目的 制备与临床发病机制相关且重现性好的缺血性心动过缓模型.方法 雄性SD大鼠18只,随机分为左冠状动脉结扎组、右冠状动脉结扎组和假手术组,每组6只.麻醉开胸,心电图监护下结扎左、右冠状动脉分支,分别在术后第5天(d5),d10和d15记录Ⅱ导联心电图,观察心电图和心率的变化;d16测量大鼠血流动力学参数,评价大鼠心功能;大鼠处死后,剪取含窦房结的右心房组织,HE和Masson染色观察右心房组织形态改变;Western蛋白印迹法测定右心房钠钙交换蛋白1(NCX1)和超极化激活环核苷酸门控阳离子通道亚型4(HCN4)蛋白的表达.结果 与假手术组相比,结扎左、右冠状动脉大鼠心电图ST段均抬高(P＜0.01),右冠状动脉结扎上升幅度较左冠状动脉结扎小(P＜0.01);右冠状动脉结扎大鼠术后心率持续降低,d10后心率低于假手术对照组(P＜0.05);左冠状动脉结扎大鼠术后心率呈升高回落趋势,d5心率高于假手术对照组(P＜0.05),然后回落,d15回落到假手术组水平;左冠状动脉结扎后15d,大鼠左心室内压最大下降速率明显下降(P＜0.01),左心室终末舒张压显著上升(P＜0.01);右冠状动脉结扎术对血流动力学指标均无明显影响.组织形态检查结果显示,右冠状动脉结扎引起右心房炎性浸润和纤维化更为明显(P＜0.01);Western蛋白印迹结果显示,右心房组织(包含窦房结)NCX1和HCN4表达显著降低(P＜0.05).结论 大鼠右冠状动脉结扎,引起右心房缺血性改变,成功制备了缺血性心动过缓模型.

目的 研究超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4种亚型(HCN1～4)在大鼠脊髓背角的分布特点,以及其在部分坐骨神经结扎术(PSNL)所致的慢性神经病理性疼痛动物模型中的表达变化.方法 首先,选取SD大鼠(150 ～250 g)制作L4-5段脊髓横切片,用免疫组织化学方法观察HCN1 ～4在大鼠脊髓背角的分布特点.其次,采用荧光定量PCR技术,检测大鼠L4-5段脊髓背角组织HCN1 ～4 mRNA的表达特点.另取同龄大鼠,将其随机分为模型组(PSNL组)和假手术组(sham组),每组4只.测定两组大鼠术前,术后1、3、7、10及14d术侧机械痛阈值(PWT),并于术后14 d取其脊髓背角组织检测HCN1 ～4 mRNA的表达变化.结果 免疫组织化学结果显示,HCN1 ～4通道蛋白在脊髓背角均有分布,但在Ⅰ～Ⅱ层分布最多,Ⅲ～Ⅵ层分布较少.荧光定量PCR结果显示,生理情况下脊髓背角HCN2 mRNA的表达量最高,其次是HCN1,而HCN3和HCN4表达量较少.与sham组相比,PSNL组PWT显著降低,且术后第14天HCN2 mRNA的表达量显著增加(P＜0.05),而HCN1、HCN3及HCN4表达量的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HCN1～4在正常大鼠脊髓背角具有特异性表达,但仅HCN2 mRNA在PSNL神经病理性疼痛模型后显著增加.

目的:探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels,HCN通道)4种亚型在大鼠脊髓背角浅层的表达与分布特点.方法:选取3～5周龄SD大鼠,雌雄不拘,制作L4～L5段脊髓横切片,应用免疫组织化学技术及激光共聚焦成像技术,观察HCN通道的4种亚型在脊髓背角浅层神经元、胶质细胞及神经元亚细胞结构中的分布.结果:HCN通道不同亚型在正常SD大鼠脊髓背角中的表达和分布具有特异性:(1)HCN1主要与神经元标志物[神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)]和星形胶质细胞标志物[胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)]共存,HCN2和HCN3主要与NeuN共定位;(2)HCN2主要与肽能初级传入神经末梢标志物[降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)]共存, HCN4主要与非肽能初级传入神经末梢标志物[异凝集素B4(isolectin B4,IB4)]共存;(3)HCN1和HCN4主要与神经元树突标志物[微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)]共存;(4)HCN4主要与抑制性中间神经元轴突末梢标志物[囊泡γ-氨基丁酸转运体(vesicular γ-aminobutyric acid transporter,VGAT)]共存.结论:HCN1～4主要分布在大鼠脊髓背角浅层,且在神经元、胶质细胞及神经元亚细胞结构中呈特异性分布.

