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大鼠右冠状动脉右缘支结扎制备心动过缓模型
编辑人员丨2023/8/6
目的 制备与临床发病机制相关且重现性好的缺血性心动过缓模型.方法 雄性SD大鼠18只,随机分为左冠状动脉结扎组、右冠状动脉结扎组和假手术组,每组6只.麻醉开胸,心电图监护下结扎左、右冠状动脉分支,分别在术后第5天(d5),d10和d15记录Ⅱ导联心电图,观察心电图和心率的变化;d16测量大鼠血流动力学参数,评价大鼠心功能;大鼠处死后,剪取含窦房结的右心房组织,HE和Masson染色观察右心房组织形态改变;Western蛋白印迹法测定右心房钠钙交换蛋白1(NCX1)和超极化激活环核苷酸门控阳离子通道亚型4(HCN4)蛋白的表达.结果 与假手术组相比,结扎左、右冠状动脉大鼠心电图ST段均抬高(P<0.01),右冠状动脉结扎上升幅度较左冠状动脉结扎小(P<0.01);右冠状动脉结扎大鼠术后心率持续降低,d10后心率低于假手术对照组(P<0.05);左冠状动脉结扎大鼠术后心率呈升高回落趋势,d5心率高于假手术对照组(P<0.05),然后回落,d15回落到假手术组水平;左冠状动脉结扎后15d,大鼠左心室内压最大下降速率明显下降(P<0.01),左心室终末舒张压显著上升(P<0.01);右冠状动脉结扎术对血流动力学指标均无明显影响.组织形态检查结果显示,右冠状动脉结扎引起右心房炎性浸润和纤维化更为明显(P<0.01);Western蛋白印迹结果显示,右心房组织(包含窦房结)NCX1和HCN4表达显著降低(P<0.05).结论 大鼠右冠状动脉结扎,引起右心房缺血性改变,成功制备了缺血性心动过缓模型.
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编辑人员丨2023/8/6
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大鼠脊髓背角HCN通道的分布及在部分坐骨神经结扎术后的表达变化
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4种亚型(HCN1~4)在大鼠脊髓背角的分布特点,以及其在部分坐骨神经结扎术(PSNL)所致的慢性神经病理性疼痛动物模型中的表达变化.方法 首先,选取SD大鼠(150 ~250 g)制作L4-5段脊髓横切片,用免疫组织化学方法观察HCN1 ~4在大鼠脊髓背角的分布特点.其次,采用荧光定量PCR技术,检测大鼠L4-5段脊髓背角组织HCN1 ~4 mRNA的表达特点.另取同龄大鼠,将其随机分为模型组(PSNL组)和假手术组(sham组),每组4只.测定两组大鼠术前,术后1、3、7、10及14d术侧机械痛阈值(PWT),并于术后14 d取其脊髓背角组织检测HCN1 ~4 mRNA的表达变化.结果 免疫组织化学结果显示,HCN1 ~4通道蛋白在脊髓背角均有分布,但在Ⅰ~Ⅱ层分布最多,Ⅲ~Ⅵ层分布较少.荧光定量PCR结果显示,生理情况下脊髓背角HCN2 mRNA的表达量最高,其次是HCN1,而HCN3和HCN4表达量较少.与sham组相比,PSNL组PWT显著降低,且术后第14天HCN2 mRNA的表达量显著增加(P<0.05),而HCN1、HCN3及HCN4表达量的变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 HCN1~4在正常大鼠脊髓背角具有特异性表达,但仅HCN2 mRNA在PSNL神经病理性疼痛模型后显著增加.
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编辑人员丨2023/8/6
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超极化激活环核苷酸门控阳离子通道亚型在大鼠脊髓背角浅层的特异性表达
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels,HCN通道)4种亚型在大鼠脊髓背角浅层的表达与分布特点.方法:选取3~5周龄SD大鼠,雌雄不拘,制作L4~L5段脊髓横切片,应用免疫组织化学技术及激光共聚焦成像技术,观察HCN通道的4种亚型在脊髓背角浅层神经元、胶质细胞及神经元亚细胞结构中的分布.结果:HCN通道不同亚型在正常SD大鼠脊髓背角中的表达和分布具有特异性:(1)HCN1主要与神经元标志物[神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)]和星形胶质细胞标志物[胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)]共存,HCN2和HCN3主要与NeuN共定位;(2)HCN2主要与肽能初级传入神经末梢标志物[降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)]共存, HCN4主要与非肽能初级传入神经末梢标志物[异凝集素B4(isolectin B4,IB4)]共存;(3)HCN1和HCN4主要与神经元树突标志物[微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)]共存;(4)HCN4主要与抑制性中间神经元轴突末梢标志物[囊泡γ-氨基丁酸转运体(vesicular γ-aminobutyric acid transporter,VGAT)]共存.结论:HCN1~4主要分布在大鼠脊髓背角浅层,且在神经元、胶质细胞及神经元亚细胞结构中呈特异性分布.
