唇部及口周是面部活动较为频繁的部位，其衰老可见并随之加速，出现上唇人中变长、红唇变薄、唇形平坦、口角下垂、以及口周皱纹等变化。如何改善上述问题并制定合理的唇部综合年轻化治疗方案成为关注的内容。针对上述问题，从衰老的机制以及美学出发，综合注射、填充、激光、手术等方法的应用范围，探讨适用于不同年龄阶段以及不同唇部与口周状态的年轻化治疗策略。

目的:研究轮状病毒非结构蛋白4的86~175位氨基酸肽段(NSP4 86-175)对大鼠心肌细胞损伤作用及其相关机制。 方法:利用前期制备好的活性NSP4 86-175蛋白处理大鼠H9C2心肌细胞，观察处理后的细胞生长形态变化，检测细胞培养液中LDH活性；Fluo-3AM标记细胞内游离的钙离子，蛋白质处理细胞后，用激光共聚焦显微镜检测大鼠心肌细胞内钙离子浓度变化。流式细胞术分析蛋白质对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、78 kDa葡萄糖调控蛋白(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12 mRNA转录水平；Western blot检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达水平。 结果:正常生长的心肌细胞呈典型的成肌样细胞形态，细胞呈梭形，边界清晰。纯化的NSP4 86-175蛋白刺激后出现明显的细胞病变效应，细胞空泡变性，皱缩变圆，细胞碎裂；蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增高；与对照组相比，NSP4 86-175处理组细胞的钙离子荧光增强，细胞凋亡率增高，细胞凋亡因子caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax-2表达上调，内质网应激(ERS)经典标志分子GRP78、CHOP和caspase-12表达上调。 结论:NSP4 86-175对大鼠心肌细胞具有损伤作用，这可能与它导致细胞内钙超载，并引起内质网应激进而诱导心肌细胞凋亡坏死有关，为轮状病毒肠道外播散感染和致心肌损伤提供了一定的理论依据。

目的:研究岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞形态改变的影响。方法:用不同浓度的岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞进行处理，采用CCK8法检测SiHa细胞体外增殖情况和半抑制浓度(IC 50)。设置不做药物处理的对照组与药物浓度为IC 50值处理的实验组。Transwell小室迁移、侵袭实验分别检测实验组与对照组细胞体外迁移、侵袭能力的变化；激光共聚焦显微镜下观察实验组与对照组细胞体外凋亡形态变化；流式细胞术检测实验组与对照组细胞凋亡率。 结果:岗松总黄酮可抑制宫颈癌SiHa细胞增殖，具有浓度依赖性，作用48 h后其IC 50值为110.8 mg/L。迁移实验中对照组穿膜细胞数为(644.00±10.54)个，实验组穿膜细胞数为(266.00±5.57)个，差异有统计学意义( t＝54.942， P<0.001)。侵袭实验中对照组穿膜细胞数为(298.00±14.36)个，实验组穿膜细胞数为(85.00±8.62)个，差异有统计意义( t＝38.247， P<0.001)。激光共聚焦显微镜观察发现，实验组可见细胞膜皱缩失去原有的形态，细胞核呈现大小不等、不规则形态的碎片，核边集等典型的凋亡形态；对照组未见凋亡形态细胞。流式细胞术检测结果显示，对照组凋亡率为(2.95±1.36)%，实验组凋亡率为(27.54±1.94)%，差异有统计学意义( t＝-17.949， P<0.001)。 结论:岗松总黄酮对体外培养的宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭具有明显的抑制作用，并促进其凋亡。

