目的 探讨灵芝多糖肽(GLPP)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、迁移和凋亡的影响,及相关作用机制.方法 将OCI-LY19细胞分为对照组、GLPP组、si-NC组、si-蛋白质精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组.si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组分别转染 si-NC、si-PRMT6、pcDNA3.1-NC 和 pcDNA3.1-PRMT6.待转染完成后,对照组、si-NC组和 si-PRMT6 组均用 RPMI-1640 培养基培养,GLPP 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组均用含 20 μg·mL-1 GLPP的RPMI-1640培养基培养.培养24 h后,检测各组细胞的增殖抑制率、迁移数和凋亡率,用蛋白质印迹法检测细胞中PRMT6蛋白的表达水平.结果 si-NC组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组的细胞增殖抑制率分别为(1.28±0.16)％、(38.61±3.29)％、(52.84±7.74)％和(22.75±3.87)％;对照组、GLPP 组、si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC组和GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组的细胞迁移数目分别为(252.65±24.65)、(136.54±16.46)、(231.65±21.24)、(142.76±15.34)、(140.23±9.84)和(192.38±23.38)个,凋亡率分别为(4.36±0.52)％、(28.24±2.36)％、(4.23±0.45)％、(24.54±2.27)％、(28.42±3.85)％和(14.25±2.13)％,PRMT6 蛋白相对表达水平分别为 1.82±0.21、0.56±0.05、1.78±0.19、0.54±0.05、0.29±0.02 和 0.32±0.03.对照组的上述指标与GLPP组比较,si-NC组的上述指标与si-PRMT6组比较,GLPP+pcDNA3.1-NC组的上述指标与GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 GLPP可通过下调PRMT6表达,抑制DLBCL细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡.

目的 探讨灵芝多糖肽(GLPP)对糖尿病肾病小鼠肾功能及氧化损伤的影响及其作用机制.方法 将C57小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(10.0 mg·kg-1氯沙坦)、低剂量实验组(50 mg·kg-1 GLPP)、中剂量实验组(100 mg·kg-1 GLPP)、高剂量实验组(200 mg·kg-1 GLPP)、GLPP+Losartan 组(200 mg·kg-1 GLPP+10.0 mg·kg-1氯沙坦),每组10只小鼠,各组小鼠连续灌胃8周.检测各组小鼠血糖,用生化分析仪检测血清肾功能及脂代谢相关指标,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎性因子表达,用蛋白质印迹法检测蛋白相对表达水平,用试剂盒法检测氧化损伤相关指标,用Tunel法检测细胞凋亡.结果 正常组、模型组、阳性对照组、高剂量实验组、GLPP+Losartan组小鼠空腹血糖分别为(4.69±0.16)、(20.31±2.04)、(10.22±0.98)、(10.26±0.96)和(7.76±0.43)mmol·L-1,血清肌酸酐(Scr)水平分别为(25.48±2.33)、(68.34±4.78)、(32.93±3.25)、(36.37±2.36)和(28.30±1.19)μmol·L-1,丙二醛(MDA)含量分别为(2.05±0.22)、(6.71±0.57)、(2.69±0.27)、(3.21±0.32)和(2.19±0.11)nmol·L-1,Tunel阳性细胞率分别为(3.39±0.27)％、(26.75±1.24)％、(6.81±0.71)％、(8.05±0.80)％和(5.33±0.33)％,核因子 κB(NF-κB p65)蛋白相对表达水平分别为 0.31±0.05、1.07±0.08、0.40±0.03、0.47±0.04 和 0.35±0.03.模型组上述指标与正常组比较,高剂量实验组上述指标与模型组比较,GLPP+Losartan组上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 灵芝多糖肽可能调节Toll样受体4/NF-KB通路抑制细胞凋亡和炎性反应,改善糖尿病肾病小鼠氧化损伤.

灵芝Ganoderma具有扶正固本、补气安神、延年益寿等功效.现代临床中常采用灵芝与多味中药配伍用于抗肿瘤.近年来研究发现,灵芝的抗肿瘤机制主要涉及调节机体免疫、阻滞细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡和自噬、抑制肿瘤细胞转移以及抗氧化等.通过对灵芝抗肿瘤作用的分子机制和与灵芝配伍的抗肿瘤作用机制进行综述,为灵芝抗肿瘤的临床应用提供参考.

本研究目的是探讨仿野生栽培灵芝的多糖肽和灵芝酸含量变化,为规范灵芝栽培及产品质量提供依据.本研究采用RP-HPLC测定灵芝酸含量和HPLC-ELSD法测定灵芝多糖肽含量.结果显示:(1)低分子物质(以灵芝酸A+B+C2计):菌蕾0.52％,菌盖0.25％,菌柄0.13％,菌盖比菌柄高48％;(2)多糖肽提取得率比较:菌蕾提取得率为2.12％,菌柄0.70％,菌盖1.23％;(3)含量(以GLPPSQ计)比较:菌蕾1.30％,菌盖0.3％,菌柄0.2％;(4)以上醇溶性灵芝酸和水溶性多肽结果:菌蕾＞菌盖＞菌柄.上述结果说明仿野生栽培灵芝不同发育期的有效成分提取率和含量都存在明显差异,这对灵芝的合理应用提供一定的科学依据.

