目的:探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ(methionine adenosyltransferase Ⅰ/Ⅲ，MAT Ⅰ/Ⅲ)缺乏症的新生儿筛查及 MAT1A基因变异情况。 方法:应用串联质谱技术对泉州地区364 545份新生儿样本进行遗传代谢病筛查，应用高通量测序技术结合Sanger测序法对MAT Ⅰ/Ⅲ缺乏症患儿的相关致病基因进行检测，寻找可能的致病变异位点。采用MutationTaster和HSF软件对发现的新变异进行致病性分析预测。结果:新生儿筛查检测出3例MAT Ⅰ/Ⅲ缺乏症患儿，发病率为1/121 515。氨基酸和酰基肉碱分析结果显示3例患儿的血甲硫氨酸浓度在筛查和随访期间均有不同程度的升高，随访期间生长发育正常。3例患儿均被检测到 MAT1A基因变异，共发现3种变异类型，包括2种错义变异c.776C>T(p.Ala259Val)、c.791G>A(p.Arg264His)，和1种同义变异c.360C>T(p.Cys120Cys)。 MAT1A基因c.776C>T(p.Ala259Val)和c.791G>A(p.Arg264His)变异为已知的致病变异，c.360C>T(p.Cys120Cys)为尚未见报道的新变异。用MutationTaster和HSF对c.360C>T(p.Cys120Cys)进行预测分析，结果显示变异会引起剪接改变，进而影响蛋白的结构和功能。 结论:本研究较为系统的分析了本地区MAT Ⅰ/Ⅲ缺乏症的新生儿筛查及 MAT1A基因变异情况，阐明了本地区MAT Ⅰ/Ⅲ缺乏症的发病率，发现1个新的 MAT1A基因变异，丰富了 MAT1A基因变异谱，为MAT Ⅰ/Ⅲ缺乏症的诊断提供了依据。

目的:了解不同类型氟骨症大鼠骨组织5-甲基胞嘧啶（5-mC）、5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）水平，并分析其相关性。方法:选取4周龄SPF级健康SD大鼠30只，适应性喂养1周后，采用随机数字表法将大鼠按体重（100 ~ 120 g）分为对照组（4 ml·kg -1·bw去离子水灌胃+标准维持饲料）、骨硬化组[20 mg·kg -1·bw氟化钠（NaF）灌胃+标准维持饲料]、骨质疏松/骨软化组（20 mg·kg -1·bw NaF灌胃+低钙低蛋白偏食饲料），每组10只，雌雄各半；每周灌胃6 d，实验周期为5个月。实验结束后采集大鼠心脏血、下肢股骨样本。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清甲基供体S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及其代谢产物S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）含量，骨组织5-mC、5-hmC水平；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测大鼠骨组织DNA甲基转移酶（DNMTs），DNA羟甲基化酶（TETs）蛋白表达情况；并分析各组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平以及骨组织5-mC与5-hmC水平的相关性。 结果:对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM[11.03（7.06，18.63）、3.96（2.32，9.09）、3.91（2.35，4.46）nmol/L]、SAH含量[（4.69 ± 0.55）、（5.41 ± 1.13）、（13.90 ± 1.09）ng/L]，SAM/SAH比值[2.58（1.54，4.12）、0.62（0.52，1.69）、0.14（0.13，0.15）]及骨组织5-mC[103.39（97.37，109.35）、52.50（50.19，68.13）、55.03（49.97，59.57）ng/L]、5-hmC水平[（32.61 ± 8.84）、（56.96 ± 8.48）、（20.34 ± 6.22）ng/L]比较，差异均有统计学意义（ H/ F = 12.81、284.24、21.85、19.37、55.23，均 P < 0.01）。与对照组比较，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组血清SAM含量、SAM/SAH比值、骨组织5-mC水平及骨质疏松/骨软化组骨组织5-hmC水平均较低，而骨质疏松/骨软化组血清SAH含量和骨硬化组骨组织5-hmC水平均较高（均 P < 0.05）；与骨硬化组比较，骨质疏松/骨软化组血清SAH含量较高，而SAM/SAH比值、骨组织5-hmC水平均较低（均 P < 0.05）。Western blot检测结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、TET1、TET2蛋白表达比较，差异均有统计学意义（ F = 285.45、345.58、239.83、311.52、318.24，均 P < 0.001）；其中，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B蛋白表达均低于对照组，且骨质疏松/骨软化组均低于骨硬化组（均 P < 0.05）；骨硬化组骨组织TET1、TET2蛋白表达均高于对照组和骨质疏松/骨软化组，且骨质疏松/骨软化组均低于对照组（均 P < 0.05）。Spearman秩相关分析结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平均呈正相关（ rs = 0.89、0.92、0.81，0.73、0.87、0.73，均 P < 0.05）；而各组大鼠骨组织5-mC水平与5-hmC水平均呈负相关（ rs = - 0.69、- 0.68、- 0.72，均 P < 0.05）。 结论:骨硬化型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平较低、5-hmC水平较高，骨质疏松/骨软化型氟骨症大鼠骨组织5-mC、5-hmC水平均较低；不同类型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平差异不显著，这可能与骨组织5-hmC水平存在差异有关。

