目的 从红豆杉内生木霉属真菌MPT-009的次生代谢产物中发现具有抗菌活性的单体化合物.方法 采用硅胶、ODS、Sephadex-LH20柱层析和半制备高效液相等方法进行分离,利用高分辨率质谱、NMR波谱数据和电子圆二色谱(ECD)计算等方法确定化合物结构,通过二倍稀释法评价化合物对8种临床耐药性细菌和7种植物病原真菌的抗菌活性.结果 从木霉属真菌MPT-009大米发酵产物中共分离得到了一个新的聚酮化合物trichoketide F(1)和6个已知化合物10-deacetylkoningiopisin D(2)、koninginin A(3)、koninginin B(4)、koninginin D(5)、koninginin E(6)、isoharziandione(7).化合物 1 对马铃薯黄萎病菌、水稻纹枯病菌、油菜菌核菌、棉花枯萎病菌、草莓黑斑病菌、玉米小斑病菌显示一定的抑制活性,MIC值为12.5～50 μg/mL.结论 本文对红豆杉内生真菌Trichoderma sp.的次生代谢产物进行了深入研究,分离得到1个新化合物,丰富了木霉属真菌代谢产物,且该化合物对油菜菌核病菌具有较好的抑制活性,MIC值为12.5 μg/mL.

选取具有代表性的革兰氏阴性细菌大肠杆菌、革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌及小麦、棉花、玉米、水稻等病害病原菌,通过比较各段萃取物对8种真菌的抑菌谱和对3种细菌抑菌圈效果差异,发现冬瓜皮提取物乙酸乙酯萃取部分抑菌效果最好.对抑菌活性最佳的乙酸乙酯粗提物,进一步做最小抑菌浓度实验、耐热及紫外辐照研究,结果表明,乙酸乙酯部位粗提物的抑菌谱广且抑菌活性强,对小麦赤霉病原菌、小麦纹枯病菌原菌、棉花枯萎病菌的生长抑制率达到80％以上,对玉米大斑病菌生长抑制率达93.8％.温度和紫外辐照对冬瓜皮提取物乙酸乙酯部位粗提物的抑菌作用有一定影响,121℃加热5 min使抑菌效果降低42％,75℃加热30 min使抑菌效果降低30％.

由玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)引起的玉米小斑病是玉米生产上的重要病害,发病严重年份给玉米高产、稳产带来巨大损失.从安徽省玉米产区采集的小斑病病叶上分离获得30个小斑病菌菌株.研究了30个菌株的菌丝生长速率、分生孢子产生量、孢子大小等生物学特性.结果显示,不同菌株在分生孢子产生量、菌丝生长速率、孢子大小等方面存在显著性差异.菌株生长速率最大的菌株是FY1,最小的菌株是BB2;分生孢子产生量最大的菌株是BB7,最低的菌株是BB2;分生孢子长度最大的是FY1菌株,最小的是BB2菌株;分生孢子宽度最大的是FY3菌株,最小的是BB1菌株;此外,不同菌株的菌落大小及颜色也存在明显差异.综合分析菌丝生长速率、菌落颜色及分生孢子产生量的关系发现,菌丝生长速率与分生孢子产生量不呈正相关关系.

茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌.为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选出3株能稳定分泌抗茄科劳尔氏菌株1.76的单克隆杂交瘤细胞株1C1、1B3和9D7.然后利用小鼠体内诱生腹水,1C1、1B3和9D7效价分别为1︰1024000、1︰64000、1︰256000.采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,经SDS-PAGE鉴定显示纯化后的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAb)纯度较高.纯化后单克隆抗体(2 mg/mL)效价分别为1︰17529、1︰35819、1︰50000,抗体亚型均为IgG1.对3株抗体进行特异性检测结果显示,1C1和9D7均不能与RS-5结合,1B3不能结合1.74和RS-5.此外,检测结果还表明3株单克隆抗体与桑肠杆菌JX-6、苏云金芽胞杆菌SYJ及实验室现有11株燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种、燕麦嗜酸菌西瓜亚种、玉米细菌性条斑菌、嗜酸菌魔芋亚种,梨火疫病菌QB0809、XL-4,玉米细菌性枯萎病菌QB0241、QB0242,水稻细菌性谷枯病菌QB0017、QB0753、QB0755均无交叉情况.此次茄科劳尔氏菌抗体的制备,为后期青枯病菌的快速检测提供参考.

