目的·使用模式生物秀丽隐杆线虫(简称线虫)研究癌-睾丸抗原14(cancer-testis antigen 14,CT14)对其胚胎及幼虫发育的影响,探索CT14在发育中的潜在功能和作用机制.方法·利用显微注射构建可诱导表达人源CT14(HsCT14)、缺失CT14特异性中间序列(CT14-specific intermediate region,CIR)的截短突变体HsCT14?CIR及绿色荧光蛋白对照的转基因线虫品系,观察并比较全长和截短突变体CT14表达后对线虫虫卵的胚胎发育及幼虫发育过程的影响.构建可诱导表达食蟹猕猴(Macaca fascicularis)和倭狐猴(Microcebus murinus)CT14的线虫品系,比较异源表达不同灵长类种属来源的CT14对线虫虫卵孵化率及幼虫成虫率的影响.通过Smart-seq转录组测序技术分析CT14表达引起的线虫胚胎的基因表达差异,并采用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析和基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),进一步探索线虫胚胎中受CT14 影响的相关生物学过程及通路.结果·HsCT14及其截短突变体HsCT14?CIR的诱导表达显著降低了线虫虫卵孵化率,其中HsCT14的表达对孵化率的影响较大.微分干涉对比(differential interference contrast,DIC)显微技术观察显示,表达HsCT14的线虫胚胎在发育的comma期表现出明显的形态学异常.HsCT14及其截短突变体HsCT14?CIR表达后的线虫幼虫成虫率显著低于绿色荧光蛋白对照组,并出现生长阻滞现象,其中HsCT14的表达对成虫率的影响较大.食蟹猕猴CT14(MfCT14)的表达对线虫虫卵孵化率及幼虫成虫率的影响与人源HsCT14相似,而倭狐猴CT14(MmCT14)的表达对上述指标的影响显著低于HsCT14和MfCT14.Smart-seq转录组测序结果显示,CT14的表达可能影响线虫胚胎的多个生物学过程,涉及ATP依赖的染色质重塑过程和DNA复制通路等.结论·CT14的异源表达显著干扰线虫的胚胎发育和幼虫发育,CIR起了关键的增强作用.推测CT14可能通过影响染色质重塑等多个通路的基因表达,在发育生物学中发挥重要调节作用.

目的 研究负载癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OY-TES-1的树突状细胞(dendritic cell,DC)体外抗胶质瘤的细胞免疫效应.方法 细胞因子联合诱导HLA-A2+健康人外周血单核细胞为DC,采用OY-TES-1重组蛋白致敏DC,流式细胞术检测成熟DC表型分子;进而使DC诱导同体 T 淋巴细胞产生细胞毒性 T 淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),CCK8检测T细胞增殖情况,ELISPOT检测IFN-γ含量,乳酸脱氢酶释放法检测CTL对胶质瘤细胞U251和A172的杀伤作用.结果 负载OY-T ES-1的DC低表达CD14,而高表达CD1a、CD83和CD80表型分子,能明显促进CD8+T细胞的增殖及其IFN-γ的分泌(P<0.05);而OY-TES-1特异性CTL在效靶比为50:1时对 HLA-A2+和OY-TES-1+U251、HLA-A2-和OY-TES-1+A172均有明显杀伤作用(均 P<0.05),但其对 U251的杀伤作用更强.结论 体外用OY-T ES-1重组蛋白致敏的DC可诱导特异性抗胶质瘤免疫应答,提示OY-T ES-1可能成为胶质瘤免疫治疗的靶点.

目的 检测食管鳞癌患者婆罗双树样基因4 (SALL4)和黑色素瘤抗原A1 (MAGE-A1)特异性细胞免疫水平,探讨其患者的特异性免疫应答及其与临床特征的相关性,为食管鳞癌的临床免疫治疗潜在靶点的选择提供实验依据.方法 收集2015年4月-2016年10月新疆医科大学附属肿瘤医院放疗中心收治的食管鳞癌初治患者51例,用合成的肿瘤睾丸抗原(CTA)中的SALL4和MAGE-A1特异性抗原表位肽刺激患者外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌γ干扰素(IFN-γ)细胞的频率及强度,并分析其与食管鳞癌患者临床特征的关系.结果 食管鳞癌患者外周血中,SALL4和MAGE-A1特异性CTL反应频率分别为29.4％(15/51)和27.5％(14/51),反应强度分别为78.0、5 5.7 SFC/106 PBMCs;N0～1组MAGE-A1特异性CTL反应频率(37.5％)明显高于N2～3组(10.5％) (P =0.037);SALL4特异性CTL免疫反应频率与MAGE-A1呈现弱的正相关性(r=0.471,P=0.000).结论 食管鳞癌患者可对肿瘤特异性抗原SALL4和MAGE-A1多肽产生特异性T细胞免疫反应,并可为食管鳞癌免疫治疗的临床应用提供线索.