[目的]通过对不同脏腑虚损哮喘患者线粒体功能及其相关受损因素的分析,探寻不同脏腑虚损哮喘患者的病例特征,并通过对不同脏腑虚损组哮喘患者的线粒体功能变化及影响因素的差异性分析,试图发现不同脏腑虚损哮喘患者DDAH1/L-Arg/ADMA通路以及线粒体功能、氧代谢的变化趋势及规律.[方法]选取符合纳入标准的支气管哮喘急性发作期患者共122例,对入组患者进行临床资料采集,按脏腑虚损辨证分型标准分为肺气虚组47例、肺脾气虚组39例、肺脾肾虚组36例;并于同期选取正常对照组44例.观察不同脏腑虚损哮喘患者的第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量与用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、呼气峰值流速(PEF)等肺功能指标和病情严重程度情况;同时,抽取患者静脉血,采用高效液相联合质谱法(HPLC-MS/MS)检测左旋精氨酸(L-Arg)及不对称二甲基精氨酸(ADMA)水平,采用酶联免疫吸附法(ELASA)检测蛋白精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)、二甲基精氨酸二甲氨基水解酶1(DDAH1)等精氨酸代谢相关指标及活性氧自由基(ROS)、硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)、8-异前列腺素(8-Iso)、过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)等氧化损伤标记物水平;提取哮喘患者及正常对照组的血小板及线粒体,JC-1流式细胞法测定血小板线粒体膜电位(MMP)、三磷酸腺苷(ATP)和细胞色素C氧化酶(COX)的活性,以此评估线粒体功能;分析不同脏腑虚损组哮喘患者的线粒体功能变化及影响因素的差异性,并与正常对照组比较.[结果](1)不同脏腑虚损哮喘患者的年龄和肺功能(FEV1、FEV1/FVC、PEF)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).表现为肺脾肾虚组的年龄明显高于肺气虚组和肺脾气虚组(P＜0.05),以及随脏腑虚损情况的加重,肺功能(FEV1、FEV1/FVC、PEF)呈显著下降趋势(P＜0.05).(2)不同脏腑虚损患者的病情严重程度分布比较,差异有统计学意义(P＜0.01).其中,肺气虚组以间歇状态(1级)为主(65.96%),其次为轻度哮喘(2级)(25.53%);肺脾气虚组以中度哮喘(3级)为主(41.03%),其次为间歇状态(1级)(30.77%);肺脾肾虚组以重度哮喘(4级)为主(52.78%),其次为中度哮喘(3级)(33.33%).即随着脏腑虚损情况的加重,哮喘的病情严重程度也表现出随之加重的趋势.(3)不同脏腑虚损组哮喘患者与正常对照组的血浆8-Iso、ROS、LPO、MDA水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).其中,不同脏腑虚损组哮喘患者的血浆8-Iso、LPO水平和肺脾气虚组、肺脾肾虚组患者的血浆MDA、ROS水平均明显高于正常对照组(P＜0.05),且肺脾气虚组、肺脾肾虚组患者的血浆ROS水平均明显高于肺气虚组(P＜0.05);而不同脏腑虚损组哮喘患者的血浆TBARS水平有高于正常对照组趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).表明不同脏腑虚损哮喘患者机体内均有活性氧及过氧化脂质类物质的蓄积,且随脏腑虚损情况的加重其水平均呈增高趋势.(4)不同脏腑虚损哮喘患者与正常对照组的MMP、ATP、COX比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),表现为不同脏腑虚损哮喘患者的MMP、ATP、COX水平均较正常对照组明显降低(P＜0.05),且随着脏腑虚损的加重,COX活性有下降趋势.(5)不同脏腑虚损哮喘患者与正常对照组的血浆L-Arg、L-Arg/ADMA、DDAH1水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).表现为不同脏腑虚损哮喘患者的血浆L-Arg、L-Arg/ADMA、DDAH1水平均较正常对照组明显降低(P＜0.05),且随脏腑虚损的加重,上述指标均有逐渐降低的趋势;而不同脏腑虚损哮喘患者与正常对照组的血浆ADMA、PRMT1比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]该研究从机体代谢角度论证了中医脏腑虚损理论对病情变化趋势判断的正确性,证实了哮喘患者的脏腑虚损状况与临床病情进展、氧代谢及其影响因素和机体氧化损伤程度均表现出一致的变化趋势.

