肝细胞核因子4α(HNF4α)是诱导肝细胞癌(HCC)分化中重要的开关因子,HNF4α甚至可重编程肝癌细胞为肝样细胞.在此过程中,调控HNF4α的上游因子有肝细胞核因子6等转录因子.另外,非编码RNA对HNF4α的调控也很重要.此外,去甲基化酶1011易位甲基胞嘧啶双加氧酶-1会诱导HNF4α启动子的去甲基化,启动HCC分化,抑制精氨酸甲基转移酶5也有类似的效果.本文将近年来在诱导肝细胞癌分化过程中激活HNF4α基因、非编码RNA及去甲基化修饰及相关通路等研究加以综述.

甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)蛋白是一种5-甲基胞嘧啶(5-mC)羟化酶，属于人类α-酮戊二酸加氧酶TET蛋白家族。其功能是识别并结合到基因组5’-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)-3’二核苷酸密度高的区域如CpG岛，启动DNA去甲基化程序，维持DNA甲基化和去甲基化平衡，以保持基因组甲基化稳态，实现表观遗传调控。TET1表达和/或功能异常与肿瘤的发生和进展密切相关，在不同来源的肿瘤中可以表现为原癌基因或者抑癌基因属性。本文综述近年来TET1在肿瘤中的作用及机制的研究进展。

目的:探讨大鼠孕期、哺乳期及其子代持续高碘摄入，对子代大鼠甲状腺功能和学习记忆的影响及可能机制。方法:6 ~ 8周龄Wistar大鼠，体重为220 ~ 240 g，适应性喂养1周后，雌雄以1 ∶ 1交配。孕鼠分为正常碘摄入组（NI）、10倍高碘摄入组（10 HI）以及100倍高碘摄入组（100 HI），通过饮水及饲料摄碘，摄碘量分别为7.5、75.0、750.0 μg/d，每组8只孕鼠，其子代断乳后继续给予不同倍数碘至180 d。利用Morris水迷宫测定子鼠空间学习记忆能力。子鼠颈总动脉取血，分离血清待测，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT 3）、游离甲状腺素（FT 4）、促甲状腺激素（TSH）水平；提取海马总RNA，实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）检测10-11易位甲基胞嘧啶双加氧酶（TET）1、2和3 mRNA表达；共聚焦免疫荧光共定位观察脑组织中甲状腺激素受体β1（TRβ1）和TET 3表达。 结果:与NI组[（4.95 ± 0.53）、（12.62 ± 1.81）pmol/L，（7.70 ± 1.04）mU/L]相比，10 HI和100 HI组血清FT 3、FT 4水平[（4.60 ± 0.49）、（4.62 ± 0.54），（11.67 ± 1.54）、（10.85 ± 1.56）pmol/L]显著降低（ P均< 0.05），血清TSH水平[（9.62 ± 0.93）、（9.77 ± 1.28）mU/L]显著升高（ P均< 0.05）。与NI组相比，10 HI和100 HI组定位导航实验连续5 d平均逃避潜伏期显著增加（ P均< 0.05），第6天空间探索实验显示穿越平台次数显著减少（ P均< 0.05）；且TET 3在海马组织中的mRNA表达显著下降（ P均< 0.05）。免疫荧光结果显示，TRβ1和TET 3在100 HI组子鼠脑血管壁内膜、脑室脉络丛、神经元共定位表达。 结论:母体孕期、哺乳期高碘摄入，子代继续高碘摄入至180 d时出现空间学习记忆能力下降，可能与甲状腺激素改变以及TET 3、TRβ1在脑中的相互作用有关。

