目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠内质网应激的影响.方法:将80只雄性SD大鼠随机分配,其中20只为正常组,剩余60只大鼠采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法诱导MN病变.将造模成功的大鼠随机分为模型组、贝那普利组和丹参多酚酸盐低、中、高剂量组,每组10只,另取10只正常组大鼠共同进行实验.贝那普利组每日给药剂量为10 mg/kg,丹参多酚酸盐低、中、高剂量组每日给药剂量分别为16.7、33.3、66.7 mg/kg,正常组和模型组予等体积生理盐水,各组均每日灌胃1次,连续4周.检测各组大鼠治疗后24h尿蛋白定量(24 h-UTP);腹主动脉取血分离血清,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;过碘酸六胺银(PASM)染色后光镜观察各组大鼠肾组织病理形态,透射电子显微镜进一步观察各组大鼠肾组织细微结构变化;免疫荧光法检测各组大鼠肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;免疫组化(IHC)法检测各组大鼠肾组织足细胞裂隙膜蛋白(Podocin)、足细胞裂孔隔膜蛋白(Nephrin)表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达.结果:相较于正常组,模型组大鼠的肾组织显示出显著的病理性变化,肾小球基底膜显著增厚,并出现类似钉突的结构改变,同时伴有系膜基质的增生现象,沿毛细血管袢有IgG弥漫性沉积;各给药组大鼠肾组织上述病理改变有所缓解,足细胞损伤减少,IgG沉积减轻.模型组大鼠24 h-UTP水平显著高于正常组(P＜0.01);各给药组大鼠24 h-UTP水平均显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠24 h-UTP水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠24 h-UTP水平明显低于贝那普利组(P＜0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠24 h-UTP水平的降低作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.01).各组大鼠血清BUN、Scr水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠肾组织Podocin、Nephrin蛋白表达显著低于正常组(P＜0.05);各给药组大鼠上述蛋白表达均显著高于模型组(P＜0.05),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达水平明显高于贝那普利组(P＜0.05),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的升高作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.05).模型组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、Bax蛋白表达水平均明显高于正常组(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显低于正常组(P＜0.01);各给药组大鼠肾组织上述蛋白表达水平均较模型组显著改善(P＜0.05,P＜0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达的改善程度显著优于贝那普利组(P＜0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的改善作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.01).结论:丹参多酚酸盐可能通过调控PERK/ATF4/CHOP信号通路,缓解肾组织内质网应激,抑制足细胞凋亡,进而保护肾脏及延缓疾病进展.

目的:评价缺刻基因1(Notch1)/发状分裂相关增强子1(Hes1)信号通路在高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:取H9c2心肌细胞在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养、传代，采用随机数字表法分为6组( n＝12)：对照组(C组)用低糖培养基孵育72 h；缺氧复氧组(H/R组)用低糖培养基孵育72 h后，置于37 ℃、95%N 2-5%CO 2培养箱中缺氧24 h，然后立即置于37 ℃、95%O 2-5%CO 2培养箱中复氧6 h；缺氧复氧+Jagged-1组(H/R+J组)在低糖培养基中加入Notch1/Hes1信号通路特异性激动剂Jagged-1 5 μg/ml孵育72 h，然后进行缺氧复氧处理；高糖组(HG组)用高糖培养基(葡萄糖浓度33 mmol/L)孵育72 h；高糖+缺氧复氧组(HG+H/R组)用高糖培养基孵育72 h，然后进行缺氧复氧处理；高糖+缺氧复氧+Jagged-1组(HG+H/R+J组)用高糖培养基和Jagged-1 5 μg/ml共孵育72 h，然后进行缺氧复氧处理。于复氧6 h时，收集细胞培养液上清，测定SOD和LDH的活性，采用CCK-8法测定细胞活力，采用流式细胞仪测定细胞凋亡率，采用Western blot法检测Notch1、Hes1和c-caspase-3表达水平。 结果:与C组比较，H/R组、H/R+J组和HG组细胞活力和SOD活性降低，细胞凋亡率和LDH活性升高，H/R组和H/R+J组细胞Notch1、Hes1和c-caspase-3表达上调，HG组细胞Notch1和Hes1表达下调，c-caspase-3表达上调( P<0.05)；与H/R组比较，H/R+J组细胞活力和SOD活性升高，细胞凋亡率和LDH活性降低，细胞Notch1和Hes1表达上调，c-caspase-3表达下调，HG+H/R组细胞活力和SOD活性降低，细胞凋亡率和LDH活性升高，细胞Notch1和Hes1表达下调，c-caspase-3表达上调( P<0.05)；与HG组比较，HG+H/R组和HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性降低，细胞凋亡率和LDH活性升高( P<0.05)，HG+H/R组细胞Notch1和Hes1表达下调，c-caspase-3表达上调( P<0.05)；与HG+H/R组比较，HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性升高，细胞凋亡率和LDH活性降低，细胞Notch1和Hes1表达上调，c-caspase-3表达下调( P<0.05)；与H/R+J组比较，HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性降低，细胞凋亡率和LDH活性升高，细胞Notch1和Hes1表达下调，c-caspase-3表达上调( P<0.05)。 结论:Notch1/Hes1信号通路激活是高糖心肌细胞缺氧复氧损伤的内源性保护机制。