目的 探讨甲硫氨酸代谢轴是否可作为多发性骨髓瘤(MM)潜在治疗靶点.方法 选取血液内科就诊的10例多发性骨髓瘤患者(新诊断MM组与治疗反应MM组),另外选择同期在广东医科大学附属医院自愿捐献骨髓上清液的健康者5例(Ctrl组).采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对3组人群骨髓上清液进行靶向定量代谢组学分析;利用代谢组学数据进行多变量统计分析.分析NCBI GEO数据库中人类MM相关高通量基因芯片数据,利用在线工具Cell Ranger和Seurat软件、生物信息工程分析技术筛选芯片数据中共同的差异基因,筛选MM中甲硫氨酸代谢轴相关的发病关键基因.结果 检测骨髓上清液发现MM患者中甲硫氨酸和半胱氨酸水平显著升高(P＜0.05).筛选出参与甲硫氨酸循环的酶有甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)、腺苷同型半胱氨酸酶(AHCY)和精氨酸甲基转移酶1(PRMT1),发现与MM进展相关.结论 MAT2A、AHCY和PRMT1这些关键酶可能通过调节甲硫氨酸代谢,影响MM的生物学行为和疾病进程.

[背景]砷可引起肝脏功能紊乱、脂肪变性、炎症、纤维化等不同程度肝损伤,但其机制尚不明确且缺乏有效治疗手段.[目的]从S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢角度初步探讨刺梨汁对砷致大鼠肝损伤的干预作用及机制.[方法]36只Wistar大鼠按随机数字法分为 6组,每组 6只,雌雄各半.低、中、高砷剂量组分别给予 2.5、5.0、10.0 mg·kg-1 亚砷酸钠(NaAsO2)(以体重计,后同)灌胃,对照组给予10 mL·kg-1 去离子水灌胃;刺梨汁干预组给予 10 mg·kg-1 NaAsO2 灌胃 4 h后给予 10 mL·kg-1刺梨汁灌胃;刺梨汁对照组给予 10 mL·kg-1 刺梨汁灌胃;每天灌胃 1次,每周灌胃 6 d,共处理4个月.苏木素-伊红染色(HE染色)观察大鼠肝脏组织病理学改变;酶循环法、速率法分别检测大鼠肝功能指标总胆汁酸(TBA)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT);超高效液相色谱(UPLC-MS)检测大鼠肝脏SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量;实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测大鼠肝脏中SAM代谢相关酶甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)、烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因(Gnmt、Nnmt、Pemt)的mRNA水平.[结果]对照组大鼠肝细胞核染清晰,胞浆染色均匀,肝索呈放射状排列,无炎性细胞浸润;低、中、高砷剂量组可见不同程度的肝窦扩张、充血,炎性浸润.与对照组比较,中、高砷组TBA及高砷组γ-GT明显增加(P<0.05),且随染砷剂量增加逐渐升高(P趋势<0.05).与对照组相比,低、中、高砷剂量组SAH含量明显增高,SAM含量、SAM/SAH明显降低(P<0.05),且均与染砷剂量呈剂量-反应关系(P趋势<0.05);SAM、SAM/SAH的降低与大鼠肝功能指标TBA(SAM:r=-0.569;SAM/SAH:r=-0.607)、γ-GT(SAM:r=-0.577;SAM/SAH:r=-0.622)的增加相关(P<0.05).此外,与对照组相比,高砷剂量组Gnmt及低、中、高砷剂量组Nnmt、Pemt基因mRNA表达水平均明显上升(P<0.05),且随染砷剂量升高呈上升趋势(P趋势<0.05).Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达与SAM(r=-0.490,r=-0.567,r=-0.593)、SAM/SAH(r=-0.433,r=-0.564,r=-0.746)均呈负相关(P<0.05).与高砷剂量组相比,刺梨汁干预组大鼠肝细胞肝窦扩张减轻,炎性浸润情况得到缓解;γ-GT、TBA明显降低,且恢复至对照组水平;Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达明显降低,SAH含量下降,SAM含量及SAM/SAH回升(P<0.05).[结论]砷诱导的大鼠肝损伤与肝脏Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达升高和SAM消耗密切相关.刺梨汁可能通过抑制砷诱导的Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达异常升高及SAM过度消耗改善砷引起的大鼠肝损伤.该研究结果为从维持SAM角度防治砷中毒肝损伤提供了依据.

