目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法:回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本，采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因，采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H 1N 1、甲型流感病毒H 3N 2、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸，采用 χ2检验进行分析。 结果:100例BALF标本，荧光定量PCR法检测MP及耐药基因，83例(83.00%)MP阳性，其中78例(93.98%)耐药，均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原，89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP，其中74例(74.00%)仅检出MP，5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0~4岁组病毒检出率高于>4~6岁组( P＝0.042)和>6岁组( P＝0.002)，差异均有统计学意义。 结论:MPP患儿的BALF标本绝大部分可检测到MP，耐药现象严重，以A2063G的点突变为主。少数BALF标本中可检测到其他呼吸道病原和2种或3种病原。

目的:制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白的广谱抗体FHA3，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合，且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性，在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞，在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论:获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。

目的:对接受体外膜肺氧合（ECMO）治疗的新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）和新型甲型H1N1流感病毒性肺炎（流感肺炎）患者的临床特征和预后进行比较。方法:将2016年3月至2019年12月于首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸重症监护病房（ICU）接受ECMO治疗的24例流感肺炎患者和2020年2月1日至3月31日于北京、河北等5家定点医院接受ECMO治疗的12例新冠肺炎患者纳入研究。收集两组患者基本情况、临床表现和ECMO治疗相关情况等资料并进行描述和比较，所有连续变量均以 M（ P25， P75）描述。 结果:新冠肺炎患者年龄为77（66，79）岁，高于流感肺炎患者［46（32，62）岁］， P<0.05；急性肺损伤评分和建立ECMO前的呼吸ECMO存活预测量表评分分别为3.3（3.0，3.5）和1（0，2）分，均低于流感肺炎患者［分别为3.8（3.5，4.0）分和4（2，6）分］（ P值均<0.05）。接受ECMO治疗的新冠肺炎患者血栓并发症、出血并发症和呼吸机相关性肺炎发生例数分别为4、10和5例，发生率均高于流感肺炎患者［分别为1、9和2例］， P值均<0.05。新冠肺炎患者ICU住院时间 M（ P25， P75）为31（28，75） d，长于流感肺炎患者［27（18，39） d］， P<0.05。新冠肺炎和流感肺炎患者ECMO成功撤离例数分别为6和14例，ICU病死例数分别为8和11例，撤离及病死比率差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:与流感肺炎患者相比，接受ECMO支持治疗的新冠肺炎患者ECMO相关并发症较多且ICU住院时间较长。