目的:为灵芝多糖功能特性的进一步研究提供参考.方法:以"灵芝""多糖""药理作用""Ganoderma lucidum""Polysac-charide""Pharmacological action"等为关键词,组合查询2013年1月-2017年12月发表的收录于PubMed、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献,就灵芝多糖药理作用及其机制的研究进展进行综述.结果与结论:共检索到相关文献956篇,其中有效文献57篇.灵芝多糖具有抗肿瘤、调节免疫、抗糖尿病、保护肝脏、保护心肌细胞、抗癫痫、抗辐射等多种药理作用,其可能机制包括调节早期生长反应因子1、转化生长因子β1、血管内皮生长因子、白细胞介素10、水通道蛋白1、Bcl-2、Bax、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等因子或其编码基因的表达;降低机体氧化应激水平,增加胰岛素敏感性;抗自由基脂质过氧化,提高肝脏抗氧化能力;缩小心肌梗死面积,降低血清肌酸激酶水平和肌钙蛋白含量;上调谷氨酸转运体的表达,降低神经细胞兴奋性;调控相关蛋白激酶信号转导通路等.现有研究多集中在功能性验证阶段,基础研究较多,而临床应用研究相对较少,其具体机制仍有待进一步深入探讨.

目的 从灵芝Ganoderma水提物中分离纯化活性多糖肽,对其进行结构研究,并作为对照品用于灵芝产品中多糖肽含量测定.方法 采用热水提取、膜超滤技术和凝胶过滤色谱等方法进行分离纯化,根据理化测定及波谱数据分析鉴定化合物结构.检测多糖肽含量采用高效液相色谱仪附紫外检测器,以水作为流动相,体积流量为1 mL/min.结果 灵芝多糖肽相对分子质量为5.0×104,质量分数97％以上,得率为0.49％,多糖含量达87.17％,单糖组成以葡萄糖为主和少量甘露糖组成的多糖,其物质的量比为31.85∶1.00,含有16种氨基酸,氨基酸总量为5.04％.依据甲基化、一维和二维核磁谱图,GL-PPSQ2结构重复单元为主链由→3)-β-D-Glcp-(1→构成,每4个→3)-β-D-G1cp-(1→在O-6位连接一个长支链,该支链由α-D-Glcp-(1→、→4,6)-β-D-Glcp-(1→、→4)-β-D-Glcp-(1→和→6)-β-D-Glcp-(1→依次相连构成.结论 通过膜技术和凝胶色谱分离纯化得到活性多糖肽,该方法简便、快速,为灵芝提取物及其产品中多糖肽质量控制提供了科学依据.

目的 研究镉(Cd)胁迫对灵芝菌丝生长及代谢产物积累的影响,探讨Cd胁迫影响生长和代谢产物积累的机制,为灵芝生产栽培过程中控制Cd元素提供依据.方法 在Cd质量浓度分别为0、0.5、1.0、4.0、10.0、40.0 mg/L下培养灵芝菌丝体,对其生物量积累、胞内活性氧(ROS)水平、膜氧化损伤、抗氧化酶活性及ROS调控相关酶表达量进行分析.结果 Cd质量浓度达到4.0 mg/L时,抑制菌丝生长;胞内ROS水平、H2O2及丙二醛(MDA)含量显著上升,分别提升了76％、46％、325％,且随着Cd质量浓度的增加呈上升趋势;NADPH氧化酶基因(NOXA)、超氧化物歧化酶基因(SOD1,SOD4)、过氧化氢酶基因(CAT)表达量显著上调.Cd质量浓度达到10.0 mg/L时抑制效果显著,菌落生长直径及发酵菌丝干质量抑制率分别为26.15％、32.78％,灵芝总三萜抑制率为33.7％,对总蛋白合成的抑制率为30.3％,对多糖抑制不显著.CA质量浓度达到40.0 mg/L时,抗坏血酸过氧化物酶基因(APX)及谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPX)表达量显著上调.随着Cd质量浓度的增加,SOD、CAT、APX、GPX酶活性都呈先上升后下降趋势,Cd质量浓度达到1.0 mg/L时,GPX酶活性下降,APX酶活性上升显著.外源添加diphenyleneiodonium chloride (DPI)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、维生素C(VC)对Cd胁迫灵芝胞内清除ROS水平及降低MDA含量作用显著.结论 Cd胁迫造成灵芝菌丝产量及代谢物积累下降,可能是由于Cd离子抑制GPX酶活性下降,造成H2O2积累,引起ROS水平上升及膜氧化损伤,抑制菌丝生长及代谢产物积累,同时调控NOXA基因表达量上调,造成抗氧化酶活性及表达量上升来提高机体对活性氧的清除.因此在灵芝的生产过程中要控制Cd元素质量浓度小于1 mg/L.

