个、有机酸类10个、生物碱类10个、酚类7个、萜类6个、酯类5个、氨基酸类4个、糖类3个、核苷酸类2个、醛类2个,其中5-O-咖啡酰奎宁酸、4-熊酰奎宁酸、邻苯二甲酸二丙酯这3个成分为根据FBMN结果推测解析.结论 FBMN弥补了传统分子网络在鉴定同分异构体方面的不足,HPLC-Q-Exactive Orbitrap MS结合FBMN能快速、准确、全面地鉴定滇白珠水提物化学成分,可为其进一步开发与应用提供依据.

滇白珠 Gaultheria leucocarpa var.Yunnanensis 为我国民间传统药物,常用于风湿、眩晕、闭经、咳嗽等疾病的治疗,目前已从中分离到83种成分,包括水杨酸甲酯糖苷类、黄酮类、木脂素类、萜类、有机酸类等,具有广泛的药理活性,其中抗炎作用尤为显著.但近年来关于滇白珠的质量控制研究较单薄,且大多为基于HPLC法的一种或一类指标性成分含有量测定,不能全面反映药材质量.本文对滇白珠的化学成分、药理作用和质量控制进行归纳总结,以期为该资源的充分开发利用提供依据.

目的:探讨滇白珠醇提物(DBZ)预防给药对大鼠幽门结扎型胃溃疡(A)及乙醇型胃溃疡(B)的抑制作用.方法:采用A模型,观察DBZ对大鼠胃溃疡发生率、溃疡指数以及胃液量、胃酸、胃蛋白酶的影响;采用B模型,观察DBZ对大鼠胃溃疡发生率、溃疡指数以及胃黏膜组织SOD、MDA、PGE2、NO含量的影响.结果:A模型为瘤胃部胃溃疡.模型组胃溃疡发生率高,溃疡指数大,病理检查显示溃疡部位胃组织严重缺损.与模型组比较,DBZ高剂量组大鼠胃溃疡发生率及溃疡指数显著减少,胃组织缺损程度明显减轻,胃液量、胃酸浓度和总酸排出量均显著降低;DBZ低剂量组大鼠胃溃疡指数显著减小,胃组织缺损程度明显减轻,胃酸浓度显著降低;DBZ高、低剂量组对胃蛋白酶活力均没有显著影响.B模型为腺胃部胃溃疡.模型组大鼠胃部出现明显淤血及溃疡.与模型组比较,DBZ高剂量组大鼠胃部没有淤血及溃疡,DBZ低剂量组淤血及溃疡程度明显减轻;DBZ高、低剂量组大鼠胃黏膜组织的SOD含量显著增加、MDA含量显著降低,而对PGE2、NO含量没有显著影响.结论:DBZ预防给药对大鼠A、B模型胃溃疡均具有显著抑制作用.其中对A模型抑制作用可能与减少胃酸分泌有关,对B模型抑制作用可能与升高胃黏膜SOD水平、同时降低MDA水平有关.

目的 水杨酸甲酯糖苷是来源于中药滇白珠的具有明确抗炎作用的新型非甾体天然化合物,该研究探讨其通过抗炎对APP/PS 1模型鼠学习记忆改善的作用.方法 建立APP/PS1老年痴呆小鼠模型,应用Morris水迷宫评价水杨酸甲酯糖苷对学习记忆的影响,并对脑组织病理组织进行尼氏染色、硫磺素T染色和电镜技术观察神经细胞的功能变化.结果 水杨酸甲酯糖苷能够提高AD小鼠空间学习记忆能力,表现为缩短APP/PS 1小鼠的潜伏期,增加其在目标区域的停留时间和穿越次数;其次能够部分减少APP/PS 1小鼠脑内Aβ沉积、缓解神经细胞的损伤、改善神经毡超微结构病变.结论 水杨酸甲酯糖苷可能通过抗炎作用,减少了Aβ沉积和保护神经细胞,从而提高了AD小鼠的学习记忆能力.

目的 建立金骨莲胶囊HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别方法对其进行质量一致性评价,为该制剂的质量控制提供参考.方法 采用ACE Excel 5 C18-PFP(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱进行检测;流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,进行梯度洗脱;体积流量为0.8mL/min;柱温为40℃;检测波长为210nm;进样量为10μL;建立12批金骨莲胶囊指纹图谱.对12批金骨莲胶囊指纹图谱进行相似度评价、层次聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)和主成分分析(PCA),并结合正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)寻找不同批次金骨莲胶囊的差异成分.结果 建立的金骨莲胶囊HPLC指纹图谱共标定了 19个共有峰,其中2、8、11号峰归属于汉桃叶,5、7、10、12、15号峰归属于大血藤,16、17、19号峰归属于透骨香,1号峰为5味药材共有,3号峰归属于八角枫和大血藤,13号峰归属于大血藤和透骨香,4、9、14、18号峰归属于大血藤和汉桃叶,6号峰归属于大血藤、汉桃叶和透骨香.通过与对照品对比指认出2、3、6、7、9、12、13、15、16号峰分别为富马酸、没食子酸、原儿茶酸、红景天苷、绿原酸、香草酸、表儿茶素、鹅掌楸苷、滇白珠苷A.12批金骨莲胶囊指纹图谱相似度均在0.910以上,HCA、PCA2种分析方法均把样品分为了 3类,结合OPLS-DA筛选出了导致各批次之间产生差异的7个差异性标志物,分别为15(鹅掌楸苷)、14、6(原儿茶酸)18、16(滇白珠苷A)、19、9(绿原酸)号色谱峰.结论 该分析方法简单可行、具有良好精密度、重复性和稳定性,建立的指纹图谱可为金骨莲胶囊的质量评价提供参考.

目的:研究滇白珠活性部位对腹泻大鼠结肠组织病理学和水通道蛋白(aquaporin 3,AQP3)表达的影响.方法:60只雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、洛哌丁胺6 mg/kg组和滇白珠活性部位40、80、160 mg/kg组,每组10只.各组动物每天灌胃给药1次,连续12 d,正常对照组、模型对照组给予同容积溶媒.第3d起,除正常对照组外,其余5组在给药1h后,连续10 d按10 mL/kg灌胃给予3.33 g/kg番泻叶提取物造腹泻模型,正常对照组灌胃给予等容量的溶媒.末次给予番泻叶提取物后,观察滇白珠活性部位对大鼠稀便率、稀便等级和腹泻系数的影响.采用苏木精-伊红(HE)染色观察滇白珠活性部位对腹泻大鼠结肠组织病理学改变的影响.采用Western blot和RT-PCR分析滇白珠活性部位对腹泻大鼠结肠组织AQP3蛋白和mRNA表达的影响.结果:滇白珠活性部位40、80、160 mg/kg能显著降低腹泻大鼠稀便率、稀便等级和腹泻系数,抑制结肠腺体内黏液的渗出,减轻肠黏膜及间质损伤(P＜0.05或P＜0.01).Western blot和RT-PCR结果显示,滇白珠活性部位160 mg/kg能显著上调腹泻大鼠结肠组织AQP3的蛋白和基因的表达(P＜0.01).结论:滇白珠活性部位具有止泻作用,能有效保护结肠黏膜和间质细胞,上调结肠组织AQP3蛋白和基因的表达.