目的:探讨氧化应激刺激下心肌细胞释放外泌体对巨噬细胞极化的影响及其机制。方法:取H9C2心肌细胞，采用随机数字表法分为0 μmol/L组、100 μmol/L组、200 μmol/L组、300 μmol/L组，分别用相应浓度H 2O 2处理后，各组使用细胞增殖-毒性检测试剂盒（cell counting kit-8, CCK-8）检测细胞活力，Western blot法检测细胞活化形式胱天蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X protein, Bax）水平变化，流式细胞术检测细胞凋亡情况，根据检测结果选用最适处理浓度进行后续实验。另取H9C2心肌细胞，参考经典的超速离心法，提取正常心肌细胞来源外泌体（normal cardiomyocyte-derived exosomes, NC-exo）及氧化应激心肌细胞来源外泌体（oxidative stress cardiomyocyte-derived exosomes, H-exo），透射电镜观察外泌体形态，Western blot法检测外泌体标志蛋白。激光共聚焦显微镜下观察巨噬细胞对外泌体摄取内化情况。选取正常培养巨噬细胞，按随机数字表法分为对照1组（NC1组）、脂多糖1组（LPS1组）、正常心肌细胞来源外泌体预处理+脂多糖组（LPS+NC-exo组）、氧化应激心肌细胞来源外泌体预处理+脂多糖组（LPS+H-exo组）。LPS1组LPS处理6 h, LPS+NC-exo组、LPS+H-exo组分别加入NC-exo、H-exo预处理24 h再进行LPS处理6 h, NC1组不进行处理。使用Western blot法检测诱导型一氧化碳合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）、精氨酸酶-1（arginase-1, Arg-1）、CD86、CD206水平，使用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）方法检测IL-6、TNF-α、趋化因子-10（chemokine-10, CXCL-10) mRNA水平。采用RT-qPCR方法检测外泌体miRNA表达量。另取巨噬细胞按随机数字表法分为对照2组（NC2组）、脂多糖2组（LPS2组）、过表达阴性对照+脂多糖组（LPS+mimic-NC组）、过表达miR-106b-5p+脂多糖组（LPS+106b-mimic组）。LPS2组LPS处理6 h，LPS+mimic-NC组、LPS+ 106b-mimic组则分别使用转染试剂mimic-NC、106b-mimic转染24 h再进行LPS处理6 h，NC2组不进行处理。检测iNOS、Arg-1、CD86、CD206水平及IL-6、TNF-α、CXCL-10的mRNA表达水平。 结果:与0 μmol/L组比较，100 μmol/L组、200 μmol/L组、300 μmol/L组凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3水平升高（ P<0.05），Bcl-2水平下降（ P<0.05），细胞活力下降（ P<0.05），细胞凋亡率上升（ P<0.05）。经比较，200 μmol/L作为适宜浓度用于后续实验。通过显微镜观察，正常心肌细胞表现为梭形，而200 μmol/L H 2O 2处理后心肌细胞皱缩变形死亡。透射电镜观察可见提取的纳米颗粒呈现圆形并具有双层膜结构，将荧光标记的外泌体加入巨噬细胞中共同培养24 h，可见大量外泌体能够被巨噬细胞摄取。与NC1组比较，LPS1组、LPS+NC-exo组、LPS+ H-exo组iNOS、CD86蛋白水平升高（ P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（ P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（ P< 0.05）；与LPS1组比较，LPS+H-exo组iNOS、CD86蛋白水平升高（ P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（ P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（ P<0.05），而LPS+NC-exo组与LPS1组差异无统计学意义（ P>0.05）。与NC-exo比较，H-exo中miR-106b-5p表达升高（ P<0.05）。与NC2组比较，LPS2组、LPS+mimic-NC组、LPS+106b-mimic组iNOS、CD86蛋白水平升高（ P< 0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（ P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（ P<0.05）；与LPS2组比较，LPS+106b-mimic组iNOS、CD86蛋白水平升高（ P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（ P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（ P< 0.05），而LPS+mimic-NC组与LPS2组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:来源于氧化应激心肌细胞的高表达miR-106b-5p的外泌体促进巨噬细胞发生M1型极化。