为研究土壤链霉菌Streptomyces sp.KIB-K1次级代谢产物成分.实验采用硅胶、凝胶及半制备高效液相等分离方法,从该菌株发酵液中共分离得到7个大环内酯类化合物,通过解析NMR、MS等波谱数据,化合物的结构鉴定为aldgamycin P(1)、aldgamycin E(2)、aldgamycin J (3)、aldgamycin K(4)、aldgamycin L(5)、GERI-155(6)和chalcomycin (7),其中化合物1为新化合物.抗菌实验结果显示,化合物1～7对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有显著的抑制作用.其中,化合物1对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)为7.81 μg/mL,化合物2和7对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为0.49和0.98 μg/mL,高于阳性对照卡那霉素的MIC值(3.91 μg/mL).化合物1～7对于被测试的两株真菌小麦赤霉病菌和玉米小斑病菌没有表现出抑制作用.

研究了一株水生植物水葫芦内生拟枝孢镰刀菌Fusarium sporotrichioides SC1608大米发酵物的抗真菌活性次生代谢产物,从中共分离获得6个化合物,经高分辨质谱、三重四极杆质谱和核磁共振谱分析,分别鉴定为4个鞘糖脂类化合物:asperamide B(1)、asperamide D(2)、asperamide E(3)、cerebrosides A(4),以及2个环酯肽类化合物acuminatum A(5)和acuminatum B(6),其中化合物2和化合物3是新的鞘糖脂类化合物.通过滤纸片琼脂扩散法评价了单体化合物的抗真菌活性,证实化合物5和6对柑橘绿霉和玉米小斑病菌均具有较强的体外抑制活性.研究结果初步揭示了F.sporotrichioides SC1608发酵物的抗真菌活性物质基础,丰富了拟枝孢镰刀菌次生代谢产物的化学多样性.

[背景]植物内生细菌既能抑制病原菌对植物的侵染,也具有促生作用.分离具有拮抗和促生活性的内生细菌可为开发微生物菌肥提供理论依据.[目的]筛选内生细菌中的优势拮抗、促生菌种资源.[方法]以地锦草为材料,采用4种分离培养基分离该植物内生细菌,通过形态特征以及16S rRNA基因序列分析,鉴定内生细菌的分类归属.采用平板对峙法,测定内生细菌对棉花立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米小斑病菌(Bipolaris maytfs)的拮抗活性.通过固氮、解磷、产吲哚乙酸(Indole Acetic Acid,IAA)、产铁载体能力等指标初步检测地锦草内生细菌的促生活性.[结果]共分离到133株内生细菌,分属于4门5纲8目13科25属,其中变形菌门(Proteobacteria)为优势门(52.63％),优势属为芽孢杆菌属(Bacillus),占15.79％.发现有8株菌相似性小于98.65％,可能为潜在新物种.拮抗活性结果表明,22株菌有不同程度的抑菌作用,其中菌株DHL56、DHN17、DHP3、DHP8对这3种病原菌都有抑制作用,均为芽孢杆菌属.菌株DHP8抑制作用最强,对棉花立枯丝核菌、小麦赤霉病菌抑制率分别为73.80％、71.25％,对玉米小斑病菌抑制率为61.70％.促生潜力结果表明,76株菌具有固氮能力;19株菌具有解磷能力;37株菌能产吲哚乙酸,菌株DHL55产吲哚乙酸的量达到105.67 mg/L;7株菌能合成铁载体.其中有9株菌同时有固氮、解磷、产吲哚乙酸能力;菌株DHP8具有固氮、解磷、合成铁载体能力.DHP8不仅具有一定促生潜力,还对棉花立枯丝核菌、小麦赤霉病菌、玉米小斑病菌有明显的拮抗作用,需进一步研究.[结论]地锦草内生细菌种类丰富,获得多株具有优良拮抗和促生活性的菌株,为进一步开发微生物农药及菌肥资源提供新的菌株材料.

