目的:建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）同时测定沙那制剂中没食子酸、没食子酸甲酯、柯里拉京、番泻苷B和番泻苷A含量的方法。方法:2021年1-12月，采用Phenomenex Hydro-RP 80A色谱柱（4.60 mm × 250 mm，4 μm），流动相为甲醇（A）-0.2%甲酸（B），梯度洗脱：0~18 min，1%~3%A；18~19 min，3%~15%A；19~40 min，15%~17%A；40~45 min，17%~25%A；45~65 min，25%~35%A；65~95 min，35%~60%A；95~96 min，60%~90%A；96~97 min；90%~1%A，流速：1.0 mL/min，柱温：35 ℃，检测波长270 nm。结果:没食子酸、没食子酸甲酯、柯里拉京、番泻苷B和番泻苷A的线性范围分别为0.182~1.099 μg（ r=0.999 9），0.046~0.278 μg（ r=0.999 2），0.266~1.598 μg（ r=0.999 4），0.172~1.036 μg（ r=0.999 2），0.176~1.056 μg（ r=0.999 9）；平均加样回收率分别为100.02%、99.14%、99.38%、101.77%、100.92%。 结论:该方法准确、灵敏、可靠、重复性好，可用于沙那制剂的质量控制研究。

目的:建立测定解毒止血汤水提液中黄芩苷、汉黄芩苷、丹皮酚含量的方法，并测定其理化参数。方法:采用HPLC法检测解毒止血汤水提液中黄芩苷、汉黄芩苷、丹皮酚含量。色谱柱为Waters Symmetry Shield TMRP18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1 ml/min，检测波长274 nm，柱温30 ℃。测定解毒止血汤水提液的pH值及相对密度。结果:黄芩苷在0.191 2～1.147 2 μg范围内线性良好，汉黄芩苷在0.041 5～0.207 4 μg范围内线性良好，丹皮酚在0.019 5～0.156 3 μg范围内线性良好。该方法重现性、稳定性、回收率均良好。3批解毒止血汤水提液中黄芩苷、汉黄芩苷、丹皮酚含量无显著差异，其pH值范围为5.240～5.753，相对密度范围为0.846～0.889。结论:本文所建立方法可测定解毒止血汤水提液中多个有效成分，方法稳定、可行，适用于解毒止血汤水提液的质量控制。

目的:探讨致命鹅膏致版纳微型猪肝衰竭的特点。方法:于2020年9至10月，采用反向高效液相色谱法（RP-HPLC）测定致命鹅膏水溶液毒素含量，以2.0 mg/kg致命鹅膏水溶液（α-鹅膏毒肽+β-鹅膏毒肽）经口灌胃版纳微型猪，染毒后观察各时间点的中毒症状、血液生化指标，以及肝脏、心脏和肾脏组织病理学改变。结果:版纳微型猪于染毒76 h内全部死亡，且在6~36 h出现不同程度的消化道症状，如恶心、呕吐和腹泻等表现；生化指标中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、乳酸脱氢酶、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、血尿素氮、肌酐于染毒后52 h明显升高，与0 h比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；肝脏及心脏肉眼及镜下观察出血明显，肝细胞出现坏死，肾小管上皮细胞肿胀。 结论:大剂量致命鹅膏可致版纳微型猪急性肝衰竭，符合急性肝衰竭的病理生理特点，为进一步研究致命鹅膏致肝衰竭的中毒机制及解毒药物奠定基础。

目的:建立伤科活血水煎液中阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A和芍药苷4个药效成分薄层色谱法（TLC）鉴别和含量测定的方法，用于其质量评价。方法:采用TLC定性鉴别伤科活血水煎液中的阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A和芍药苷，采用HPLC法测定其含量。色谱柱为Waters Symmetry ShieldTM RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.15%磷酸水溶液，梯度洗脱；流速1.0 ml/min；柱温30 ℃；检测波长320 nm（33~50 min检测阿魏酸，55~70 min检测藁本内酯）、403 nm（7~31 min检测羟基红花黄色素A）、230 nm（7~31 min检测芍药苷）。结果:TLC各斑点清晰；阿魏酸在3.05~48.74 μg、藁本内酯在3.50~26.24 μg、羟基红花黄色素A在21.34~213.44 μg、芍药苷在24.22~193.76 μg范围内线性关系良好，方法稳定性、重复性及回收率良好。结论:建立了同时测定伤科活血水煎液中4个药效成分的TLC法和HPLC法，适用于伤科活血水煎液的质量评价。

