目的:探讨抗菌肽生物功能化TiO 2纳米管的抗菌性能及其对人角质形成细胞黏附、迁移等生物学行为的影响。 方法:采用阳极氧化法在光滑钛片（光滑钛组）表面构建TiO 2纳米管阵列（纳米管组），通过物理吸附方式将抗菌肽（LL-37）加载至TiO 2纳米管表面（抗菌肽组）。每组采用简单随机抽样法抽取3个试样，借助场发射扫描电镜、原子力显微镜、接触角测量仪、荧光标记和荧光酶标仪观察各组试样表面形貌、粗糙度、亲水性以及抗菌肽释放特点。将人角质形成细胞分别培养于3组钛试样表面，每组设置3个重复，场发射扫描电镜观察细胞黏附形态，细胞免疫荧光染色观察黏附数量；细胞计数试剂盒检测细胞增殖能力；划痕实验分析细胞迁移特点，评价各组钛试样对HaCaT细胞生物学行为的影响。将牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，Pg）接种至3组钛试样表面，每组设置3个重复，场发射扫描电镜观察细菌形态，活死细菌染色法测定细菌活力，评价各组钛试样对Pg的抑制作用。 结果:抗菌肽组试样表面可见均匀排列的纳米管阵列，管口处有颗粒状抗菌肽覆盖。纳米管组和抗菌肽组钛试样表面粗糙度［分别为（20.40±3.10）和（19.10±4.11）nm］和亲水性（接触角分别为22.4°±3.1°和25.3°±2.2°）均比光滑钛组［粗糙度为（2.30±0.18）nm，接触角为71.8°±1.7°］显著增加（ P<0.05）。抗菌肽的释放表现为早期的突释（1~4 h）和长期（1~7 d）的缓释过程。免疫荧光显示，HaCaT细胞接种至钛试样表面0.5和2.0 h后，纳米管和抗菌肽组钛试样表面细胞黏附数量均比光滑钛组显著增加（ P<0.05）；细胞计数结果显示，接种1、3及5 d后各组细胞增殖活性差异均无统计学意义（ P>0.05）；划痕实验显示，与光滑钛和纳米管组相比，划痕后24 h时抗菌肽组钛试样表面愈合率最高［（96.4±4.9）%］（ F=35.55， P<0.001），抗菌肽组钛试样24 h即可形成单层细胞并填充划痕。体外细菌共培养实验显示，相比于光滑钛组，纳米管和抗菌肽组钛试样表面细菌皱缩明显，抗菌肽组钛试样表面可见明显的菌体破裂；活死细菌染色显示，抗菌肽组钛试样表面绿色荧光强度为各组最低（ F=66.54， P<0.001）。 结论:抗菌肽生物功能化TiO 2纳米管材料具备良好的抗菌性能，有利于人角质形成细胞的黏附及迁移。

目的:探讨二酰甘油(DG)诱导中性粒细胞胞外捕获网(NETs)生成和潜在的调控机制,评估NETs对牙龈上皮角化屏障的影响.方法:从MTBLS4684 数据库中获取牙周炎和健康受试者的脂质组学数据,对其进行标准化处理,分析两组中DG的含量差异.使用DG处理人外周血多形核中性粒细胞(PMNs)后,通过Western blot检测瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)表达,Sytox green染色检测胞外核酸变化,免疫荧光检测CitH3 表达及分布的变化.使用蛋白激酶C(PKC)抑制剂预处理PMNs后,再加入DG 刺激,通过 Western blot、Sytox green 染色和免疫荧光检测 NETs 形成.提取 NETs 刺激人牙龈角质形成细胞(HGKs),采用实时荧光定量PCR和Western blot检测兜甲蛋白(LOR)和紧密连接蛋白 2(CLDN2)的表达变化.通过免疫组化检测健康和牙周炎组牙龈上皮中LOR和CLDN2 的表达,并使用Western blot检测牙龈上皮中NETs标志物CitH3 和髓过氧化物酶(MPO)蛋白表达.结果:牙周炎患者牙龈上皮中多种 DG 含量增高.DG 刺激 PMNs 后,CitH3 蛋白表达增加(P＜0.01),核酸释放到细胞外,CitH3 荧光表达增强并向细胞外分布;使用PKC抑制剂后,上述过程被有效抑制.NETs刺激HGKs细胞后,角化标志物LOR和屏障标志物CLDN2 基因和蛋白表达降低(P＜0.05).牙周炎患者牙龈上皮中LOR和CLDN2表达降低,CitH3 和MPO蛋白表达增加(P＜0.05).结论:DG通过激活PMNs中的PKC促进NETs形成和累积,进而破坏牙龈上皮的角化和屏障功能.