流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，严重危害人群健康。流感病毒抗原性易变，传播迅速，每年可引起季节性流行，在学校、托幼机构和养老院等人群聚集的场所易发生暴发疫情。每年季节性流感流行在全球可导致300万~500万重症病例，29万~65万呼吸道疾病相关死亡。孕妇、婴幼儿、老年人和慢性基础性疾病患者等高危人群，患流感后出现严重疾病和死亡的风险较高。2023年2月中旬至4月底，我国呈现一波以甲型H1N1亚型为主的流感流行季，强度略高于新冠疫情前的自然流行年份，今冬明春可能会面临新冠、流感等呼吸道传染病交互或共同流行的风险。接种流感疫苗是预防流感、减少流感相关重症和死亡的有效手段，可以减少流感相关疾病带来的危害及对医疗资源的挤兑。我国现已批准上市的流感疫苗有三价灭活流感疫苗（IIV3）、四价灭活流感疫苗（IIV4）和三价减毒活流感疫苗（LAIV3），其中IIV3和IIV4包括裂解疫苗和亚单位疫苗，LAIV3为减毒疫苗。流感疫苗在我国属于非免疫规划类疫苗，居民自愿接种。自2018年起，中国疾病预防控制中心在每年流感流行季之前均更新并印发当年度的《中国流感疫苗预防接种技术指南》。2022年9月以来，新的研究证据在国内外发表，新的流感疫苗在我国上市，为更好地指导我国流感预防控制和疫苗使用工作，国家免疫规划技术工作组流感疫苗工作组收集和整理国内外最新研究进展，在2022年版指南的基础上进行更新和修订，形成了《中国流感疫苗预防接种技术指南（2023-2024）》。本指南更新的内容主要包括：第一，增加了新的研究证据，尤其是我国的研究结果，包括流感疾病负担、疫苗效果、疫苗安全性监测、疫苗预防接种成本效果等；第二，更新了一年来国家卫生健康委员会、国家疾病预防控制局发布的流感防控有关政策和措施；第三，更新了2023-2024年度国内上市使用的流感疫苗种类；第四，更新了本年度三价和四价流感疫苗组分；第五，更新了2023-2024年度的流感疫苗接种建议。本指南建议：所有≥6月龄且无接种禁忌的人都应接种流感疫苗。≥18岁人群可在一次接受免疫服务时，在两侧肢体分别接种灭活流感疫苗和新冠疫苗；<18岁人群，建议流感疫苗与新冠疫苗接种间隔>14 d。对可接种不同类型或不同厂家疫苗产品的人群，可由受种者自愿选择接种任何一种流感疫苗，无优先推荐。结合流感疫情形势和多病共防的防控策略，尽可能降低流感的危害，优先推荐以下重点和高风险人群及时接种：①医务人员，包括临床救治人员、公共卫生人员、卫生检疫人员等；②≥60岁的老年人；③罹患一种或多种慢性病人群；④养老机构、长期护理机构、福利院等人群聚集场所脆弱人群及员工；⑤孕妇；⑥6~59月龄儿童；⑦6月龄以下婴儿的家庭成员和看护人员；⑧托幼机构、中小学校、监管场所等重点场所人群。对于接种灭活流感疫苗，6月龄~8岁儿童首次接种流感疫苗的应接种2剂次，间隔≥4周；2022-2023年度或以前接种过1剂次或以上流感疫苗的儿童，建议接种1剂次；≥9岁儿童和成年人仅需接种1剂次。对于接种减毒活流感疫苗，无论是否接种过流感疫苗，仅接种1剂次。建议各地在疫苗供应到位后尽早开展接种工作，尽量在当地流感流行季前完成接种。同一流行季，已按照接种程序完成全程接种的人员，无需再次接种。孕妇在孕期的任一阶段均可接种灭活流感疫苗。接种单位在整个流行季都可以提供接种服务。本指南适用于各级疾控机构、医疗机构、妇幼保健机构和接种单位等从事流感防治相关工作的专业人员。根据国内外研究进展，本指南今后亦将定期更新、完善。

目的:了解多重RT-PCR方法检测13种常见呼吸道感染病原体，在老年患者呼吸系统感染病原体检测中的应用价值。方法:317例2016年6月至2017年5月在石家庄市第一医院老年科就诊的具有呼吸系统感染症状的老年患者，年龄60～98岁，采集其抽吸痰液，提取病毒DNA/RNA，利用多重RT-PCR技术扩增，通过毛细管电泳，同时检测13种呼吸道病原体；并以直接测序方法和荧光实时PCR法为标准，评价该试剂的临床性能。结果:使用直接测序和荧光实时PCR结果为参照，多重RT-PCR技术的准确性为99.93% (95% CI: 99.79%～99.98%)，阳性预测值为99.24% (95% CI: 97.78%～99.74%)，阴性预测值为100% (95% CI: 99.9%～100%)，Cohen’s kappa值为0.9958 (95% CI: 0.965 2～1.026)。在317例老年患者中，呼吸道病原阳性检出率为75.7% (240/317)，其中甲型流感病毒最高，为20.2% (64/317)，主要为H3亚型(70.3% (45/64)；其次为鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体和乙型流感病毒，检出率分别为15.5% (49/317)、13.6% (43/317)、11.0% (35/317)和10.1% (32/317)。此外，同时检出2种以及2种以上病原体的老年患者为81例，检出率为25.6% (81/317)。 结论:多重RT-PCR方法能满足临床对呼吸道病原体检测的需求，并为老年患者呼吸系统感染的防治提供有效的临床资料。