目的 分析CD36 蛋白的结构,寻找可能的B细胞抗原表位,制备含有B细胞表位的多抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),为基于B细胞表位的MAP用于CD36 抗体的制备提供前期实验基础.方法 通过生物信息学方法分析CD36 蛋白的理化性质、二级结构、潜在磷酸化及糖基化位点等,预测可能的B细胞表位.以多聚赖氨酸为核心基质,采用Fmoc方法合成含有CD36 B细胞表位的八分枝MAP,并利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)分析MAP的纯度、质谱分析法测定MAP的分子量,对合成的CD36-MAP进行鉴定.结果 CD36 是 1 种稳定的、亲水性的碱性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,具有多个磷酸化、糖基化位点,抗原性较强.综合分析获得可能的优势B细胞表位 4 个,制备了 4 个含有优势B细胞表位的MAP,RP-HPLC分析表明合成的MAP 的纯度均在 85%以上,其中 3 个MAP的分子量与理论预期值相符.结论 CD36 具有较强的抗原性,利用预测得到的 4 个可能的B细胞表位合成MAP,为CD36 抗体的制备和相关研究提供实验基础.

目的 建立反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法测定人干扰素α2b(human interferon alpha 2b,hIFNα2b)原液中三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)的残留量,并进行验证及初步应用.方法 液相色谱条件为:ZORBAX 300SB-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm);流动相0.08％磷酸(pH 3.0)+5.0％甲醇溶液;检测时间6 min;流速0.8mL/min;柱温35 ℃;紫外检测器波长210 nm;上样量20μL;等度洗脱.对方法进行系统适应性、线性、专属性、准确性、精密性、定量限与检测限及耐用性验证.同时采用建立的方法和复合型色谱柱Comixsil ACRP(100 mm × 4.6 mm,5 μm)测定3批hIFNα2b原液样品的TFA残留量.结果 TFA在10～300 μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.998 4);平均加标回收率为101.8％,RSD为2.68％;重复性和中间精密度验证的RSD分别为0.46％和0.45％;定量限为10μg/mL,检测限为2 μg/mL;有机溶剂、缓冲盐pH与柱温箱温度在规定条件下轻微上下浮动对检测结果无明显影响,检测波长变化时峰面积会受到影响.采用2种方法检测3批hIFNα2b原液中TFA残留量,结果均未检出.结论 建立的RP-HPLC法具有较好的系统适应性、专属性、准确性、精密性及耐用性,可用于hIFNα2b原液中TFA残留量的测定.

目的 建立针对聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人源化抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)抗体(PEG-抗TNFα单抗)的关键质量属性质控方法.方法 采用肽图谱鉴别PEG-抗TNFα单抗,分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测分子大小异质性,阳离子交换高效液相色谱(cation exchange-high performance liquid chromatography,CEX-HPLC)法检测电荷异质性,反相超高效液相色谱(reversed-phase-ultra performance liquid chromatography,RP-UPLC)法检测 PEG残留量及错配异构体含量;利用稳定转染TNFα相关受体下游反应元件驱动的报告基因的HEK293细胞测定生物学活性.结果 PEG-抗TNFα单抗具有相应的特征图谱,可用于鉴别;SEC-HPLC单体峰相对百分含量为(99.66±0.01)％,高分子量物质峰相对百分含量为(0.31±0.01)％,低分子量物质均低于定量限;CEX-HPLC主峰区峰相对百分含量为(98.31±0.10)％,酸性峰区峰相对百分含量为(1.31±0.04)％,碱性峰区峰相对百分含量为(0.38±0.07)％;PEG含量低于定量限,错配异构体含量为(0.76±0.007)％;生物学活性的半数最大效应浓度(concentration for 50％of maximal effect,EC50)值为(2.22±0.11)ng/mL.结论 针对PEG-抗TNFα单抗的关键质量属性建立了相应的质量控制方法,可确保其安全、有效及质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供了参考.