目的:探究急性心肌梗死(AMI)过程中内皮细胞 tet甲基胞嘧啶双加氧酶 2(TET2)对趋化因子受体 4(CXCR4)DNA甲基化的影响以及对 AMI小鼠心肌组织自噬、炎症反应及组织细胞凋亡的影响机制,为临床探究 AMI发展的分子机制提供理论依据.方法:8周龄雄性 C57/BL6小鼠 50只,制备 AMI模型,尾部注射 TET2、CXCR4过表达质粒;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织TET2、CXCR4、微管相关蛋白 3(LC3)、P62、B细胞淋巴瘤/白血病-2 基因(Bcl-2)关联 X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)、Bcl-2表达;甲基化检测 CXCR4 DNA甲基化水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织内炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组心肌组织细胞凋亡指数.结果:与假手术组比较,模型组心肌组织内 TET2、CXCR4均表达上调,TET2、CXCR4均在心肌组织内过表达,TET2 过表达促进 CXCR4 表达,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TET2 mimic组 CXCR4启动子区域 DNA甲基化程度降低,CXCR4 蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组小鼠心肌组织自噬蛋白 LC3、抑制细胞凋亡蛋白 Bcl-2 表达下调,炎性因子 IL-6、TNF-α、IL-1β水平、自噬蛋白 P62、促细胞凋亡蛋白 Bax、cleaved Caspase-3 表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);TET2、CXCR4过表达进一步下调 LC3、Bcl-2 蛋白表达,上调炎性因子 IL-6、TNF-α、IL-1β水平,P62、Bax、cleaved Caspase-3 蛋白表达;TET2、CXCR4二者联合体现出最低 LC3、Bcl-2蛋白表达,最高炎性因子 IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及 P62、Bax、cleaved Caspase-3 蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05).结论:AMI发展中,TET2 通过降低 CXCR4 DNA甲基化,促进 CXCR4 基因表达,进而抑制 AMI小鼠心肌组织自噬,上调炎症反应及细胞凋亡程度,促进疾病发展.

目的 探讨老年甲状腺结节合并糖尿病患者外周血DNA甲基化/羟甲基化的检测及其临床意义.方法 选择2021 年1 月至2022 年12 月兰州市第一人民医院收治的136 例老年甲状腺结节合并糖尿病患者为研究组,另选同期体检正常的 135 例老年人为对照组.采集所有入组对象一般资料,测定空腹血糖(FPG)、餐后 2h 血糖(2hPBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平.采用酶联免疫吸附法检测外周血全基因组 5-甲基胞嘧啶(5-mC)、5 羟甲基胞嘧啶(5-hmC)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和甲基双加氧酶(TET2)水平.采用SPSS 21.0 统计软件进行数据分析.根据数据类型,分别采用t检验、Mann-Whitney U检验或χ2 检验进行组间比较.采用Spearman相关性分析探讨外周血 5-mC、5-hmC与甲状腺结节合并糖尿病的相关性.结果 研究组患者FPG、2hPBG、HbA1c、TSH、TgAb和TPOAb水平均高于对照组,FT3 低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).研究组外周血 5-mC、5-hmC水平均高于对照组[6.64%(3.53%,8.53%)和 4.28%(1.70%,7.20%);50.41%(35.00%,63.27%)和36.51%(17.81%,50.06%)];外周血 TET2、ICAM-1 水平均高于对照组[9.37(5.70,13.56)和 4.56(1.52,6.99)pg/ml;4.98(2.35,7.01)和 0.97(0.15,1.60)ng/ml],差异均有统计学意义(P<0.001).Spearman相关性分析结果显示,5-mC 与TgAb、TPOAb和HbA1c呈正相关(r=0.413,0.348,0.405;P<0.05);5-hmC与TgAb、TPOAb、FBG和2hPG呈正相关(r=0.375,0.406,0.376,0.311;P<0.05);5-mC与 5-hmC呈正相关(r=0.256;P<0.05).结论 老年甲状腺结节合并糖尿病患者外周血全基因组DNA甲基化与羟甲基化水平显著正常人群,外周血 5-mC、5-hmC水平与老年甲状腺结节、糖尿病发病显著相关.

目的 构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定.方法 从人宫颈癌组织中扩增出 TET1目的片段并将其克隆到 pLVX-MYRF 载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证.选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达.结果 经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1.与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05).结论 成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达.

表观遗传(epigenetics)的调控机制主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控.其中DNA甲基化(DNA methylation)在胚胎发育、遗传印记、X染色体失活等过程中具有重要意义.DNA甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)作用下的一种相对稳定的表观遗传调控机制,可随DNA的复制遗传给下一代,在人类正常的生长发育过程中起关键作用.DNA甲基化主要发生在生殖细胞发育期和植入前胚胎期,在此期间若发生去甲基化不充分或过早的重新甲基化都可能引起胚胎的死亡及各种先天性疾病的发生发展[1].TET(ten-eleven translocation)蛋白家族是一类依赖于酮戊二酸和Fe2+起催化作用的双加氧酶,可将5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC).研究表明TET蛋白通过影响DNA甲基化和DNA去甲基化的动态平衡过程在各种生物的生长、发育和衰老过程中起重要作用,可作为神经精神疾病治疗的新靶点[2,3].因此,本文从TET蛋白家族对DNA去甲基化、DNA羟甲基化的调控,以及TET蛋白家族在神经系统中的作用等方面对TET蛋白家族近几年来在中枢神经系统方面的作用进行综述,以期为未来的进一步研究提供参考.