目的 探讨超极化激活环核苷酸门控性阳离子通道蛋白(H C N)介导的Ih电流是否参与大鼠臂旁外侧核(LPBN)神经元温度敏感性的形成.方法 选取雄性SD大鼠为实验动物,采用实时定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测6只大鼠HCN通道的主要亚型;采用免疫荧光检测其主要亚型在LPBN分布;采用全细胞脑片膜片钳电流钳技术鉴定大鼠L PBN神经元温度敏感性,然后在全细胞电压钳模式下进一步检测温度变化对不同类型LPBN神经元Ih电流的影响.结果 采用real-time qPCR技术在6只大鼠的LPBN均检测到HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA表达,其中,HCN2 mRNA表达丰度最高,HCN4 mRNA表达丰度最低.免疫荧光染色结果显示,HCN2通道在中央亚核、背亚核和外亚核3个LPBN亚核均有表达.脑片膜片钳全细胞实验显示,当膜电位为-120 mV时,温度升高引起LPBN热敏神经元Ih电流幅度增加、激活时间常数缩短、激活速度加快(n=7,P<0.05),但温度对冷敏神经元(n=5)和温度不敏感神经元(n=17)的Ih电流幅度、激活时间常数与激活速度差异无统计学意义(P>0.05).LPBN热敏神经元Ih电流激活速率的Q10值明显高于温度不敏感神经元(P<0.05),其Ih电流激活时间常数和激活速率的Q10值与放电频率温敏系数分别呈负相关和正相关.结论 Ih电流的温度依赖性激活参与了LPBN热敏神经元的温敏形成.

目的:探讨参仙升脉口服液对病态窦房结综合征(SSS)小鼠窦房结线粒体活性氧(ROS)释放的影响及其对环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4(HCN4)离子通道的调控作用,探讨参仙升脉口服液改善SSS的作用机制.方法:30只C57B6小鼠随机分为假手术组、SSS组和参仙升脉口服液治疗组(SXSM组),每组10只.通过Alzet渗透压泵泵入血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)建立SSS小鼠模型,SXSM组小鼠给予0.2 mL·d-1参仙升脉口服液灌胃,持续28 d.观察各组小鼠心电图并分析心率,HE和Masson染色观察各组小鼠窦房结组织病理形态表现,免疫荧光法检测各组小鼠窦房结组织中ROS和HCN4水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠窦房结组织中电压门控Na+通道α亚单位SCN5A、L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(CACNα1C)蛋白和电压依赖性钙通道α1G亚基蛋白(CACNα1G)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠窦房结组织中SCN5A、CACNα1C、CACNα1G和HCN4蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,SSS组小鼠心率明显降低(P<0.05),窦房结组织中细胞出现溶解坏死,未见细胞核,结缔纤维组织大量增生,窦房结组织中ROS水平升高(P<0.05),HCN4水平降低(P<0.05),SCN5A mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),CACNα1C和CACNα1G mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),HCN4蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与SSS组比较,SXSM组小鼠心率明显升高(P<0.05),窦房结组织中结缔纤维组织少量增生,细胞部分坏死溶解,ROS水平降低(P<0.05),HCN4水平升高(P<0.05),SCN5A mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),CACNα1C和CACNα1G mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),HCN4蛋白表达水平明显升高(P<0.05).结论:参仙升脉口服液能够提高心率,抑制SSS小鼠窦房结组织中ROS的释放,抑制窦房结纤维化,其机制与调控HCN4离子通道有关.

目的 观察电针对逼尿肌过度活动(detrusor overactivity,DO)大鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels,HCN)相关亚型表达水平及细胞内钙离子震荡特性的影响.方法 40只Wistar雌性大鼠随机分为对照组、模型组、电针组和药物组,每组10只.除对照组外,其余大鼠均采用环磷酰胺腹腔注射制备DO模型,电针组在模型基础上给予电针次髎和会阳,每日1次,每次20 min,连续3 d;药物组予甲磺酸伊马替尼灌胃,每日1次,连续3 d.对照组、模型组和药物组大鼠同电针组予以对照捆绑固定20 min,对照、模型和电针组同药物组予以同等体质量计量的饮用水灌胃处理,均每日1次,连续3 d.采用Western Blot和RT-PCR检测HCN1-44种亚型的表达,运用钙离子成像技术检测电针对ICCs内钙离子震荡特性的影响.结果 与对照组比较,模型组大鼠膀胱ICCs相关HCN1和HCN2的蛋白和mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,电针组和药物组HCN1和HCN2的蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05);4组HCN3、HCN4比较差异均无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,模型组大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡幅度、频率和宽度明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组和药物组膀胱ICCs内钙离子震荡频率和幅度均下降(P<0.05),而钙离子震荡宽度无明显变化(P>0.05).结论 电针可能通过抑制DO大鼠膀胱ICCs起搏通道相关HCN1和HCN2的表达,及降低ICCs内钙离子震荡的幅度和频率,达到调控DO的作用.