目的:探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells，hPMSCs)表面CD73的表达，以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法:流式细胞术(flow cytometry，FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis, RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α，β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果:FCM与Western blot检测结果显示，外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达( P<0.001, P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后，hPMSCs上CD73表达明显下降( P<0.01)；IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平( P<0.05, P<0.01)，而加入STAT3抑制剂后，CD73表达下降( P<0.01)。RTCA分析结果显示，敲低hPMSCs上CD73的表达后，hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低( P<0.01, P<0.05)，迁移能力明显上升( P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后，hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低，而迁移能力增强( P<0.05)。 结论:IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达，进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）是起源于人体各种组织，如骨髓、脂肪组织、脐带、胎盘、牙髓的一类多能干细胞 [1]。MSCs的分泌组包括MSCs条件培养基、各种旁分泌/自分泌因子等以及称为细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）的小泡分泌物 [2]。与MSCs一样，MSCs-EVs作为一种重要的信号传导介质，可以有效转运各种miRNAs、LncRNAs和蛋白质等至靶细胞内 [3,4]，发挥着炎症-免疫调节、抗凋亡、调控靶细胞的组织再生修复等作用，在脓毒症、创伤等急危重症中得到一定应用 [5,6]。

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells，hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2)途径抑制CD4 ＋IFN-γ ＋T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease，GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。 方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4 ＋IFN-γ ＋TNF-α ＋T(TNF-α ＋Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化，并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)向Th1细胞诱导方案，检测TNF-α ＋Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B，p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity，MFI)。 结果:与正常对照组相比，GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞比例和TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达明显升高( P<0.01)；hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞比例( P<0.001)，促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达( P<0.01， P<0.001)，然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞的干预效果明显减弱( P<0.05， P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示，肝脏中TNF-α ＋Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关( P<0.001)。同样，皮肤和肺组织病理学分析结果也显示，外周血中TNF-α ＋Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关( P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α ＋Th1细胞比例( P<0.01)，上调TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达( P<0.05)；进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α ＋Th1细胞中Nrf2的MFI( P<0.05)，减弱p-NF-κB的MFI( P<0.01)。 结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达，抑制TNF-α ＋Th1细胞形成，进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

目的 研究间充质干细胞来源外泌体微小核糖核酸-3614-5p(miR-3614-5p)对模型大鼠先兆子痫(preeclampsia,PE)进展的调节作用及相关机制.方法 将36只SD大鼠(24只雌性和12只雄性)以雌雄比例2∶1合笼饲养自然受孕.24只妊娠大鼠随机分为假手术组(sham组)、PE模型组(PE组)和外泌体miR-3614-5p组(PE+exo组),每组8只.PE组通过皮下注射100 mg/kg的NG-硝基-L-精氨酸甲酯建立大鼠PE模型;PE+exo组构建PE模型,同时在第14天腹腔注射160 μg/ml的外泌体悬液(0.5 ml/只/天),连续6天,实验持续21天;sham组则给予等量生理盐水.在妊娠第0,7,14和21天测量血压和尿蛋白浓度.RT-qPCR检测miR-3614-5p水平及B细胞淋巴瘤病-2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)的mRNA水平;ELISA检测Caspase-3活性、活性氧(ROS)水平及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe2+)含量;Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白水平.结果 与sham组大鼠相比,PE组大鼠的胎盘组织(0.43±0.05 vs 1.01±0.07)和外周血(0.51±0.07 vs 1.01±0.12)中miR-3614-5p表达显著下调,差异具有统计学意义(t=19.070,10.180,均P＜0.01).与上清液相比,源自MSCs的外泌体中miR-3614-5p显著富集.与sham组相比,PE组大鼠第21天的舒张压(175.43±6.02 mmHg vs 113.26±5.11 mmHg)、收缩压(123.57±5.63 mmHg vs 82.63±5.26 mmHg)及尿蛋白含量(175.48±13.21 mg/ml vs 67.65±5.76 mg/ml)显著升高(t=22.606,16.440,23.168,均 P＜0.01);与 PE 组相比,PE+exo 组舒张压(124.57±5.33 mmHg vs 175.43±6.02 mmHg)、收缩压(89.76±3.88 mmHg vs 123.57±5.63 mmHg)及尿蛋白含量(97.69±7.23 mg/ml vs 175.48±13.21 mg/ml)显著降低,差异具有统计学意义(t=18.493,13.577,16.713,均P＜0.01).与sham组相比,PE 组大鼠胎盘组织中 Caspase-3 活性(238.56％±13.22％vs 100.12％±5.93％)、Bax 水平(3.18±0.71 vs 1.01±0.11)、ROS 水平(387.65％±25.98％vs 100.51％±5.89％)、MDA 含量(33.21±3.17 nmol/mg vs 14.83±2.69 nmol/mg)和 Fe2+浓度(38.77±6.53 nmol/ml vs 17.51±3.15 nmol/ml)显著升高,而 Bcl-2 水平(0.47±0.08vs 1.01±0.12)、GSH 含量(4.12±1.22 nmol/mg vs 9.76±0.93 nmol/mg)、GPX4 蛋白(0.48±0.06 vs 1.01±0.24)和 SLC7A11 蛋白(0.51±0.11 vs 1.01±0.11)水平则显著降低(t=6.459～32.863,均P＜0.01);与PE组相比,PE+exo组胎盘组织中Caspase-3活性(117.35％±8.67％vs 238.56％±13.22％)、Bax 水 平(1.13±0.45 vs 3.18±0.71)、ROS 水平(128.73％±14.37％vs 387.65％±25.98％)、MDA 含量(18.13±3.89 nmol/mg vs 33.21±3.17 nmol/mg)和 Fe2+浓度(19.05±3.45 nmol/ml vs 38.77±6.53 nmol/ml)显著降低,而 Bcl-2 水平(1.04±0.11 vs 0.47±0.08),GSH 含量(7.86±1.07 nmol/mg vs 4.12±1.22 nmol/mg),GPX4 蛋白(0.98±0.14 vs 0.48±0.06)和 SLC7A11 蛋白(1.11±0.09 vs 0.51±0.11)水平则显著升高,差异具有统计学意义(t=6.093～29.633,均P＜0.01).结论 miR-3614-5p在PE模型大鼠的胎盘组织和外周血中显著下调.MSCs来源的外泌体miR-3614-5p通过抑制铁死亡改善大鼠的PE进展.MSCs来源的外泌体miR-3614-5p可能是PE治疗的一个新的潜在的生物标志物.