患儿女，3岁11个月，因周身红斑伴鳞屑3年就诊。患儿出生后3 d即发现周身皮肤出现散在红斑，部分融合成片，伴有渗出和痂屑。曾就诊于当地多家医院，均诊断为"湿疹"，一直间断外用多种糖皮质激素类药膏（具体不详），病情时轻时重。近2个月病情加重，红斑弥漫累及周身，伴有大量脱屑。家长否认系统性应用糖皮质激素类药物或中药，否认银屑病及遗传病家族史。体检：身高72 cm，体重12 kg，满月脸，水牛背，腹部膨隆，四肢肌力和肌张力正常，智力正常。皮肤科检查：全身皮肤弥漫浸润性红色斑块，四肢远端散在多发豆粒至甲面大小红色斑块，边界清楚，表面覆盖薄层鳞屑，全身受累面积> 90%（图1A）。实验室检查：肌酐13.8 μmol/L（参考值：41 ~ 73 μmol/L，下同），空腹血糖2.54 μmol/L（3.9 ~ 6.1 μmol/L），IgE 5 850 IU/ml（<100 IU/ml），早8：00血皮质醇159.65 nmol/L （240 ~ 619 nmol/L），促肾上腺皮质激素0.22 pmol/L（1.6 ~ 13.9 pmol/L）；血尿常规、肝功能、电解质（钠、氯、钾、钙）、超敏C反应蛋白、抗链球菌溶血素O、类风湿因子、IgA、IgM、IgG、补体均未见异常。遗传代谢病检查示氨基酸和酰基肉碱谱无异常。右股外侧典型皮损组织病理检查：表皮融合性角化不全，可见Munro微脓肿，棘层增生肥厚，真皮乳头血管扩张充血，真皮浅层血管周围少量淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，偶见中性粒细胞（图2）。

目的:探讨法舒地尔对主动脉平滑肌细胞（VSMC）自噬及凋亡的影响以及与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的关系。方法:用10%胎牛血清+DMEM培养液培养SD大鼠VSMC，并利用免疫细胞化学染色法检测传代细胞α平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达情况鉴定VSMC。采用血小板源性生长因子（PDGF）诱导VSMC，并将PDGF诱导的VSMC分为空白组、对照组、法舒地尔组（30 μmol/L法舒地尔）、法舒地尔+LY294002组（30 μmol/L法舒地尔+25 μmol/L LY294002）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率和凋亡周期，GFP-mRFP-LC3双荧光检测细胞自噬水平。采用蛋白免疫印迹法（WB）检测各组细胞Bax、Bcl-2、LC3、Beclin-1及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达情况并比较分析。结果:镜下观察培养细胞呈长梭形、放射性生长，出现典型的"峰-谷"样结构，a-SMA阳性表达率为99%，确认所培养细胞为高纯度主动脉VSMC。法舒地尔组细胞增殖能力低于对照组（ P<0.05），法舒地尔+LY294002组高于法舒地尔组（ P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例升高（均 P<0.05）；与法舒地尔组相比，法舒地尔+LY294002组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例回降（均 P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组自噬增强（ P<0.05），而法舒地尔+LY294002组的自噬则较法舒地尔组有所减弱（ P<0.05）。与对照组比较，Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平升高（均 P<0.05）；法舒地尔+LY294002组Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin 1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平较法舒地尔组有所回降（均 P<0.05）。 结论:法舒地尔通过激活PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制VSMC增殖，促进自噬及凋亡，改善血管功能。

