该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制.实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和An-nexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡,Western blot(WB)检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶(caspase)-9、caspase-3的表达水平,免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平.实验结果显示SCL的耐药因子是0.69,对应地,阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36;DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂;Annexin-V/Pi凋亡双染显示,在中、高剂量SCL的作用下,耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64％、50.29％;WB检测结果提示:SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平,明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平,进一步研究发现,SCL能够显著促进Keap1的表达,并明显抑制Nrf2和HO-1的表达,同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平;相应地,流式检测细胞内ROS水平明显升高.综上所述,瑞香狼毒能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖,引起细胞凋亡,其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路,导致耐药细胞内ROS累积,并增加凋亡相关蛋白的表达有关.

目的 探究红景天Rhodiola rosea、珠芽蓼Polygonum viviparum、瑞香狼毒Stellera chamaejasme 3种青藏高原常见药用植物根际土壤代谢物的组成、差异代谢物特性及主要代谢通路.方法 以青藏高原高寒草地的红景天、珠芽蓼、瑞香狼毒3种药用植物的根际土壤为实验材料,采用高分离度液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS)的非靶向代谢组学方法进行检测分析.结果 3种药用植物的根际土壤样本间均没有重叠,组间差异较为明显.根际土壤样本显著差异代谢物结果显示,珠芽蓼与红景天和瑞香狼毒的显著差异代谢物均比较多,而红景天和瑞香狼毒之间显著差异代谢物相对较少.ATP结合盒转运体(ABC transporters)、D-谷氨酰胺(D-glutamine)和D-谷氨酸(D-glutamate)代谢、嘌呤代谢(purine metabolism)等3种代谢通路在3种药用植物根际土壤代谢通路富集中均表现出显著性最高.结论 3种药用植物根际土壤样本的标志代谢物与其主要药效活性成分密切相关,珠芽蓼次生代谢产物的代谢合成途径比瑞香狼毒和红景天更多样化.3种药用植物根际土壤代谢途径是生物合成活性次生代谢产物、适应高寒生态环境的重要基础.

ent-柯巴基焦磷酸合酶(ent-copalyl diphosphate synthase,CPS)与ent-贝壳杉烯合酶(ent-kaurene synthase,KS)的连续催化是植物以香叶基香叶基焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphate,GGPP)为底物开启赤霉素生物合成路径的关键步骤.该研究通过分析与挖掘瑞香狼毒的转录组数据,成功克隆得到赤霉素途径的 2 个关键二萜合酶基因SchCPS和SchKS.二者完整开放阅读框分别为 2595、1701 bp,编码864、566 个氨基酸残基,生物信息学分析预测其相对分子质量分别为97.9、64.6 kDa,理论等电点为 5.61、6.12,均为亲水性蛋白.序列比对及系统发育树显示,SchCPS蛋白含有CPS基因家族保守的LHS、PNV及DxDD基序,归类于TPS-c亚家族;SchKS蛋白含有KS基因家族保守的DDxxD、NSE/DTE和PIx基序,归类于TPS-e亚家族.功能验证结果表明,SchCPS可催化GGPP质子化并环化成ent-CPP,SchKS则作用于ent-CPP去磷酸化并再次环化生成贝壳杉烯.该文首次从瑞香狼毒中克隆获得SchCPS与SchKS全长基因,并完成功能验证,不仅丰富了现有的CPS和KS基因库,也为瑞香狼毒中更多活性成分基因的克隆与生物合成途径解析奠定了基础.