目的:了解2010—2021年上海市闵行区流感样病例(ILI)的流行病学特征及流感病毒的病原学动态变化趋势。方法:利用上海市闵行区2010年第1周—2021年第52周共12个监测年度间的流感监测哨点医院和流感网络实验室的监测数据进行统计分析。结果:2010—2021年上海市闵行区国家级流感监测哨点医院共报告122 903例ILI，年平均流感样病例百分比(ILI%)为0.94%，总体呈现上升趋势( P<0.001)。ILI中，0~4岁、5~14岁、15~24岁、25~59岁、≥60岁年龄组病例分别占4.35%、13.30%、14.30%、54.32%、13.73%。ILI%呈现明显的周期性，12月—次年2月为冬季高峰，7—9月为夏季高峰，2013年初的冬季高峰有所推延，2021年未出现明显就诊高峰。2010—2021年闵行区共检测ILI标本11 625份，流感病毒阳性率为20.92%(2 432/11 625)，甲型流感病毒阳性率为12.83%(1 492/11 625)，乙型流感病毒阳性率为8.09%(940/11 625)，甲型流感的流行强度高于乙型流感。2010—2021年各型流感病毒的总体阳性率：甲型H3N2(1 051，9.04%)>甲型H1N1(441，3.79%)>乙型Victoria系(313，2.69%)>乙型Yamagata系(255，2.19%)，2010—2019年间上海市闵行区甲型流感与乙型流感交替流行，且每种流行株大概持续半年时间被新流行株所替代，2020、2021年没有明显的规律性。2010—2019年报告的ILI数量和流感病毒阳性率的变化趋势基本一致，2020、2021年的变化趋势有明显差别。 结论:上海市闵行区流感呈现季节性流行，且各亚型流感病毒交替或混合成优势毒株流行，发病集中在冬季和夏季。COVID-19疫情防控期间流感流行强度下降，但伴随疫情防控逐渐常态化，流感流行呈明显上升趋势，故应继续加强流感的防控与监测，并及时对病毒变异情况进行分析。

目的:了解黑龙江省2019—2020年度流感病毒的活动情况及流行规律。方法:对黑龙江省流感监测结果进行统计分析，并对优势株进行抗原性、耐药性检测和测序。结果:黑龙江省2019—2020年度流感样病例百分比（percentage of influenza-like illness，ILI%）为1.74%。全省共采集流感样病例标本12 571份，阳性1 443例，阳性率为11.48%，以A(H3N2)和甲型H1N1亚型为主，分离流感毒株482株。甲型H1N1亚型毒株中98.04%为A/Brisbane/02/2018的类似株；A(H3N2)亚型毒株中34.29%为A/Kansas/14/2017的类似株。所有流感毒株对奥司他韦和扎那米韦两种药物敏感。甲型H1N1亚型流感毒株与WHO推荐本年度疫苗株均属于6B.1A分支；A(H3N2)亚型流感毒株为3C.2a分支，而WHO推荐本年度疫苗株属于3C.3a分支，推测流感疫苗对A(H3N2)亚型保护效果不理想。结论:通过分析流感病毒病原学特征，可以提高我省流感监测的敏感性，为疫苗候选株的推荐提供参考。