目的:观察外源性硫化氢对高静止压力下兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其可能分子机制。方法:血管组织贴块法分离兔胸主动脉VSMC并于100 mmHg静止压力下培养，实验分为对照组，培养液含0.2%胎牛血清(FBS)但不含NaHS，10%FBS组及NaHS组(培养液含10%FBS且含50mmol/L NaHS)。应用5－溴脱氧尿嘧啶核苷法检测VSMC的增殖，并用Western－blotting法检测VSMC的内源性胱硫醚－γ－裂解酶(CSE)、钙调蛋白(Calmodulin，p－CaM /CaM)、CyclinD1蛋白水平。结果:与10%FBS组相比，NaHS可显著抑制100 mmHg压力下兔VSMC的增殖(0.50±0.03比0.26±0.03， P<0.05)。相比于对照组，10%FBS组CSE蛋白表达水平显著降低(1.21±0.10比0.33±0.04， P<0.05)，p－CaM、CylinD1二者表达显著增加(0.23±0.04比0.86±0.04与0.22±0.03比1.19±0.06， P<0.05)。与10%FBS组相比，NaHS组CSE蛋白表达水平显著增加(0.33±0.04比1.11±0.11， P<0.05)，而p－CaM、CyclinD1蛋白表达水平均显著降低(0.86±0.04比0.26±0.05与1.19±0.06比0.51±0.03， P<0.05)。 结论:外源性硫化氢通过细胞内CSE/硫化氢信号通路抑制高静止压力下的兔VSMC增殖可能与p－CaM与CyclinD1表达抑制有关。

目的:探讨微小RNA-1（miR-1）对缺氧/复氧（H/R）心肌细胞凋亡的调节作用。方法:体外培养大鼠胚胎心脏组织来源心肌细胞株H9c2，将处于对数生长期的细胞分为空白对照组、H/R组、miR-1模拟物（mimics）+H/R组、miR-1抑制剂反义寡核苷酸（ASO）+H/R组和微小RNA阴性对照片段（miRNA NC）+H/R组。用含低浓度胎牛血清（FBS）的低糖DMEM培养基作为缺氧条件下的培养基，置于37 ℃密闭无氧培养箱中（95% N 2和5% CO 2）培养12 h后，再换取新鲜的含5% FBS的高糖DMEM培养基，置于37 ℃密闭培养箱中培养，建立心肌细胞H/R模型；空白对照组用含10% FBS的高糖DMEM培养基，于37 ℃、5% CO 2培养箱中培养。miR-1 mimics+H/R组、miR-1 ASO+H/R组、miRNA NC+H/R组分别于制模前在高糖培养基中加入相应转染物，终浓度均为50 nmol/L；空白对照组和H/R组不予转染处理。制模完成后，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测细胞miR-1的表达水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9（caspase-9）、Bcl-2和Bax的表达水平；应用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况。 结果:与空白对照组相比，H/R组心肌细胞中miR-1表达水平、caspase-9和Bax的蛋白表达水平、细胞凋亡率均明显升高，而Bcl-2表达水平明显下降，说明H/R心肌细胞中miR-1表达增加，凋亡水平升高。与H/R组相比，miR-1 mimics+H/R组心肌细胞中miR-1表达水平、caspase-9和Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率均进一步升高〔miR-1（2 -ΔΔCt）：11.59±1.48比2.57±0.38，caspase-9蛋白（caspase-9/β-actin）：2.59±0.12比1.56±0.20，Bax蛋白（Bax/β-actin）：4.09±0.38比1.97±0.13，细胞凋亡率：（25.23±0.87）%比（17.86±0.73）%，均 P<0.01〕，而Bcl-2蛋白表达水平则进一步下降（Bcl-2/β-actin：0.37±0.02比0.49±0.03， P<0.01）；miR-1 ASO+H/R组miR-1表达水平、caspase-9和Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率显著下降〔miR-1（2 -ΔΔCt）：1.16±0.06比2.57±0.38，caspase-9蛋白（caspase-9/β-actin）：1.05±0.24比1.56±0.20，Bax蛋白（Bax/β-actin）：0.93±0.11比1.97±0.13，细胞凋亡率：（11.19±0.85）%比（17.86±0.73）%，均 P<0.05〕，而Bcl-2的表达水平则显著升高（Bcl-2/β-actin：0.84±0.17比0.49±0.03， P<0.05）；miRNA NC+H/R组miR-1表达，caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达以及细胞凋亡率与H/R组比较差异均无统计学意义。 结论:H/R心肌细胞中miR-1表达增加、凋亡水平升高，且miR-1可加剧心肌细胞凋亡。