目的:观察超低温环境下长期保存后人角膜基质透镜的透明度及结构变化，探讨简单可行且有效的角膜基质透镜长期保存方案。方法:收集2013—2020年于中山大学中山眼科中心海南眼科医院行飞秒激光小切口角膜透镜取出术(SMILE)200眼，手术中获取完整人角膜基质透镜标本200份。将人角膜基质透镜标本置于-80 ℃超低温冰箱中保存，按照保存时间的不同将标本分为1个月组、24个月组、60个月组和84个月组，每组50份。采用超微量分光光度计测量各组在300~800 nm波长范围内角膜基质透镜的透光率，每个透镜共连续检测10次，每次间隔50 nm；分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察各组角膜基质透镜的组织学形态变化和胶原纤维结构改变；采用透射电子显微镜观察各组角膜基质透镜中胶原纤维排列方式及角膜基质细胞的超微结构变化；采用TUNEL染色法检测各组人角膜基质透镜中角膜基质细胞凋亡情况。结果:各组450~800 nm波长范围内角膜基质透镜透光率比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。Masson染色结果显示，1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列整齐、紧密，24个月组部分胶原纤维间出现空泡，60个月组胶原纤维排列疏松，空泡增多，84个月组部分胶原纤维脱落，角膜基质透镜变薄；苏木精-伊红染色显示角膜基质透镜形态改变与胶原纤维变化相对应。透射电子显微镜下可见1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列规则，角膜基质细胞呈长梭形，核膜完整，胞质丰富；24个月组胶原纤维排列稍疏松，角膜基质细胞变形，核膜不完整；60个月组胶原纤维排列疏松、不整齐，细胞核萎缩变形；84个月组胶原纤维排列紊乱，角膜基质细胞皱缩，核膜不连续，核质裂解。TUNEL染色结果显示，1个月组、24个月组、60个月组和84个月组透镜中基质细胞凋亡率分别为(87.80±1.17)%、(89.50±1.05)%、(89.30±1.51)%和(90.20±1.47)%，总体比较差异无统计学意义( F＝4.525， P＝0.053)。 结论:人角膜基质透镜超低温环境下保存84个月可见胶原纤维排列紊乱及角膜基质细胞凋亡，但其透明度和完整性仍较好。超低温保存技术长期保存角膜基质透镜有效且简单可行。

目的:探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法（PDT）联合小檗碱对牙龈卟啉单胞菌（P.g）的体外抑制作用。方法:培养P.g至对数期中后期，将不同质量浓度亚甲基蓝加入P.g菌悬液中，作用5 min，激光（波长660 nm，功率140 mW/cm 2）照射2 min，寻找亚甲基蓝结合激光体外抑制P.g的最佳浓度；观察亚甲基蓝介导的PDT体外抑制P.g的效果以及小檗碱对P.g生长曲线的影响；探讨亚甲基蓝介导的PDT与小檗碱先后联合应用对P.g的抑制作用；扫描电子显微镜观察亚甲基蓝介导的PDT及小檗碱对P.g形态的影响；紫外分光光度仪测量各成分吸收峰。 结果:在660 nm激光激发下，亚甲基蓝质量浓度为24.414 1 μg/ml时，抑菌效果最好。与对照组比较，亚甲基蓝组和PDT组差异均有统计学意义（均 P<0.001）。0.05 mg/ml小檗碱对P.g浮游细菌具有抑制作用。与对照组比较，0.05 mg/ml小檗碱组菌落数降低，其差异有统计学意义（ P<0.01）；0.05 mg/ml小檗碱+光照组与对照组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。当PDT与小檗碱联用时对P.g有协同抑制作用，且先PDT后小檗碱组较先小檗碱后PDT组菌落数降低，其差异均有统计学意义（均 P<0.01）。P.g经亚甲基蓝介导的PDT处理后，细菌细胞壁皱缩成团，经小檗碱处理后，细菌表面变得光滑且菌体长度较对照组增长。 结论:亚甲基蓝介导的PDT对P.g有抑制作用，当与小檗碱联用时，对P.g有协同抑制作用，且联合应用中先PDT后小檗碱作用时抑菌效果更好。

探讨超脉冲点阵激光联合手术在眼周年轻化的应用。2020年12月至2021年4月，山东省妇幼保健院医疗美容与整形外科选择眼周眼睑皮肤松弛、眼袋形成、眼周不同程度皮肤皱纹、色素加深、皮肤质地改变等症状患者15例，男1例、女14例，年龄35~45岁，平均42岁。用上睑皮肤松弛矫正术或眼袋切除术去除松弛皮肤及皮下软组织以改善眼周老化形态，用超脉冲点阵激光改善眼周老化皮肤。15例患者术后即刻皮肤较术前明显紧致，眼袋消失；超脉冲点阵激光治疗时皮肤即刻收缩，治疗后治疗区域早期有红肿，轻微渗液等表现。术后7 d痂皮逐渐脱落，术后1个月皱纹、皮肤质地等改善效果逐渐显现。6个月随访，15例患者眼周皮肤均有明显改善，14例患者表示满意。手术联合激光改善眼周年轻化效果明确，值得临床应用。