前期研究发现在Fe2+和Cu2+胁迫下,OPT基因转录表达水平会有较大的变化.为进一步探究这两种金属对OPT基因的影响,分析了不同浓度Fe2+和Cu2+胁迫下灵芝寡肽转运蛋白基因家族的转录表达水平.以灵芝荣保1号为实验材料,设置不同浓度梯度(0、50、100、200和400 mg/L)Fe2+和Cu2+进行液体静置培养,分别于15 d和30 d收集样品,测定生物量和多糖含量,利用实时荧光定量PCR技术分析OPT基因的转录表达水平.结果表明,Fe2+对灵芝的生长有一定的促进作用,Cu2+则对其有抑制作用.两种金属在实验用的浓度范围内对于灵芝多糖含量在培养前期表现出抑制作用,后期则有一定的促进作用.除未检测到转录本的3个OPT基因(OPT7、OPT8和OPT9),其余OPT基因的转录表达均有差异性.培养前期(15 d),Cu2+胁迫下OPTs基因表达水平较低且差异不明显,Fe2+胁迫下OPTs基因表达水平差异较大;培养后期(30 d),Cu2+胁迫下OPTs基因表达水平较15 d的样品明显增加,且存在差异,Fe2+胁迫下绝大多数OPTs基因均在浓度为200 mg/L下转录表达水平最高.实验证明,不同浓度Fe2+和Cu2+对灵芝的生物量与多糖含量存在不同程度的影响,同时OPT基因在转录水平上也做出了不同的响应,表明其在灵芝适应与吸附外界金属离子的过程起到了重要的作用.

目的:研究灵芝多糖粗提物对雌二醇诱导小鼠胸腺萎缩的改善作用.方法:将60只雌性ICR小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和灵芝多糖粗提物高、低剂量组(400、100 mg/kg,以生药量计),每组15只.除正常对照组外,其余各组小鼠均隔天腹腔注射雌二醇(0.1 mg/只,共6次)建立胸腺萎缩模型.造模结束后次日,小鼠灌胃给药,每天1次,连续给药14d.末次给药24 h后,测定小鼠脏器(胸腺、脾)指数以及血浆中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性,采用苏木精-伊红染色法观察小鼠胸腺、脾组织的病理学变化,采用原位末端标记法检测小鼠胸腺细胞凋亡情况,并采用流式细胞术检测其外周血中T细胞亚群分类.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠胸腺指数和外周血中CD3+CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+T比值均显著降低(P＜0.01),脾指数、血浆中MDA含量、胸腺细胞凋亡水平以及外周血中CD3+CD8+T细胞比例均显著升高(P＜0.05或P＜0.01);小鼠胸腺皮质和髓质分界模糊、细胞间隙增大、皮质出现部分细胞损伤凋亡,脾组织未见明显病理学变化.与模型组比较,灵芝多糖粗提物高剂量组小鼠胸腺指数、血浆中GST活性以及外周血中CD3+CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+比值均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),血浆中MDA含量、胸腺细胞凋亡水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01),且胸腺组织病理学变化明显改善;灵芝多糖粗提物低剂量组小鼠仅血浆中MDA含量显著降低(P＜0.01),其余指标/病理学变化均不明显.结论:高剂量(400mg/kg)灵芝多糖粗提物对雌二醇诱导的小鼠胸腺萎缩具有一定的改善作用.

目的 研究灵芝多糖(GLPS)对四氯化碳(CCl4)溶液诱导的肝纤维化小鼠肝功能、纤维蛋白原Ⅰ型和抗氧化效应的保护作用.方法 清洁级雄性ICR小鼠随机分为阴性对照组,模型组和低、中、高剂量组.各剂量组小鼠每天按0.1 mL/10 g体重分别给予50、100、200 mg/kg GLPS灌胃,阴性对照组和模型组给予相同体积的去离子水灌胃.给药第5周,模型组及各剂量组小鼠腹腔注射橄榄油稀释的CCl4溶液(体积分数10％)5 mL/kg,建立肝纤维化模型.造模后2周、4周时分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)等肝功能指标,纤维蛋白原Ⅰ型以及肝超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)等抗氧化指标.结果 第1批小鼠(造模2周)中,模型组肝SOD和GSH水平与阴性对照组相比均降低,MDA水平、肝纤维蛋白原Ⅰ型和ALT水平与阴性对照组相比均升高(均P＜ 0.05);中剂量组肝SOD水平、高剂量组肝SOD和GSH水平与模型组相比均升高,MDA水平与模型组相比降低(均P＜ 0.05).第2批小鼠(造模4周)中,模型组肝GSH水平与阴性对照组相比降低,MDA水平、肝纤维蛋白原Ⅰ型、ALT和AST水平与阴性对照组相比均升高(均P＜0.05);中剂量组肝纤维蛋白原Ⅰ型、低剂量组ALT水平与模型组相比均降低,高剂量组AST水平与模型组相比降低(均P＜0.05).结论 GLPS在小鼠肝纤维化过程中具有改善肝功能损伤、抑制肝纤维化和抗氧化等保护作用.