[目的]基于单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)揭示牛肌源性细胞分化中的基因表达谱变化,并探究介导细胞间通讯的配体-受体互作机制,为构建成肌分化的动态调控网络奠定基础.[方法]利用Seurat、ClusterProfiler、STRING、Cytoscape、CellChatDB和Monocle2 等数据库或软件,对NCBI-GEO公共数据库中牛肌源性细胞单细胞转录组测序的原始数据进行了深入分析,包括细胞分群鉴定及差异基因表达谱、相关性、GO富集、PPI、细胞间通讯和拟时序分析等.[结果]根据基因表达相关性及标志性基因共鉴定出 4 个具有独特转录特征的细胞群Myoblasts、Myocytes、Fibroblasts和FAPs,通过Myoblasts亚群的基因表达谱比较及拟时序分化轨迹分析发现,各亚群之间异质性很强,其中Myoblasts_1 为分化轨迹起点,Myoblasts_0和 3 处于分化早期阶段,而Myoblasts_2 是肌肉特征表现最为明显的亚群,可能是临近形成Myocytes的后期阶段的Myoblasts;Myoblasts_2 和Myocytes差异基因富集的肌肉相关GO term存在差异,各基因间存在复杂的蛋白互作关系;Myoblasts_0-5、Myocytes、Fibroblasts和FAPs同型或异型细胞间的通讯机制,涉及到PTN-NCL、IGF2-IGF2R和ANGPTL2-(ITGA5+ITGB1)等多种不同的配体-受体作用.[结论]肌源性细胞在分化过程中存在不断变化的基因表达谱和细胞间通讯,反映了复杂的动态异质性及分子调控机制.

