目的:评价不同剂量灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide, GLP）预处理对CPB大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:清洁级雄性SD大鼠100只，体重350~450 g，采用随机数字表法分为5组（每组20例）：假手术组（S组）、CPB组（C组）、GLP低剂量组（G1组）、GLP中剂量组（G2组）、GLP高剂量组（G3组）。各组大鼠均麻醉状态下用透光法行气管插管机械通气，右颈内静脉、左侧股动脉和右侧股动静脉穿刺置管，C组和G1组、G2组、G3组建立无血预充CPB伴心脏不停搏模型，行CPB 1 h，S组不建立模型只观察1 h。G1组、G2组、G3组分别于术前连续7 d给予12.5、25.0、50.0 μg/g GLP溶液灌胃，S组和C组给予等量生理盐水。于CPB结束即刻、CPB结束后5 h取血清，并于CPB结束后5 h麻醉下处死大鼠取海马组织，用ELISA法检测血清S100钙结合蛋白β（S100 calcium binding protein β, S100β）和脑损伤标志物神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase, NSE）浓度，Western blot法检测海马组织B淋巴细胞瘤/白血病-2（B-cell lymphoma/leukemia 2, Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 related X protein, Bax）的表达，计算Bcl-2/Bax，TUNEL法计算海马组织神经元凋亡指数。结果:与S组比较，C组、G1组、G2组、G3组血清S100β、NSE浓度在CPB结束即刻、CPB结束后5 h均明显升高（ P<0.05），Bcl-2表达下调（ P<0.05），Bax表达上调（ P<0.05），Bcl-2/Bax降低（ P<0.05），海马神经元凋亡指数升高（ P<0.05）。与C组比较，G1组、G2组和G3组血清S100β、NSE浓度在CPB结束即刻、CPB结束后5 h均明显降低（ P<0.05），Bcl-2表达上调（ P<0.05），Bax表达下调（ P<0.05），Bcl-2/Bax升高（ P<0.05），海马神经元凋亡指数降低（ P<0.05）。与G1组比较，G2组、G3组血清S100β、NSE浓度在CPB结束即刻、CPB结束后5 h均明显降低（ P<0.05），Bcl-2表达上调（ P<0.05），Bax表达下调（ P<0.05），Bcl-2/Bax升高（ P<0.05），海马神经元凋亡指数降低（ P<0.05）。与G2组比较，G3组血清S100β、NSE浓度在CPB结束即刻、CPB结束后5 h均明显降低（ P<0.05），Bcl-2表达上调（ P<0.05），Bax表达下调（ P<0.05），Bcl-2/Bax升高（ P<0.05），海马神经元凋亡指数降低（ P<0.05）。 结论:GLP预处理呈剂量依赖性调节脑组织Bcl-2和Bax的失衡，抑制海马神经元凋亡，减轻CPB大鼠脑损伤。

目的 探讨灵芝多糖肽(GLPP)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、迁移和凋亡的影响,及相关作用机制.方法 将OCI-LY19细胞分为对照组、GLPP组、si-NC组、si-蛋白质精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组.si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组分别转染 si-NC、si-PRMT6、pcDNA3.1-NC 和 pcDNA3.1-PRMT6.待转染完成后,对照组、si-NC组和 si-PRMT6 组均用 RPMI-1640 培养基培养,GLPP 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组均用含 20 μg·mL-1 GLPP的RPMI-1640培养基培养.培养24 h后,检测各组细胞的增殖抑制率、迁移数和凋亡率,用蛋白质印迹法检测细胞中PRMT6蛋白的表达水平.结果 si-NC组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组的细胞增殖抑制率分别为(1.28±0.16)％、(38.61±3.29)％、(52.84±7.74)％和(22.75±3.87)％;对照组、GLPP 组、si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC组和GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组的细胞迁移数目分别为(252.65±24.65)、(136.54±16.46)、(231.65±21.24)、(142.76±15.34)、(140.23±9.84)和(192.38±23.38)个,凋亡率分别为(4.36±0.52)％、(28.24±2.36)％、(4.23±0.45)％、(24.54±2.27)％、(28.42±3.85)％和(14.25±2.13)％,PRMT6 蛋白相对表达水平分别为 1.82±0.21、0.56±0.05、1.78±0.19、0.54±0.05、0.29±0.02 和 0.32±0.03.对照组的上述指标与GLPP组比较,si-NC组的上述指标与si-PRMT6组比较,GLPP+pcDNA3.1-NC组的上述指标与GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 GLPP可通过下调PRMT6表达,抑制DLBCL细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡.