目的 探讨激光皱缩囊胚的不同模式(单孔射击和活检模式)对冻融单囊胚移植结局的影响.方法 选取2018年9月至2022年8月在邯郸市妇幼保健院生殖科行冻融单囊胚移植的273例助孕患者作为研究对象.根据囊胚玻璃化冷冻前激光人工皱缩模式不同分为单孔组(n=100)和活检组(n=173),比较两组患者冷冻前囊胚的皱缩情况、冻融囊胚复苏率,以及冻融单囊胚移植后的临床妊娠率、多胎率和流产率.结果 两组激光皱缩后完全皱缩率、部分皱缩率、未皱缩率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).两组的囊胚复苏率、临床妊娠率、流产率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);活检组比单孔组多胎率稍高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 为了减少激光皱缩囊胚时激光束对滋养层细胞可能造成的热损伤,冻融囊胚移植后的多胎妊娠可以选用单孔发射模式进行囊胚皱缩.

目的:探讨强脉冲光联合超脉冲点阵CO2激光治疗面部痤疮瘢痕的效果及对皮肤生理指标的影响.方法:回顾性分析64例面部痤疮瘢痕患者的资料,依照接受治疗方案不同分为两组,即采用超脉冲点阵CO2激光治疗的患者为对照组,选择超脉冲点阵CO2激光联合强脉冲光治疗纳入观察组,并通过二元Logistic回归分析构建倾向性得分模型(卡钳值为0.5),经倾向性匹配评分评估共得出32组基线差异无统计学意义的病例资料.评定两组治疗5次后的临床疗效,对比两组治疗前后的瘢痕面积程度、痤疮瘢痕严重程度[临床痤疮瘢痕评估量表(ECCA)权重评分]、皮肤生理指标[VISIA皮肤分析仪中紫外线、红色区、紫质、皱纹、斑点、纹理、毛孔及棕色斑共8项评分],记录两组治疗期间出现的不良反应.结果:观察组的临床总有效率显著高于对照组(93.75%VS 71.88%,P＜0.05);治疗5次后,两组瘢痕面积较治疗前均显著缩小(P＜0.05),两组ECCA权重评分、VISIA皮肤分析仪8项指标(紫外线、红色区、紫质、皱纹、斑点、纹理、毛孔及棕色斑)评分较治疗前降低(P＜0.05),且观察组除VISIA评分中斑点、棕色斑2项评分之外其余上述指标均低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组不良反应总发生率低于对照组(9.38%VS 31.25%,P＜0.05).结论:强脉冲光联合超脉冲点阵CO2激光治疗面部痤疮瘢痕的疗效显著,能明显缩小痤疮瘢痕面积,减轻痤疮瘢痕严重程度,并有效改善皮肤生理状况,减少治疗不良反应,临床应用安全、有效.

目的 探讨囊胚激光人工皱缩预处理方法(LAS)在人囊胚玻璃化冻融中的应用效果.方法 选取2014年1月1日至2015年12月31日期间的患者行解冻囊胚周期3859例.根据是否进行激光人工皱缩将其分为激光皱缩组(3176例)和未皱缩组(683例),进一步根据不同年龄分为＜36岁组和≥36岁组,主要比较指标:复苏率、临床妊娠率、种植率.结果 激光皱缩组的复苏率、临床妊娠率、种植率分别为97.32%(5453/5603)、66.81%(2118/3170)、53.55%(2912/5438);未皱缩组的复苏率、临床妊娠率、种植率分别为95.13%(1173/1233)、62.70%(427/681)、49.74%(582/1170);二组相比均有统计学差异(P＜0.05).进一步的亚组分析显示,＜36岁激光皱缩组的复苏率高于未皱缩组[97.27%(4887/5024)vs.95.33%(1040/1091)](P＜0.05).≥36岁激光皱缩组的复苏率、生化妊娠率高于对照组[97.75%(566/579)vs.93.66%(133/142)]、[65.45%(216/330)vs.50.65%(39/77)](P＜0.05).激光皱缩组和对照组的取消移植率分别为0.19% 和0.29%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 冷冻前采用激光人工皱缩技术可提高囊胚解冻后的复苏率、临床妊娠率、种植率.