目的 探讨甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床表现和分子遗传学特点.方法 回顾分析3例因甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床资料及相关基因分析,并进行核心家系分析.结果 3例患儿,男孩2例,女孩1例,年龄5个月～3岁,来自3个不相关的家系;均无阳性家族史.1例在新生儿筛查时被发现,1例于1个月时病理性黄疸发病,另1例于2岁时因手抖和生长发育落后而就诊.血氨基酸酯酰肉碱谱分析均显示甲硫氨酸显著增高,134.50～790.67μmol/L.患儿均为甲硫氨酸腺苷转移酶编码基因MAT1A突变;1例为复合杂合突变,第3外显子c.274T>C和第7外显子c.895C>T突变;1例为第6外显子c.757G>A纯合突变;另1例为第7外显子c.791G>A纯合突变.核心家系分析示患儿的突变均分别来自父母.结论 对于以神经系统损害为主要表现的患儿应考虑到甲硫氨酸代谢障碍性疾病,血氨基酸和基因分析是明确诊断的重要方法.新生儿筛查是发现此病的有效方法.

肝细胞癌是一种死亡率极高的癌症,大多数病人发现时己属晚期.甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)是细胞生命活动的关键酶,可以通过催化甲酼氨酸和三磷酸腺苷(ATP)结合,促进生物甲基供体S-腺苷甲酼氨酸(SAMe)的生物合成.正常肝细胞中MAT1A与MAT2A存在动态平衡,共同维持细胞内SAMe稳态;肝细胞癌中MAT1A转变成MAT2A,会使SAMe生物合成减少,为癌细胞生长提供有利条件,故MAT1A表达降低而MAT2A增高.因此,促进MAT2A向MAT1A转化,进而提高MAT1A/MAT2A的比值可能成为治疗肝细胞癌的关键靶点之一.本文就MAT1A/MAT2A平衡在肝细胞癌中的重要作用作一综述,旨在为寻找肝细胞癌防治靶点提供新的思路.

对郑州儿童医院内分泌遗传代谢科收治的1例高甲硫氨酸血症患儿的临床资料及基因结果进行回顾性分析.患儿,男,20 d,出生后筛查发现血甲硫氨酸升高;生长发育正常,查体无特殊,经基因检测发现MATlA基因存在c. 952-2A>G、c. 695C>T(p. P232L)杂合突变,予低甲硫氨酸奶粉及母乳混合喂养,随访至6月龄,评估生长发育正常.提示单纯性高甲硫氨酸血症多数无明显临床症状,预后相对良性,为其临床诊断、治疗和遗传咨询提供依据.

目的 评价DNA甲基化在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用.方法 清洁级健康雄性C57BL/6小鼠144只,6～8周龄,体重20～25 g,采用随机数字表法分为4组(n=36):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sepsis组)、假手术+SAM组(Sham+SAM组)和脓毒症+SAM组(Sepsis+ SAM组).采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型.Sham+SAM组和Sepsis+SAM组于术前1h及术后12 h腹腔注射DNA甲基化的甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 100 mg/kg,Sham组和Sepsis组腹腔注射等量生理盐水.于CLP后1、3和7d时通过Y-迷宫和条件恐惧实验检测小鼠认知功能;于CLP后1、3和7d时处死小鼠取海马组织,采用比色法测定全基因组DNA甲基化水平,采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基化转移酶(DNMTl、DNMT3a和DNMT3b)、TET(TET1、TET2和TET3)和TDG的mRNA表达水平.结果 与Sham组比较,Sepsis组新异臂停留时间缩短,僵直时间百分比和各臂穿梭次数总和减少,CLP后1、3和7d时小鼠海马组织全基因组甲基化水平降低,DNMT1、DNMT3a、TET1、TET2、TET3和TDG mRNA表达上调,DNMT3b mRNA表达下调(P＜0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+SAM组新异臂停留时间延长,僵直时间百分比和各臂穿梭次数总和明显增加,各时点DNMT1、DNMT3a、TET1、TET2、TET3和TDG的mRNA表达下调,DNMT3bmRNA表达上调(P＜0.05).结论 海马DNA甲基化参与了小鼠脓毒症相关性脑病发生的过程.

目的 探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法 回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果 22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/44000.5例患儿中,3例血甲硫氨酸在70～150μmol/L之间.基因检测2例符合常染色体显性遗传、1例符合常染色体隐性遗传.3例随访至今预后良好,另2例血甲硫氨酸持续>500μmol/L;予以特殊饮食治疗,1例头颅磁共振成像和肝功能异常,1例伴有微缺失综合征,发育落后.结论 甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷可通过串联质谱新生儿筛查结合基因检测而早期诊断,需要长期随访.