目的 探讨灵芝多糖肽(GLPP)对糖尿病肾病小鼠肾功能及氧化损伤的影响及其作用机制.方法 将C57小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(10.0 mg·kg-1氯沙坦)、低剂量实验组(50 mg·kg-1 GLPP)、中剂量实验组(100 mg·kg-1 GLPP)、高剂量实验组(200 mg·kg-1 GLPP)、GLPP+Losartan 组(200 mg·kg-1 GLPP+10.0 mg·kg-1氯沙坦),每组10只小鼠,各组小鼠连续灌胃8周.检测各组小鼠血糖,用生化分析仪检测血清肾功能及脂代谢相关指标,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎性因子表达,用蛋白质印迹法检测蛋白相对表达水平,用试剂盒法检测氧化损伤相关指标,用Tunel法检测细胞凋亡.结果 正常组、模型组、阳性对照组、高剂量实验组、GLPP+Losartan组小鼠空腹血糖分别为(4.69±0.16)、(20.31±2.04)、(10.22±0.98)、(10.26±0.96)和(7.76±0.43)mmol·L-1,血清肌酸酐(Scr)水平分别为(25.48±2.33)、(68.34±4.78)、(32.93±3.25)、(36.37±2.36)和(28.30±1.19)μmol·L-1,丙二醛(MDA)含量分别为(2.05±0.22)、(6.71±0.57)、(2.69±0.27)、(3.21±0.32)和(2.19±0.11)nmol·L-1,Tunel阳性细胞率分别为(3.39±0.27)％、(26.75±1.24)％、(6.81±0.71)％、(8.05±0.80)％和(5.33±0.33)％,核因子 κB(NF-κB p65)蛋白相对表达水平分别为 0.31±0.05、1.07±0.08、0.40±0.03、0.47±0.04 和 0.35±0.03.模型组上述指标与正常组比较,高剂量实验组上述指标与模型组比较,GLPP+Losartan组上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 灵芝多糖肽可能调节Toll样受体4/NF-KB通路抑制细胞凋亡和炎性反应,改善糖尿病肾病小鼠氧化损伤.

目的 优化甘草汁制灵芝炮制工艺,评价炮制前后体外抗氧化、抗炎活性变化.方法 基于响应面法,运用层次分析法(AHP)和熵权法确定最佳炮制工艺;采用ABTS+、DPPH、羟自由基清除率的方法,评价多糖组分的抗氧化活性;采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α及NO的含量,评价三萜及甾醇组分的抗炎活性.结果 最佳炮制工艺为 1∶13 的甘草汁比例、4.4%的甘草用量以及 33 min的浸泡时间,炮制后总三萜及甾醇、水溶性浸出物的含量升高(P<0.01,P<0.05);炮制后的抗氧化活性增强(P<0.01);对炎症因子的抑制作用也优于生品.结论 所得炮制工艺稳定、可行;甘草汁制可促进灵芝成分溶出,协同其抗氧化、抗炎作用,且其抗炎活性的增强可能与麦角甾醇的溶出增加有关.

目的 探讨灵芝酸A(ganoderic acid A,GAA)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung in-jury,ALI)小鼠的影响及作用机制.方法 将小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量GAA组(GAA-L组)、高剂量GAA组(GAA-H组),每组12只.气管内滴注LPS(5 mg·kg-1)构建ALI小鼠模型,GAA-L组和GAA-H组小鼠分别在ALI造模前30 min腹腔注射50或150 mg·kg-1 GAA.造模后12 h,收集肺泡灌洗液(BALF),计数BALF中总细胞和中性粒细胞含量并检测TNF-α和IL-1β含量.收集肝脏,称重法获取肺湿重/干重比值,HE染色观察肺组织形态学表现,检测肺组织中MDA、ROS、GSH和SOD水平,免疫荧光染色检测肺组织中CD31和VCAM-1表达,Western blot法检测肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达.结果 与模型组比较,低和高剂量GAA组小鼠肺组织ALI评分和肺组织的湿/干重比均降低(P＜0.05),病理损伤减轻,BALF中总细胞、中性粒细胞、IL-1β、TNF-α含量均下降(P＜0.05),肺组织中 MDA、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD 蛋白表达均下调(P＜0.05),GSH和SOD水平升高(P＜0.05),且高剂量组的效果显著优于低剂量组(P＜0.05).结论 GAA对ALI小鼠具有肺保护作用,其机制可能与其抑制NL-RP3/GSDMD信号通路,减轻炎症反应、降低氧化应激和抑制细胞焦亡有关.

灵芝是一种广受欢迎的药食两用真菌,因其极高的药用价值而被广泛地研究和栽培.灵芝多糖作为重要的生物活性成分,具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎、降血糖、保护肝脏、调节中枢神经等作用.本文通过灵芝多糖的构效关系、提取工艺和药理作用3 个方面做出了详细的归纳和阐述,以期为灵芝多糖的开发和综合应用提供理论依据.