目的:研究槲皮素对人口腔角质细胞(human oral keratinocytes,HOKs)再生的生物学效应.方法:通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)及迁移实验验证槲皮素对人牙龈角质细胞的增殖与迁移的药理作用.通过牙龈卟啉单胞菌脂多糖作为炎症刺激因子构建体外炎症模型,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1和TGF-β3的表达及炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的基因表达验证槲皮素的抗炎效果.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测TGF-β1和TGF-β3的分泌水平.结果:20μmol/L槲皮素促进HOKs的增殖与迁移,并提高TGF-β3的mRNA水平与蛋白质表达,而50μmol/L槲皮素对TGF-β1的表达有促进作用.20、50μmol/L的槲皮素都有明显的抗炎作用.结论:20μmol/L槲皮素在体外实验中能够促进创面愈合并且促进HOKs再生.

牙龈的颜色取决于多种因素,包括血管的数量及直径,上皮层的厚度,上皮层内角质化的程度及色素的多少等[1].牙龈色素沉着的病因分为内源性和外源性两种,可源于接触香烟,药物,激素,创伤及放射[2].只有明确牙龈色素沉着的病因,才能有针对性地选择合适的治疗方法.色素是由位于上皮基底层的黑色素细胞产生的[3],因此,将整个上皮层去掉是治疗色素沉着的方法之一.自从Maiman在1960年发明第一台工作用激光后,激光越来越被广泛用于临床,且激光有很多的优点:更少的出血,恢复更快,更少的并发症,非接触模式下更小的感染发生率[4].激光疗法是基于将光能转化为热能的光热效应理论.半导体激光能够祛除色素沉着[5],口腔医学中使用的半导体激光波长为800～980 nm,而黑色素的吸收波长为351～1 064nm,由此可以看出所有波长的半导体激光均可被着色的组织吸收[6,7].

种植义齿周围充足的角化牙龈与种植体周围软硬组织的长期稳定有着密切的关系,充足的角化牙龈不仅可以恢复原有的软组织解剖形态,同时也为种植义齿的红白美学打下了坚实的基础.角化牙龈由表面高度角化的复层鳞状上皮组成,这种结构相比于无角化上皮,有较好的机械强度,在外界的刺激下可以更好地保持其上皮袖口相对稳定的形态,形成了口腔内第一道软组织屏障.关于缺牙区角化龈消失或不足的病因及发病的机制,目前鲜见文献报道,为了掌握种植体周围角化龈增量的有效方法,本文讨论了影响角化龈宽度的若干重要因素.

目的:探讨人胚胎干细胞源角质形成细胞(keratinocytes derived from human embryonic stem cells,K-hESCs)用于药物细胞毒理检测反应的可行性,为建立新的生物安全性评价模型提供依据.方法:应用CCK-8法检测细胞活性和细胞毒性.观察维A酸(RA)、5氟尿嘧啶(5-FU)、地塞米松(DEX)和青霉素G(PG)对K-hESCs、人原代牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)和人永生化口腔上皮细胞系(human immortalized oral epithelial cells,HIOEC)的细胞毒性反应.采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:RA作用于HGECs、HIOEC和K-hESCs 3种角质形成细胞后,其药物半数抑制浓度(IC50)分别为6.1±0.03、5.62±0.05和6.58±0.02;5-FU作用于3种细胞后,IC∞分别为1.65±0.02、3.00±0.02和1.72±0.04;DEX作用于3种细胞后,IC50分别为113.67±0.014、328±0.002和126.17±0.05;PG作用于3种细胞后,IC50分别为2200±1.34、3795±2.42和2880±1.5.4种药物对HIOEC和HGECs的IC50有统计学差异(P＜0.05).对K-hESCs和HIOEC的IC50差异也有统计学意义(P＜0.05),但对K-hESCs和HGECs的IC50差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在一般细胞毒性上,K-hESCs的药物半数抑制浓度比HIOEC更接近HGECs,可模拟人体正常细胞的反应.

背景:牙周软组织量不足带来天然牙及修复体的红白美学问题,导致牙龈炎、种植体周围炎等疾病发生.不同细胞及材料组合的细胞支架复合体可以促进牙周软组织再生,有望取代自体移植物.目的:综述自体或同种异体成纤维细胞、角质细胞、间充质干细胞结合支架材料应用于牙周软组织增量的研究进展及突破.方法:在PubMed、CNKI、万方、Sciencedirect、Medline数据库中进行相关文献检索,以"牙龈退缩,软组织增量,根面覆盖术,上皮下结缔组织移植物"及"gingival recession,soft tissue augmentation,root coverage,subepithelial connective graft"为关键词进行搜索,阅读摘要、结论进行初步筛选,排除与文章主题无关的研究及试验,最后纳入61篇文献进行结果分析.结果与结论:间充质干细胞在龈乳头增量方面展现出不小的潜力.单纯的成纤维细胞或角质细胞联合胶原蛋白、壳聚糖、脱细胞真皮基质等支架移植在软组织增量上未能取得预期角化龈增量,尽管两种细胞联合胶原蛋白基质表现出更为乐观的结果且当前的支架材料具有良好可塑性、生物相容性,然而成纤维细胞及角质细胞的共培养费时且成本高昂,加上支架材料的构象较为单一,如何解决这些问题仍是一段漫长的过程.

