目的:本研究旨在探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及其作用机制.方法:受试动物设正常对照组、模型对照组、环黄芪醇20 mg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+IWR-1(Wnt通路抑制剂)8.2 μg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+STF-31(GLUT 1抑制剂)5.8 mg/kg组.除正常对照组外,其余大鼠经腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,剪去大鼠背部标记区域的皮肤和皮下组织建立皮肤溃疡模型.大鼠按分组灌胃给药14 d,并在给药第5、10、14 d测定大鼠创面愈合率;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量;HE染色检测创面组织的病理变化;免疫组化法检测创面组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)和内皮型一氧化氮合酶(ENOS)的表达情况;细胞划痕法检测环黄芪醇对脐静脉内皮细胞(HU-VEC)在LPS诱导的炎症状态下迁移率的影响;Western blot法检测给药第10 d的创面组织和LPS诱导后的HUVEC细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、特异性顶部盘状底板反应蛋白-3(RSPO3)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白的表达情况.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药第5、10 d时创面愈合率显著降低(P＜0.01),创面组织中ENOS的表达和血清SOD活力明显降低(P＜0.05或P＜0.01),血清MDA含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01);在给药第10 d时,β-catenin、CyclinD1和MMP2蛋白的表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇20 mg/kg组大鼠在给药第10 d时创面愈合率显著升高(P＜0.01),在给药第5、10 d时血清中SOD活力和创面组织中ENOS的蛋白表达显著升高(P＜0.01),β-catenin、cyclinD1和MMP2蛋白的表达明显上调(P＜0.05或P＜0.01).与空白对照组比较,模型对照组细胞的迁移率明显降低(P＜0.05或P＜0.01),CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇25 μg/mL组细胞的迁移率明显升高(P＜0.05或P＜0.01),CyclinD1和MMP9蛋白的表达显著上调(P＜0.01)o结论:环黄芪醇能促进糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠的创面愈合,其作用机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的激活.

目的 本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白 3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名 Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤.方法 采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定 Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列 G 蛋白偶联受体 5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法 以及免疫荧光染色方法 测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5 的RNA干扰实验以确定Rspo3 是否通过作用于Lgr5 上调Ncad表达.结果 在损伤小鼠肝组织中,Rspo3 及其受体Lgr5 显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3 及Lgr5 表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3 处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降.结论 在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤.

目的 探讨特异性顶部盘状底板反应蛋白3(RSPO3)在结直肠腺癌中的表达.方法 取30例结直肠腺瘤组织及瘤旁5cm处正常组织、30例结直肠腺癌组织及癌旁5cm处正常组织.蛋白质印迹法(Western blot)检测RSPO3、β-catenin、Bcl-2相关X蛋白(BAX)的相对表达量.免疫组化法检测RSPO3、BAX、β-catenin蛋白的表达情况.Spearman相关性分析法分析RSPO3的表达与β-catenin、BAX表达的相关性.结果 结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺癌癌旁正常组织,结直肠腺瘤组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺瘤瘤旁正常组织,结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).结直肠腺癌组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺癌癌旁正常组织,结直肠腺瘤组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺瘤瘤旁正常组织,结直肠腺癌组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).结直肠腺癌组织、结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织中RSPO3、β-catenin、BAX蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin蛋白高表达率均高于结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织,BAX蛋白高表达率低于结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关分析结果显示,结直肠腺癌组织中RSPO3的表达与β-catenin的表达呈正相关(r=0.936,P＜0.05),RSPO3的表达与BAX的表达无相关性(P＞0.05).结论 RSPO3在结直肠腺癌组织中高表达,可能作为结直肠腺癌临床治疗的潜在靶点.

目的 筛选特异性顶部盘状底板反应蛋白2(RSPO2)在人肝星状细胞株LX-2中过表达后的差异表达蛋白,并进行差异表达蛋白的生物学功能分析.方法 通过分子生物学手段构建RSPO2过表达载体并转染进人肝星状细胞,利用RT-PCR验证RSPO2的过表达状态,细胞划痕实验观察过表达RSPO2肝星状细胞的生长及迁移能力.通过液相色谱—串联质谱(LC-MS/MS)技术检测RSPO2过表达人肝星状细胞和正常人肝星状细胞的差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析.结果 通过RT-PCR验证,在人肝星状细胞株LX-2中成功过表达了RSPO2蛋白;通过LC-MS/MS技术对比RSPO2过表达肝星状细胞和正常肝星状细胞,获得候选差异表达蛋白共计233个,其中115个蛋白在RSPO2过表达细胞中表达下调,118个表达上调,这些差异表达蛋白参与了很多与细胞转录、复制、增殖相关的信号通路.结论 RSPO2过表达LX-2细胞差异表达蛋白共计233个,其中115个蛋白在RSPO2过表达细胞中表达下调,118个表达上调,这些差异表达蛋白大多参与到RNA的转录与翻译过程.