端粒解旋酶(telomere-linked helicase,Tlh)在维持端粒长度和基因组稳定性中起关键作用.除其基础作用外,解旋酶还在涉及DNA/RNA代谢的细胞过程中担当重要的角色.本研究通过同源序列比对在灵芝中获得 Tlh 基因,分析发现 Tlh 基因编码 750 个氨基酸,其蛋白含有DEXHC-RecQ、DEAD和HELICc结构域,与担子菌中的Tlh蛋白保守性较高.进一步构建灵芝Tlh沉默菌株(Tlhi-9 和Tlhi-21),检测Tlh在灵芝中的生物学功能.结果显示,与野生型相比,Tlhi-9 和Tlhi-21 菌株菌丝生长减缓,菌落直径分别降低 23%和 24%,生物量分别降低 41%和 43%;相较野生型,Tlhi-9 和Tlhi-21 菌株中CMCase活性分别降低 39%和 43%,而木聚糖酶活性均降低 40%;Tlhi-9和Tlhi-21 菌株中胞内多糖含量较野生型分别降低 38%和 40%;Tlhi-9 和Tlhi-21 菌株中灵芝酸含量较野生型分别降低 51%和 56%.研究结果说明,Tlh基因参与调控灵芝生长、纤维素酶与木聚糖酶活性及次生代谢.

为了充分开发利用灵芝资源,本研究对采自西藏墨脱县的一份野生灵芝子实体标本进行了分离纯化培养,并通过形态学观察和分子生物学分析鉴定为有柄灵芝 Ganoderma gibbosum.将此菌株作为试验菌株,从碳源、氮源、温度、pH这4个因素进行生物学特性研究,从中选择3个较优水平进行正交试验.结果表明,有柄灵芝菌丝生长的最佳碳源为果糖,氮源为酵母,最适温度为25℃,适宜 pH 为 7.0.驯化出芝栽培基质配方选用杂木屑 58%、玉米芯 20%、麦麸 20%、石灰1%、石膏 1%,40 d左右菌丝满袋,覆土一周后出现原基,50 d左右子实体成熟.初步成分分析表明,有柄灵芝粗多糖、氨基酸含量分别为1.5%和10.8%.本试验成功对野生有柄灵芝进行了人工驯化栽培,为有柄灵芝作为新的药用菌进行开发利用提供了参考.

目的 探究灵芝孢子多糖对流感疫苗免疫小鼠的免疫效果及增效作用机制.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为4组,即空白对照组、疫苗组、氢氧化铝佐剂组、灵芝孢子多糖组.除空白对照组外,各组小鼠分别于第0天、第14天以肌肉注射方式进行初次免疫和加强免疫,免疫剂量为流感疫苗血凝素15μg/只小鼠,氢氧化铝佐剂100μg/只小鼠,灵芝孢子多糖800 μg/只小鼠,给药体积0.2 mL,观察抗体效价、脏器指数、T细胞亚型、骨髓树突细胞表达、细胞因子水平等指标,评价灵芝孢子多糖对流感疫苗的免疫,并阐释其作用机制.结果 灵芝孢子多糖与流感疫苗共同免疫小鼠无过敏反应,状态良好.与疫苗组比,灵芝孢子多糖组在第2次免疫后14 d可显著增加血凝抑制抗体滴度(P＜0.05),且优于氢氧化铝佐剂;可促进脾脏T、B淋巴细胞增殖,提高CD4+T细胞含量,降低CD8+T细胞含量,显著提高CD25+T细胞含量(P＜0.01);显著增加小鼠骨髓树突细胞表面MHC Ⅱ分子水平(P＜0.001)、CD86+分子水平(P＜0.05)和CD80+分子水平;促进血清中IL-4、TNF-α等细胞因子表达(P＜0.01).结论 灵芝孢子多糖对流感疫苗免疫小鼠具有显著的佐剂效应,显著提高了抗体水平.灵芝孢子多糖通过诱导Th1/Th2型免疫应答,提高T、B细胞的增殖活性,影响T细胞亚群分布和促进DC细胞成熟并提高其抗原提呈能力等方面提高细胞免疫和体液免疫作用,发挥免疫佐剂效应.

目的 通过CiteSpace软件分析近30年中医药治疗糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)相关文献,梳理该领域研究现状、研究热点及发展趋势,以期为后续的研究提供参考.方法 检索中国知网从建库至2022年12月中医药治疗DCM的有关文献,利用CiteSpace 6.1.R6软件对文献发文量、作者、机构、关键词、突现词进行可视化分析.结果 共检索出608篇文献,按照纳入排除标准筛选后最终纳入548篇文献.本领域相关研究的发文量总体呈上升趋势,共出现35名核心作者,并形成了多个成员数目不等的作者合作团队.发文量排名前10位的机构累计发表文献共152篇(27.7％),按发文量排名前3位分别为黑龙江中医药大学、中国中医科学院、山东中医药大学.分析后得到315个关键词、10个关键词聚类团及16个突现词.关键词共现图显示动物实验、氧化应激、细胞凋亡研究频次较高;关键词聚类涉及丹参饮、生脉饮、炙甘草汤等成方及葛根素、黄芪、灵芝多糖等有效中药成分对DCM的疗效观察及深层机制;突现词分析显示氧化应激、自噬、凋亡、炎症为近年热点研究方向.结论 通过知识图谱直观地呈现出中医药治疗糖尿病心肌病的研究现状,我国研究热点为单味中药及提取物、中药复方对DCM的效应机制研究,研究者可重点挖掘氧化应激、炎症、自噬、凋亡在中医药治疗DCM中的作用.