目的 研究天山假狼毒花Stelleropsistianschanica(Pobed.)体积分数95％乙醇提取物中的化学成分.方法 用硅胶、凝胶等柱色谱以及半制备高效液相色谱方法进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等波谱技术并结合理化性质对其结构进行鉴定.结果 从天山假狼毒花石油醚部位中分离出11个化合物,分别鉴定为3-(4-hydroxy-3-methoxy)-phenyl 1,2-propandiol(1)、(2S)-4-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-butanol(2)、香草醇(3)、(+)-(7S,8S)-3-methoxy-3',7-expoxy-8,4'-neolignan-4,9,9'-triol(4)、西瑞香素(5)、benzyl O-b-D-glucopyranoside(6)、squalene(7)、邻苯二甲酸二丁酯(8)、linoleic acid(9)、2,3-dihydroxypropyl de-canoate(10)、(+)-kusunokinin(11).结论 除化合物5、8和化合物11外,其余化合物均是首次从假狼毒属中分离得到.

目的 研究采自云南省元阳县长梗瑞香Daphne pedunculata中的黄酮类化学成分.方法 采用正相、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备液相色谱等色谱方法进行分离纯化,运用核磁共振和质谱等波谱方法鉴定化合物的结构.结果 从长梗瑞香95％乙醇提取物中分离得到21个黄酮化合物,其中双黄酮化合物12个.分别鉴定为异狼毒素(1)、新狼毒素A(2)、新狼毒素B(3)、荛花醇B(4)、毛瑞香素D2(5)、荛花醇 A(6)、genikwanol A(7)、瑞香黄烷 B(8)、wikstaiwanone B(9)、wikstaiwanone A(10)、瑞香黄烷 G(11)、芹菜素(12)、木犀草素(13)、芫花素(14)、紫云英苷(15)、芹菜素-7-O-葡萄糖苷(16)、山柰酚(17)、木犀草苷(18)、刺槐素(19)、瑞香黄烷F(20)、5-甲氧基-芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(21).结论 从长梗瑞香95％乙醇提取物中分离得到21个黄酮化合物中,除化合物12～14外,其余均为首次从长梗瑞香中分离得到.该研究结果丰富了长梗瑞香植物黄酮的化学多样性,并为其深入研究及利用提供重要的基础和科学依据.

探讨瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.,SCL)抑制肝癌细胞增殖的效应和机制,为原发性肝细胞癌的病理机制研究和临床治疗提供依据.SCL含药血清处理HepG2215 细胞 24 h,CCK-8 法分析肝癌HepG2215 细胞增殖活力.Western blot分析肝癌HepG2215 细胞中Yes关联蛋白 1(yes-associated protein 1,YAP1)表达的情况;应用N-亚硝基二乙胺(diethylnirtosamine,DEN)/组成型雄甾烷受体激动剂(3,5-dichloro-2-[4-(3,5-dichloropyridin-2-yl)oxyphenoxy]pyridine,TCPOBOP)诱导肝细胞特异性Yap1 敲除(Yap1LKO)小鼠和Yap1flox/flox小鼠构建肝原位癌模型;SCL水煎液灌胃 7 d,取出肝脏,观察肝脏肿瘤大体形态;H&E染色观察肝脏肿瘤组织病理形态,Western blot分析肝脏肿瘤组织中YAP1的表达.细胞试验结果表明,SCL抑制HepG2215细胞的增殖,并降低了YAP1 的表达水平.动物试验结果表明,SCL能减小Yap1flox/flox和Yap1LKO小鼠肝原位癌肿瘤体积和肝肿瘤中YAP1 的表达水平.在NS组中,与Yap1flox/flox小鼠相比,Yap1LKO小鼠肝原位癌肿瘤体积减小了.在SCL组中,与Yap1flox/flox小鼠相比,Yap1 敲除减弱了SCL抑制肿瘤增长的作用.利用LC-MS检测SCL含药血清和水煎液的活性成分,并与YAP1 蛋白进行分子对接.LC-MS结果显示,SCL的 4 种活性成分是 3-硫酸咖啡酸、5-苄恶唑-2-酮、3,4,5-三羟基-6-[(2-氧代-2H-铬-5-基)氧]氧烷-2-羧酸和异东莨菪内酯.其中,3-硫酸咖啡酸、3,4,5-三羟基-6-[(2-氧代-2H-铬-5-基)氧]氧烷-2-羧酸和异东莨菪内酯这 3 种主要活性成分能直接结合YAP1.这些结果说明,SCL抑制肝癌细胞增殖与降低YAP1 表达有关.