目的:对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）进行国际多中心临床评价。方法:1 855份具有有效检测结果的临床平行样本（分别用于核酸和抗原检测）来自德国、英国、乌克兰、法国、印度、泰国、马来西亚、美国和巴西9个国家，采样时间为2021年1月3日至9月22日。对这些样本分别采用SARS-CoV-2抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）和核酸检测试剂盒（RT-PCR）进行检测，计算阳性符合率［（抗原阳性例数/核酸阳性例数）×100%］、阴性符合率［（抗原阴性例数/核酸阴性例数）×100%］、总符合率［（抗原和核酸检测一致的例数/总例数）×100%］和Kappa 值。采用变异系数评价以上指标在不同国家间的差异。分析不同核酸检测循环阈值（Ct值）样本、不同特征样本和不同突变株样本的抗原检出率。结果:所有样本SARS-CoV-2抗原检测与核酸检测阳性符合率为90.8%（569/627），阴性符合率为99.7%（1 224/1 228），总符合率为96.7%（1 793/1 855），一致性系数Kappa值为0.924；各国间的阳性符合率（除含Ct值>30样本较多的马来西亚外）、阴性符合率（除不含阴性样本的法国外）和总符合率（除法国外）的变异系数分别为6%、<1%和6%。当Ct值<25时抗原检出率可达83.3%~100%（变异系数为6%），无症状感染者和症状出现7 d内样本总体检出率和变异系数分别为93.4%（428/458）和5%，对SARS-CoV-2突变株的总检出率为97.5%（119/122），对20份其他病毒感染样本（包括甲型流感病毒H1N1、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、肠道萨奇病毒A组16、人类偏肺病毒、副流感病毒1型和4型、EB病毒和腺病毒）的抗原检测结果均为阴性。结论:SARS-CoV-2抗原检测试剂盒检测真实性好，且其各指标在9个国家间差异较小，可满足大规模早期筛查SARS-CoV-2感染的需要。

目的:了解2015—2020年流感流行季北京市流感流行特征。方法:使用北京市2015—2020年流感样病例(influenza-like illness，ILI)和流感病原学监测数据，分析流感流行趋势和流感病毒流行特征。结果:2015年第27周至2020年第26周共涉及5个流感流行季，流感样病例百分比(percentage of influenza-like illness，ILI%)为1.58%。共检测ILI标本96 892件，流感病毒核酸阳性率为16.32%，其中A(H3N2)亚型6 474件(40.89%)、甲型H1N1 4 410件(27.86%)、乙型Victoria系3 290件(20.78%)、乙型Yamagata系1 597件(10.09%)。ILI周报告数、ILI%与流感病毒阳性率变化趋势基本一致( r＝0.796， P<0.001； r＝0.808， P<0.001)。2017—2018年和2018—2019年流行季活跃期较长。2017—2018、2018—2019年流行季ILI周报告数较高(49 628人次和71 555人次)，核酸阳性率峰值较高(58.51%和57.08%)。 结论:2015—2020年北京市流感流行符合北半球流行特征，其中2017—2018和2018—2019流行季活跃期较长、流行水平较高，且各流行季优势毒株不同。

目的:开发用于甲型流感病毒快速分型的Taqman低密度芯片(Taqman low density array，TLDA)，可以同时开展甲型流感病毒通用、H1-H16及N1-N9亚型高通量快速鉴定，适用于流感样病例及禽流感标本中甲型流感病毒的快速分型鉴定。方法:设计甲型流感病毒通用、H1-16亚型、N1-9亚型的引物探针，并将其预先定制在TLDA反应芯片上；优化TLDA退火温度；用多种亚型的甲型流感病毒核酸进行10倍梯度稀释，结合微滴式数字PCR定量方法评价TLDA检测灵敏度；用乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞等其他多种常见的呼吸道病毒验证该TLDA检测特异性，同时选用多种已经明确分型的甲型流感病毒评价该TLDA的特异性和有效性；采集16例流感样病例标本及24例禽流感外环境标本用该芯片开展检测。结果:该TLDA的最佳退火温度为60 ℃；针对甲型流感病毒H1N1、H3N2、H5N6、H7N9和H9N2，其检测灵敏度为1.52~8.00拷贝/μl；能特异性检测甲型流感病毒，与其他常见呼吸道病毒无交叉反应，并能精准鉴定多种甲型流感病毒的亚型；应用该方法检测16例流感样病例标本和24例禽流感外环境监测标本，均可分型。结论:基于TLDA技术建立的甲型流感病毒高通量快速分型检测方法具有较好的灵敏度和特异性，适用于流感样病例和禽流感标本的病原快速检测，特别是对目前用常规商业化试剂尚无法鉴定的新型甲型流感病毒能够进行快速的亚型筛查与鉴定。