目的 基于文献挖掘探讨紫癜性肾炎动物模型的造模特点,为制备规范化的紫癜性肾炎动物模型提供参考.方法 通过计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed中英文数据库中相关研究文献,获取近 20 年紫癜性肾炎动物实验文献,将实验动物种类、造模方法、给药剂量、给药周期、成模标准及检测指标进行人工筛选,应用Microsoft Excel 2021 软件建立数据库并进行统计分析,运用SPSS Modeler 18.0 对高频指标进行关联规则分析并运用Cytoscape 3.6.1 软件对关联网络图进行可视化升级.结果 归纳总结符合纳入标准的 106 篇文献,建立紫癜性肾炎动物模型多选用SD大鼠和KM小鼠,造模方式多选用药源性诱导,造模药物以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)+脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)+蓖麻油、卵白蛋白(ovalbumin,OVA)+弗氏完全佐剂、麦胶蛋白+印度墨水、牛血清白蛋白+葡萄糖菌肠毒素B(staphylococcus enterotoxin B,SEB)复刻紫癜性肾炎吻合度较高的动物模型,周期一般在5～14 周,成模标准多选用皮肤紫癜,尿红细胞数增多,尿蛋白阳性,肾组织可见肾小球系膜增生及以免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)为主的免疫复合物沉积于小血管表示造模成功.检测指标共涉及 36 个医学指标,其中肾及尿液相关的检测指标 23 个,血液相关检测指标 9 个,其中使用频率≥10%的有 24h尿蛋白定量、白细胞介素、肾病理、尿红细胞计数、IgA及循环免疫复合物(circulation immune complex,CIC)、肌酐(creatinine,Cr)等 10 个指标,对高频指标进行聚类分析,结果表明多采用24h尿蛋白定量-白细胞介素-肾病理-尿红细胞数-IgA综合评价模型.结论 现有的紫癜性肾炎动物实验多选用SD雄性大鼠和KM雌性小鼠,造模方式多采用药源性诱导,其中瘀热证复合IgA肾病法(病证结合法)具有重复性强、成模率高的优点,可为HSPN动物实验模型选择提供参考.

目的:通过分析葡萄糖调节蛋白78(CRP78)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路研究温阳生肌膏对内质网应激(ERS)的调控,以探讨温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面修复的相关机制.方法:SD大鼠高脂饲料喂养联合链脲霉素腹腔注射后手术制备背部全层皮肤缺损建立大鼠糖尿病难愈合创面模型;实验分为正常组、模型组、温阳生肌膏组和贝复新(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶)组;正常组及模型组消毒后予以生理盐水涂抹,温阳生肌膏组及贝复新组分别以温阳生肌膏、贝复新涂抹创面,每日换药1次;处理14 d后观察创面愈合情况,计算创面愈合率;HE染色观察创面组织显微形态;Western blot法检测创面组织GRP78、CHOP和cas-pase-12含量;免疫组化法检测创面GRP78、CHOP和caspase-12表达及分布情况;透射电子显微镜观察创面内质网数量及肿胀情况;ELISA检测创面促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)含量.结果:各组相应干预14 d后检测各项指标.与正常组相比,模型组创面愈合率显著降低(P＜0.01),炎症渗出较多,肉芽组织生长情况差,GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达升高(P＜0.01),炎症因子IL-1β含量显著增加(P＜0.01);与模型组相比,温阳生肌膏组创面愈合率显著增加(P＜0.01),炎症渗出减少,肉芽组织生长良好,创面组织GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达显著降低(P＜0.01);炎症因子IL-1β含量显著降低(P＜0.01).结论:温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面愈合的作用,可能与其下调GRP78/CHOP通路,抑制过度ERS,降低创面细胞凋亡水平有关.

目的 探讨牛蒡子苷(arctiin,ARC)对人宫颈癌细胞恶性增殖的抑制作用及其可能的作用机制.方法 将不同浓度ARC作用于人宫颈癌细胞Hela,用CCK-8法检测细胞存活情况,筛选最佳抑制浓度;将对数生长期Hela细胞随机分为对照组、ARC组、ARC联合自噬抑制剂(3-MA)组.用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;用DCFH-DA检测各组细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;用透射电镜观察各组细胞自噬小体;反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶 B(pro-tein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA和蛋白表达及哺乳动物ATG6同源蛋白(mammalian ATG6 homologous protein,Beclin-1)和微管相关蛋白 1 轻链 3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,ARC组细胞ROS水平、PI3K、Akt和mTOR mRNA、PI3K、p-Akt以及p-mTOR蛋白的表达水平降低,且Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高(P＜0.05).3-MA可逆转ARC组上述指标(P＜0.05).结论 ARC对人宫颈癌细胞Hela的恶性增殖有一定的抑制作用,并能提高宫颈癌细胞自噬水平,可能是通过调节细胞ROS水平,影响ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用.