目的 获得瑞香狼毒Stellera chamaejasme转录组数据库代谢途径基因序列、SSR以及转座子等信息.方法 以瑞香狼毒根作为受试材料,采用二代测序方法中的Illumina HiSeq 2000进行转录组测序,并进行系统的生物信息学分析.结果 共获得26 785 872个Clean reads片段,拼接得到47 053条Unigenes,平均长度为419nt.将拼装所得到的Unigene序列利用BLAST工具分别与Nr、Swiss-Prot、KEGG、COG和GO数据库进行比对,分别有11 138和24 744条Unigene在Nr和Swiss-Prot数据库中比对得到了注释信息,可归于36个GO分类,涉及119个KEGG标准代谢通路,进一步分析发现15条萜类生物合成途径的关键酶基因.利用MISA软件发现3 480个SSR,数量最高的SSR类型为单碱基重复,为1 986条,出现频率为57.07％,最少的是六碱基重复SSR,只有5条,出现频率仅为0.14％.利用RepeatMasker在线工具针对瑞香狼毒转录组序列进行转座子预测分析,结果共发现有1 497条转座子,其中E值＜1×10-5的序列有827条,包含22种类型转座子,数目最多的为LINE/L1类型(405条),占比为48.97％,占比最少的为DNA/Ginger、DNA/hAT、DNA/PIF-ISL2EU和LINE/Jockey以及LTR/Lenti类型分别只有1条.结论 对瑞香狼毒进行高通量测序,获得了大量基因序列信息以及SSR和转座子信息,为今后分离克隆瑞香狼毒中佛波酯等有效成分生物合成的关键酶基因以及开展相关分子机制研究提供了数据资源和理论基础.

目的 用GC-M S法分析比较天山假狼毒和瑞香狼毒根中挥发性成分的异同.方法 采用索氏提取法提取天山假狼毒和瑞香狼毒根中的挥发性成分,经GC-M S联用仪对挥发性成分进行分析鉴定,采用色谱峰面积归一化法计算各挥发性成分的含量.结果 共鉴定出2种植物根中的113个挥发性成分,其中天山假狼毒81个,瑞香狼毒69个,二者有37个共有成分.相对百分含量较高的成分有:十六酸甲酯(hexadecanoic acid-methyl ester)、9,12-顺式十八碳二烯酸[(Z,Z)-9,12-octadecadienoic acid]、角鲨烯(squalene)、1-庚三醇(1-heptatriacotanol)和异柠檬酸乙酯(ethyl iso-allocholate).结论 天山假狼毒和瑞香狼毒根中的挥发性成分有部分相近,但在含量与其他单一组分组成上存在一定的差异,本研究为天山假狼毒和瑞香狼毒药材的质量控制和进一步研究提供了重要理论依据.

查阅本草文献和相关中医文献,从植物形态描述、药图、产地、药用历史等方面对中药狼毒进行了考证.认为《本草图经》中文字描述的狼毒同药图绘制的石州狼毒为两个不同品种;从西汉到唐代,甘肃大戟为药用狼毒的基原;从宋代开始,瑞香狼毒作为本草记载的主流品种,但甘肃大戟作为狼毒在医疗实践中一直存在.而狼毒大戟在近代前的本草文献中没有作为药用狼毒出现.

目的:探索瑞香狼毒的分子生物学鉴定方法.方法:对瑞香科的14份瑞香狼毒样品和大戟科的2份狼毒大戟样品的细胞核基因ITS和ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,用MEGA 5.0软件进行相关数据分析,采用邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统树进行聚类分析.结果:ITS及ITS2序列能够有效的区分瑞香狼毒和狼毒大戟.结论:该研究建立了瑞香狼毒的分子生物学鉴定方法,可为瑞香狼毒的准确鉴定提供参考.