目的 明确胎盘间充质干细胞来源外泌体对大鼠全脑缺血再灌注的保护作用效应并探索可能的机制.方法 在胎盘间充质干细胞中分离获得外泌体.采用改良Pulsinelli四血管闭塞法在Wistar大鼠中建立全脑缺血再灌注模型.将大鼠随机分为3 组,分别为假手术组、模型组及外泌体治疗组,于给药治疗后,在24、48 和72h时间点测量脑组织含水量和Evans blue染色量,并采用Western-blotting确定脑组织中Caveolin-1 和ZO-1 的水平.结果 本研究成功分离胎盘间充质干细胞,并分离获得了其来源的外泌体,该外泌体能够被磷钨酸染色,尺度分布为50～200 nm,且表达CD63c不表达GM-130a.在48 和72h时,治疗组脑组织水含量相较于模型组有显著下降,且治疗组与假手术组相比在 72h无显著差异.EB染色的结果与水含量的结果相似,但是在72h仍高于假手术组.Western-blotting和免疫组化显示外泌体能够升高Caveolin-1 和ZO-1 的水平.结论 胎盘来源外泌体能够通过调节Caveolin-1 和ZO-1 的水平改善全脑缺血再灌注的严重程度,可能是在老年患者中治疗缺血再灌注一种潜在方案.

目的 探讨多次输注胎盘间充质干细胞来源的外泌体对2型糖尿病小鼠胰岛功能和炎症因子的影响.方法 应用外泌体提取试剂盒提取胎盘间充质干细胞来源的外泌体;采用高脂高糖饮食及链脲佐菌素诱导2型糖尿病小鼠模型,并随机分为模型组和外泌体治疗组,同时设置正常对照组.外泌体治疗组每隔一天进行尾静脉注射20 μg胎盘间充质干细胞来源的外泌体,模型组每隔一天尾静脉注射等体积PBS,连续注射4周.检测正常组、模型组以及外泌体治疗组小鼠的随机血糖、体重及糖耐量水平;酶联免疫吸附实验检测血清中C-肽和胰岛素水平;Luminex检测血清中炎症因子IL-1β、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平;HE染色观察胰腺组织中胰岛的变化;免疫荧光染色检测外泌体对胰腺组织中的胰岛素和胰高血糖素表达水平的影响.结果 与模型组比较,外泌体治疗组小鼠的空腹血糖明显降低(P＜0.001),体重增加(P＜0.01),糖耐量水平明显升高(P＜0.001),血清C肽和胰岛素水平都明显升高(P＜0.001),胰岛形态及大小得到明显改善,胰腺组织结构清晰可见,结构较完整,胰岛β细胞数量及比例明显升高(P＜0.01),血清中的促炎症因子IL-1β、IL-12、IFN-γ和TNF-α明显下降(P＜0.001),而抗炎因子IL-4和IL-10明显升高(P＜0.001).结论 多次输注胎盘间充质干细胞来源的外泌体能够抑制炎症反应,改善胰岛功能.