目的 利用生物信息学技术分析中重度牙周炎患者炎性病变牙龈组织与健康牙龈组织间基因表达的差异.方法 使用基因表达数据分析工具GEO2R从牙周炎数据集GSE10334与GSE16134中筛选差异表达基因并取交集.应用g:Profiler功能富集分析工具,分别对上调及下调基因进行基因本体分析和通路分析.利用在线STRING检索工具构建蛋白相互作用(PPI)网络,并在Cytoscape软件中进行可视化及进一步分析,包括使用cytoHubba、MCODE和iRegulon等插件进行核心基因、关键模块鉴定和转录因子预测.结果 共筛选出196个牙周炎差异基因,其中上调基因139个,下调基因57个;上调基因参与了免疫系统、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、白细胞跨内膜迁移和趋化因子受体结合趋化因子等免疫反应相关途径,而下调基因则涉及了角质化包膜形成、角化等途径.PPI网络中处于核心位置的基因为CXC基序趋化因子配体(CXCL)8、CXCL1、CXC基序趋化因子受体(CXCR)4、选择素(SEL)L、CD19和IKAROS家族锌指(IKZF)1.PPI网络关键模块分别参与趋化因子应答、B细胞受体信号通路和白细胞介素应答.iRegulon预测结果显示,转录因子干扰素调节因子(IRF)4可信度最高.结论 牙周炎的发病机制与牙龈组织中CXCL8、CXCL1、CXCR4、SELL、CD19和IKZF1等基因的表达变化密切相关,转录因子IRF4可能是重要的上游调控因子.

目的 探讨瘦素(leptin)转染的人胎盘间充质干细胞(HPMSCs)对被X射线辐照后的口腔黏膜修复细胞的作用影响,为进一步的临床治疗提供新思路.方法 实验分为转染leptin的HPMSCs组(HPMSCs/Leptin)和转染空载体的HPMSCs组(HPMSCs/NC),将人牙龈成纤维细胞(HGnF)、人口腔角质细胞(HOK)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行单剂量20Gy的X射线照射,Transwell检测3种被X射线辐照后细胞的迁移能力.构建HPMSCs/Leptin或HPMSCs/NC与辐照后HGnF、HOK和HUVEC的共培养体系,通过CCK-8检测被X射线辐照后3种细胞在24 h、48 h、72 h、96 h的增殖活性,ELISA检测被X射线辐照后3种细胞在24 h、48 h、72 h表达炎症因子(人IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α)的水平.结果 HPMSCs/Leptin可促进HUVEC的迁移,抑制HGnF和HOK的迁移.HPMSCs/Leptin能增强辐照损伤后的HOK和HUVEC的增殖能力,但对HGnF的增殖影响不明显.HPMSCs/Leptin能促进HGnF、HOK和HUVEC分泌炎症因子人IL-1α、IL-6、GM-CSF和TNF-α,但对人IL-1β和IL-8的分泌无明显影响.结论 瘦素转染的人胎盘源间充质干细胞HPMSCs/Leptin可通过补充口腔黏膜修复细胞数量、调节炎症反应、促进血管新生等途径,对促进放创复合伤伤口愈合过程发挥一定的积极作用.

目的 探讨没食子水提取物对脂多糖诱导的人牙龈上皮角质形成细胞(HGEK)的抗炎作用,以及对细胞组织伤口愈合作用的影响.方法 选取中国人民解放军空军军医大学第九八六医院口腔科2020年6月至12月收治的10例牙冠延长术患者的健康牙龈,体外培养HGEK细胞,使用第3～5代细胞.分为阴性对照组(A组,PBS),脂多糖组(B组,质量浓度为1μg/mL),低、中、高没食子水提取物组(分别为C1组、C2组、C3组,没食子酸质量浓度分别为1,5,10 mg/mL),氯己定组(D组,蒸馏水调整20％葡萄糖酸氯己定质量分数至0.2％).采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞活力;采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因和蛋白表达的水平;采用划痕愈合实验观察没食子水提取物对细胞迁移的影响;采用蛋白免疫印迹法测定核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)基因和蛋白表达水平.两组间定量资料采用Bonferroni检验,多组间定量资料比较采用方差分析(ANOVA).结果 与A组比较,C2组、C3组细胞活力显著增强(P<0.05).与B组比较,C2组、C3组IL-1β,IL-6,TNF-α基因和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),C3组细胞迁移率显著增加(P<0.05);与A组比较,C3组Nrf2和HO-1基因和蛋白的表达水平显著增强(P<0.05).结论 没食子水提取物可下调炎性细胞因子水平,减轻脂多糖诱导的HGEK的炎性反应,具有作为口服口腔抗炎药的可能性.