TET (ten eleven translocation)家族蛋白是DNA甲基化过程中的重要调节因子,包括TET1、TET2和TET3,属于a-酮戊二酸(α-KG)和Fe2+依赖的双加氧酶.TET蛋白能将5-甲基胞嘧啶(5mC)氧化生成5-羟甲基胞嘧啶(5hmC),是TET蛋白发挥去甲基化作用的基础.TET蛋白对胚胎发育、生殖细胞形成及骨髓造血等具有重要作用.TET1蛋白在癌细胞和癌组织中的含量明显低于癌旁组织,提示TET1蛋白的DNA去甲基化作用对肿瘤的发生、发展具有一定影响.文章综述TET1蛋白发挥去甲基化作用的机制及其在肝癌、胃癌和结肠癌等中的最新研究进展,为肿瘤的预后和治疗作参考.

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib对大鼠骨内膜来源干细胞(EDSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 10只健康雄性4周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组( n＝5 ) ,实验组予以EGFR信号通路抑制剂Gefitinib 100 mg/kg·d灌胃,对照组予以等剂量的甲基纤维素灌胃;术后1周取双侧股骨及胫骨,分别分离提取骨髓间充质干细胞(BMSCs)和EDSCs进行体外增殖克隆,通过流式细胞术鉴定第3代( P3 )细胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,聚合酶链反应检测细胞周期抑制因子相关基因(p15、p16、p21、p27)的表达.成骨诱导14 d后行碱性磷酸酶(ALP)染色,成骨分化21 d后行von Kossa染色,并提取mRNA做实时定量聚合酶链反应检测对比成骨分化相关基因(osteocalcin、bsp、runx2、osterix)的表达.结果 EDSCs与BMSCs的CD29、CD44均呈阳性表达,CD34、CD45均呈阴性表达.Gefitinib阻断EGFR信号通路后,BrdU检测发现其对BMSCs的抑制(11.15%)比对EDSCs (0.25%)更明显;细胞周期检测可见EDSCs处于G0/G1期和S期的细胞量增加,处于G2-M期的细胞量明显降低;ALP染色可见EDSCs阳性,细胞数升高率(53.31%)明显高于BMSCs(25.04%);EDSCs细胞周期抑制因子相关基因表达的增加百分率(分别为103.9%、58.0%、117.3%、105.1%)明显高于BMSCs(分别为39.3%、38.4%、24.5%、83.4%),对EDSCs成骨分化相关基因表达的增加百分率(分别为247.0%、289.9%、66.1%、233.2%)明显高于BMSCs(分别为106.5%、186.4%、41.7%、190.8%);以上差异均有统计学意义(P ＜0.05).结论 EGFR抑制剂Gefitinib抑制EDSCs和BMSCs增殖,但促进其成骨分化,且对BMSCs增殖抑制更明显,对EDSCs的分化促进作用更明显.

目的 研究 10-11 易位甲基胞嘧啶双加氧酶 1(TET1)去甲基化调控μ阿片受体对神经病理性疼痛(neu-ropathic pain,NPP)吗啡耐受的影响及机制.方法 采用坐骨神经慢性压迫性损伤模型,背根神经节(dorsal root gangli-a,DRG)显微注射表达全长TET1 mRNA的单纯疱疹病毒,行为学检测TET1过表达对痛觉过敏及吗啡耐受的影响,West-ern blot检测DRG内μ阿片受体(μ-opioid receptor,MOR)的表达,DNA blot 方法 检测 DRG 全基因 5-甲基胞嘧啶(5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平,亚硫酸氢盐测序和Tab-seq技术检测MOR启动子区域5mC和5hmC水平.结果 与对照组相比,TET1 过表达明显缓解神经损伤导致的痛觉过敏和吗啡耐受,增强吗啡的镇痛效果.TET1 过表达对DRG整体的甲基化水平没有影响,但可以调节 DRG 内MOR启动子区域的甲基化水平,增加MOR的表达.结论 TET1过表达通过调节 MOR启动子区域甲基化水平,增加MOR的表达,从而改善神经损伤导致的痛觉过敏和吗啡耐受.