间充质干细胞具有较低的免疫原性、较强的细胞增殖分化能力,在缺血性卒中的治疗方面显示出巨大潜力.间充质干细胞主要源自骨髓、脂肪和胎盘,具有调节免疫炎症反应、神经保护、促血管生成等作用,常见注射方式为脑内注射、静脉注射和动脉注射等,同时联合缺氧预处理等物理疗法可增强其治疗缺血性卒中的效果.本文综述间充质干细胞治疗缺血性卒中的动物实验进展,从细胞种类、作用机制、注射方式以及增强疗效的物理疗法等角度,阐述间充质干细胞对缺血性卒中的治疗作用,为缺血性卒中的临床治疗提供新的思路.

目的:研究雌二醇(E2)通过调控微小RNA-16(miR-16)的表达对胎盘蜕膜来源间充质干细胞(MSCs)活力的影响.方法:分别检测E2在正常孕妇及重度子痫前期(PE)患者外周血中的浓度.CCK-8法分析不同浓度E2对MSCs活力的影响.Real-time PCR分析不同浓度E2处理MSCs对miR-16表达的影响.探索E2通过何种受体调控miR-16表达.结果:与正常孕妇相比,重度PE患者外周血中E2浓度显著降低(P<0.01).5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs 48 h后,MSCs活力显著增加(P<0.05).5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs 12 h后,miR-16的表达水平下调(P<0.05),而用10 nmol/L E2处理MSCs不同时间(0 h、3 h、6 h、12 h和24 h)后,miR-16表达水平随着时间呈现明显下调趋势.在E2处理之前预先转染miR-16,细胞活力被显著逆转.E2处理MSCs之前6 h,用雌激素受体拮抗剂ICI 182780和他莫昔芬预预处理,E2对miR-16失去抑制作用.雌激素受体α(ERα)激动剂丙基吡唑三醇(PPT)及ERβ受体激动剂二芳基丙腈DPN分别处理MSCs后,仅PPT可明显抑制miR-16表达.结论:雌二醇可能通过ERα抑制miR-16表达,从而促进蜕膜MSCs的生长.

背景:间充质干细胞来源于多种组织,如骨髓、牙髓、胎盘、脐带和脂肪等,其中乳牙牙髓间充质干细胞具有强大的干性和生物学活性,无排异反应,免疫调节能力强,是非常优秀的生物治疗细胞来源之一.由于乳牙牙髓间充质干细胞取材方便,适宜于大规模培养,因此为牙髓干细胞的产业化奠定了良好基础.目的:观察乳牙牙根吸收情况对牙髓干细胞提取结果的影响,为进一步判断乳牙源齿的拔除时机提供有效的依据.方法:采集173例小学生173颗源齿,年龄7-9岁.在采集前对源齿进行根尖X射线片或曲面体层片检查,检查标准以及方法均遵照世界卫生组织专业检查标准.按牙根吸收情况将乳牙分为牙根吸收1/3、牙根吸收1/2、牙根吸收2/3、牙根完全吸收(髓室底完整)、自然脱落的乳牙5种情况,采集的源齿在拔牙离体后7 s内放入培养液中,于2-4 ℃的冰箱中保存,24 h内由专业的冷链物流送至北京口腔干细胞库进行乳牙牙髓干细胞的提取和保存,对检测结果进行统计分析.结果与结论:①牙根吸收1/3的源齿32颗,牙髓干细胞提取成功30颗,成功率94%,继承恒牙异位萌出12颗,平均萌出时间(2.19±0.18)个月;②牙根吸收1/2的源齿35颗,牙髓干细胞提取成功32颗,成功率92%,继承恒牙异位萌出11颗,平均萌出时间(1.89±0.13)个月;③牙根吸收2/3的源齿59颗,牙髓干细胞提取成功54颗,成功率92%,继承恒牙异位萌出8颗,平均萌出时间(1.42±0.12)个月;④牙根完全吸收但髓室底完整的源齿37颗,牙髓干细胞提取成功34颗,成功率92%,继承恒牙异位萌出2颗,平均萌出时间(1.03±0.15)个月;⑤自然脱落的乳牙10颗,牙髓干细胞提取成功0颗,继承恒牙异位萌出4颗,平均萌出时间(0.65±0.23)个月;⑥结果表明,自然脱落的乳牙为无牙髓的牙齿,无干细胞;乳牙在Ⅱ度松动以内,牙根吸收2/3以上或牙根完全吸收但髓室底完整存在的情况下,提取成功率高,且对恒牙的萌出无太大影响,为最佳的乳牙源齿采集时机.

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