目的 在GluA2-3Y结构基础上通过环化和N-甲基化策略设计甲基化环肽,提高化合物与靶标的亲和力、神经保护活性及稳定性.方法 基于Fmoc固相合成法合成目标多肽,经RP-HPLC对多肽进行分析和纯化.采用表面等离子共振技术测试多肽与BRAG2蛋白的亲和力.通过CCK8法检测多肽对HT22细胞的毒性.构建氧糖剥夺(OGD)模型评价多肽的体外神经保护活性.通过HPLC检测多肽的血浆稳定性.结果 基于Fmoc固相合成法共设计合成14条多肽,经RP-HPLC分析纯度均在90％以上.表面等离子共振结果显示:环肽c10c-Y-5表现出与对照药Ac-3Y相近的亲和力,解离常数KD为0.68 μmol·L-1,与BRAG2蛋白有较强的亲和力.CCK8法测试多肽的毒性结果显示:10 μmol·L-1多肽在HT22细胞上基本没有毒性.环肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性结果显示:与模型组相比,环肽c10c-Y-2 在 1 μmol·L-1 和 10 μmol·L-1 下有神经保护活性(P＜0.05);环肽 c10c-Y-5 在 3个浓度下有神经保护活性(P＜0.05);环肽c10c-Y5G6在10 μmol·L-1下有神经保护活性(P＜0.01).环肽的血浆稳定性实验结果显示:c10c-Y-2和c10c-Y-5经环化和N-甲基化修饰后,与线性肽相比稳定性有大幅度提高.结论 本研究应用SPR技术和多肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性评价手段,筛选出了具有潜在神经保护活性且增强了血浆稳定性的环肽c10c-Y-2和c10c-Y-5,可为多肽药物的修饰改造提供思路和依据.

目的 研究毛相思子Abrusmollis去除荚果后的干燥全草(毛鸡骨草)的化学成分及其体外抗炎活性.方法 综合运用硅胶、ODS反相柱色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据高分辨质谱,核磁共振波谱数据以及与文献对比进行结构鉴定,通过电子圆二色谱(electronic circular dichroism,ECD)数据分析确定化合物1和2的绝对构型.采用Griess法测定化合物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制活性.结果 从毛鸡骨草甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为(αR)-α,4,2',4'-四羟基-3-甲氧基二氢查耳酮(1)、(αR)-α,4,2',4'-tetrahydroxydihydrochalcone(2)、(+)-甘草素(3)、mucunoneC(4)、(+)-medicarpin(5)、abrusprecatin A(6)、7,4'-dihydroxy-8-methoxyisoflavone(7)、7,3'-dihydroxy-6,4'-dimethoxyisoflavone(8)、7,3'-dihydroxy-8,4'-dimethoxyisoflavone(9)、alopecuroides A(10)、hypaphorine(11)、7,8-二甲苯基蝶碇-2,4-(1 H,3H)-二酮(12).化合物 3、4、7 和 10 对 LPS 诱导的RAW264.7 细胞 NO 生成有抑制作用,半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值为 7.39～20.09 μmol/L,其中化合物7对NO生成的抑制活性相对较好,IC50值为7.39μmol/L.结论 化合物1为1个新的二氢查耳酮,命名为毛鸡骨草素;化合物2和10为首次从相思子属植物中分离得到.化合物3、4、7和10具有潜在的抗炎活性.

目的 建立反向高效液相色谱法同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量并探讨其微生物限度检查方法.方法 色谱柱为Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.07%三乙胺(A,冰醋酸调节pH至5.07)-甲醇(B),梯度洗脱:0～6 min,A80%;6～8 min,A80%～22%;8～21 min,A保持22%;21～22 min,A22%～80%,流速1.0 mL/min,检测波长:240 nm,柱温:30℃.采用培养基稀释法作为需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法并按《中国药典》2020年版四部通则微生物限度检查法对控制菌检查法进行验证.结果 磺胺嘧啶银在0.029 64～0.069 15 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),酮康唑在0.030 54～0.071 26 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),磺胺嘧啶银和酮康唑的平均回收率分别为101.5%(n=6,RSD=0.33%)和98.8%(n=6,RSD=0.65%).采用培养基稀释法,各试验菌的回收率均在0.5～2.0.结论 所建立的高效液相色谱法定量准确、专属性良好,可用于同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量.采用培养基稀释法对复方银唑散进行微生物限度检查可行.