玉米小斑病是我国玉米生产上的重要病害之一,每年造成玉米大幅减产.真菌病毒能够在真菌体内进行复制和繁殖,可以作为生物防治的潜在资源.为了明确河北省玉米小斑病菌玉米离蠕孢dsRNA病毒的多样性及生物学特性,为玉米小斑病的防控提供潜在生防资源,本研究采用单孢分离的方法分离纯化玉米小斑病菌150株,通过dsRNA提取及凝胶检测的方法检测带毒率,从分离的150株玉米离蠕孢中获得10株带有dsRNA病毒的菌株.通过电镜观察及RT-PCR方法验证发现5个菌株带有Bipolaris maydis partitivirus病毒.通过原生质体脱毒的方法获得无毒菌株后比较带毒菌株的生物学特性及胞外酶的分泌.结果 发现Bipolaris maydis partitivirus病毒降低了玉米离蠕孢的生长速度和产孢量,显著降低其致病力及淀粉酶的分泌.本研究明确了河北省玉米离蠕孢dsRNA病毒的多样性,明确了携带Bipolaris maydis partitivirus病毒菌株的生物学特性,为玉米小斑病的防控提供了研究基础.

植物内生菌具有增强宿主植物抵抗生物和非生物胁迫的能力,也具有增强宿主植物对磷、钾等矿质元素的分解吸收,进而促进植物的生长.本文采用平板对峙法检测亳菊内生菌BN7对玉米弯孢病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、串珠镰刀病菌、瓜炭疽病菌、茶叶轮斑病菌等6种植物病原菌的拮抗作用;测定菌株BN7的解磷、解钾、产生长素、降解纤维素能力和对DPPH的清除能力;并根据菌株形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析对菌株BN7进行鉴定.结果 表明:亳菊内生菌BN7对小麦赤霉菌等6种植物病原菌均有抑制作用;菌株BN7使有机磷和无机磷发酵液中可溶性磷分别增加了108.38和68.71 mg/L,使可溶性钾增加了32.03 mg/L,IAA的分泌量高达164.39 mg/L;培养3天菌株BN7羧甲基纤维素酶和滤纸酶的活力达到最高,分别为168.78和79.87 U/mL;培养7天的上清液对DPPH清除率可达82.13％;根据形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,菌株BN7初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).因此,亳菊内生菌BN7是一株具有广谱抗真菌、解磷、解钾、产IAA和降解纤维素能力的巨大芽孢杆菌.

[背景]武夷菌素高产基因工程菌株Streptomyce albulus OoWysR具有明显的抑菌效果.[目的]明确S.albulusOoWysR的活性成分.[方法]采用柱层析法,利用大孔吸附树脂、离子交换树脂和高效液相色谱等对S.albulus OoWysR的活性成分进行分离纯化,经高分辨率电喷雾电离质谱(high-resolution electrospray ionization mass spectrometry,HR-ESI-MS)和核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)等波谱技术对化合物化学结构进行鉴定,并通过生长速率法测定化合物的生物活性.[结果]从S.albulus OoWysR中分离鉴定出4个化合物,分别为对羟基苯甲酸(1)、吡咯-2-羧酸(2)、对羟基苯乙醇(3)和云南霉素(4).化合物1对玉米弯孢病菌、番茄叶霉病菌、玉米小斑病菌和烟草赤星病菌具有一定的抑制作用;化合物2对番茄灰霉病菌、大豆菌核病菌、苹果腐烂病菌、玉米小斑病菌、小麦赤霉病菌、稻瘟病菌和烟草赤星病菌具有一定的抑制作用;化合物3对番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌、玉米小斑病菌和黄瓜炭疽病菌具有一定的抑制作用.[结论]S.albulus OoWysR的活性成分除武夷菌素外还包括对羟基苯甲酸、吡咯-2-羧酸、对羟基苯乙醇和云南霉素.本研究结果为进一步开发与利用该菌株提供了理论依据.