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编辑人员丨2023/8/5
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Ih电流在大鼠臂旁外侧核热敏神经元温敏形成中的作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨超极化激活环核苷酸门控性阳离子通道蛋白(H C N)介导的Ih电流是否参与大鼠臂旁外侧核(LPBN)神经元温度敏感性的形成.方法 选取雄性SD大鼠为实验动物,采用实时定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测6只大鼠HCN通道的主要亚型;采用免疫荧光检测其主要亚型在LPBN分布;采用全细胞脑片膜片钳电流钳技术鉴定大鼠L PBN神经元温度敏感性,然后在全细胞电压钳模式下进一步检测温度变化对不同类型LPBN神经元Ih电流的影响.结果 采用real-time qPCR技术在6只大鼠的LPBN均检测到HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA表达,其中,HCN2 mRNA表达丰度最高,HCN4 mRNA表达丰度最低.免疫荧光染色结果显示,HCN2通道在中央亚核、背亚核和外亚核3个LPBN亚核均有表达.脑片膜片钳全细胞实验显示,当膜电位为-120 mV时,温度升高引起LPBN热敏神经元Ih电流幅度增加、激活时间常数缩短、激活速度加快(n=7,P<0.05),但温度对冷敏神经元(n=5)和温度不敏感神经元(n=17)的Ih电流幅度、激活时间常数与激活速度差异无统计学意义(P>0.05).LPBN热敏神经元Ih电流激活速率的Q10值明显高于温度不敏感神经元(P<0.05),其Ih电流激活时间常数和激活速率的Q10值与放电频率温敏系数分别呈负相关和正相关.结论 Ih电流的温度依赖性激活参与了LPBN热敏神经元的温敏形成.
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编辑人员丨2023/8/5
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参仙升脉口服液对病态窦房结综合征小鼠ROS表达的影响和对HCN4离子通道的调控作用
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨参仙升脉口服液对病态窦房结综合征(SSS)小鼠窦房结线粒体活性氧(ROS)释放的影响及其对环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4(HCN4)离子通道的调控作用,探讨参仙升脉口服液改善SSS的作用机制.方法:30只C57B6小鼠随机分为假手术组、SSS组和参仙升脉口服液治疗组(SXSM组),每组10只.通过Alzet渗透压泵泵入血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)建立SSS小鼠模型,SXSM组小鼠给予0.2 mL·d-1参仙升脉口服液灌胃,持续28 d.观察各组小鼠心电图并分析心率,HE和Masson染色观察各组小鼠窦房结组织病理形态表现,免疫荧光法检测各组小鼠窦房结组织中ROS和HCN4水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠窦房结组织中电压门控Na+通道α亚单位SCN5A、L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(CACNα1C)蛋白和电压依赖性钙通道α1G亚基蛋白(CACNα1G)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠窦房结组织中SCN5A、CACNα1C、CACNα1G和HCN4蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,SSS组小鼠心率明显降低(P<0.05),窦房结组织中细胞出现溶解坏死,未见细胞核,结缔纤维组织大量增生,窦房结组织中ROS水平升高(P<0.05),HCN4水平降低(P<0.05),SCN5A mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),CACNα1C和CACNα1G mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),HCN4蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与SSS组比较,SXSM组小鼠心率明显升高(P<0.05),窦房结组织中结缔纤维组织少量增生,细胞部分坏死溶解,ROS水平降低(P<0.05),HCN4水平升高(P<0.05),SCN5A mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),CACNα1C和CACNα1G mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),HCN4蛋白表达水平明显升高(P<0.05).结论:参仙升脉口服液能够提高心率,抑制SSS小鼠窦房结组织中ROS的释放,抑制窦房结纤维化,其机制与调控HCN4离子通道有关.
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编辑人员丨2023/8/5
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电针对逼尿肌过度活动大鼠膀胱ICCs相关HCN亚型及钙离子震荡特性的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察电针对逼尿肌过度活动(detrusor overactivity,DO)大鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels,HCN)相关亚型表达水平及细胞内钙离子震荡特性的影响.方法 40只Wistar雌性大鼠随机分为对照组、模型组、电针组和药物组,每组10只.除对照组外,其余大鼠均采用环磷酰胺腹腔注射制备DO模型,电针组在模型基础上给予电针次髎和会阳,每日1次,每次20 min,连续3 d;药物组予甲磺酸伊马替尼灌胃,每日1次,连续3 d.对照组、模型组和药物组大鼠同电针组予以对照捆绑固定20 min,对照、模型和电针组同药物组予以同等体质量计量的饮用水灌胃处理,均每日1次,连续3 d.采用Western Blot和RT-PCR检测HCN1-44种亚型的表达,运用钙离子成像技术检测电针对ICCs内钙离子震荡特性的影响.结果 与对照组比较,模型组大鼠膀胱ICCs相关HCN1和HCN2的蛋白和mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,电针组和药物组HCN1和HCN2的蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05);4组HCN3、HCN4比较差异均无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,模型组大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡幅度、频率和宽度明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组和药物组膀胱ICCs内钙离子震荡频率和幅度均下降(P<0.05),而钙离子震荡宽度无明显变化(P>0.05).结论 电针可能通过抑制DO大鼠膀胱ICCs起搏通道相关HCN1和HCN2的表达,及降低ICCs内钙离子震荡的幅度和频率,达到调控DO的作用.
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编辑人员丨2023/8/5