目的 探讨癌/睾丸抗原TEX14与乳腺癌转移及患者预后的关系.方法 利用Oncomine网站对目前已知的所有癌/睾丸抗原(CTAs)、促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2及抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1在侵袭性和非侵袭性乳腺导管癌中mRNA表达情况进行筛查和分析.利用免疫组化方法检测乳腺癌组织标本的癌细胞TEX14蛋白表达情况.利用TCGA数据库1102例乳腺癌样本mRNA高通量测序数据,分别对TEX14与多个乳腺癌转移相关基因mRNA表达量进行相关性分析.采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验法分析TEX14的表达与乳腺癌患者预后的关系.结果 与非侵袭性乳腺导管癌相比,在侵袭性乳腺导管癌中,86个CTAs mRNA表达量升高,其中TEX14升高倍数最大为3.344倍(P<0.05);促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2 mRNA表达量升高,且与TEX14的表达呈正相关(P<0.05);抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1 mRNA表达量降低,且与TEX14的表达呈负相关(P<0.05).进一步利用免疫组化实验证明,与无转移组相比,有转移组乳腺癌细胞TEX14阳性细胞率升高1.5倍(P<0.05).TEX14高表达组乳腺癌患者总生存期较低表达组明显缩短(P<0.05).结论 癌/睾丸抗原TEX14在侵袭转移性乳腺癌中高表达,与患者的不良预后相关,为进一步研究TEX14可促进乳腺癌转移提供了实验依据.

目的 探讨癌/睾丸抗原TSP50在宫颈上皮内瘤变发展过程中可能介导的作用,为完善其病理机制提供数据支撑.方法 体外培养End1/E6E7细胞,设立对照组(不接受刺激的End/E6E7)、空质粒组(转染空质粒)、TSP50shRNA干扰组(转染包涵TSP50的慢病毒).脂多糖(LPS)干预8h后,使用免疫蛋白印记(WB)实验检测TSP50的表达情况以及由其引起的变相关蛋白IKB-α、TLR4、P65、MMP-2的表达水平;免疫荧光实验检测增殖相关标记物Ki67及上皮细胞间质化标记物N-cadherin的变化;使用real-time PCR检测雌激素代谢相关酶COMT、CYP17的表达变化.连续培养14 d,采用克隆集落形成实验检测细胞增殖活性的变化.结果 LPS干预8h后,相比于对照组,TSP50shRNA干扰组TSP50、TLR4、P65、MMP-2蛋白表达降低,IKB-α蛋白表达升高;COMT、CYP17A的mRNA表达升高;Ki67表达降低,N-cadherine表达升高;各指标组间差异有统计学意义(P＜0.05).连续培养14 d后,TSP50shRNA干扰组集落克隆数目明显减少(P＜0.05).结论 TSP50在宫颈上皮内瘤变的发生过程中可能起到促进作用,其机制可能与促进细胞增殖和调节雌激素代谢有关.

1 病例资料患者男性,69岁,因"右上腹疼痛反复发作伴腹胀"于2015年11月18日入本院,既往史:20年前因外伤脾破裂行脾切除术;否认肝炎、结核等传染病史,无吸烟饮酒嗜好,无家族遗传病史;患者又诉右侧阴囊部坠胀疼痛,体质量减轻1 个月,查体:右上腹轻压痛,无反跳痛,胆囊未触及,Murphy征阳性;腹部未触及肿块,左上腹可见一长约7 cm手术瘢痕;右侧阴囊触痛明显,睾丸体积明显增大,质硬,边缘尚光滑,睾丸与附睾界限不清,无压痛;B超示胆囊炎、胆石症;中下腹CT示:升结肠的平脐部可见环形增厚,考虑升结肠癌;结肠镜示:升结肠中段环形肿物,表面呈菜花样,质脆易出血;血清 CA19 -9、CEA 及CA72-4升高,前列腺特异抗原( PSA )正常;彩超示:右侧睾丸内实性结节,结构不清晰,右侧阴囊内实性肿物,血流信号丰富;肝肺未发现异常,分别行胆囊、右半结肠、右侧睾丸及附睾、左侧睾丸及睾丸旁硬结切除术送病理,术后病理,(1)大体观:胆囊一条,长约6 cm,周径约6.2 cm,胆囊腔内可见直径0.7 cm灰褐色结石一枚,胆囊体部外膜可见灰黄色肿物突起,大小约1.6 cm ×0.7 cm ×0.4 cm,切面灰黄,质硬脆:升结肠癌切除标本,长约30 cm,距肛侧端约14 cm处可见一隆起溃疡型肿物,大小约5.0 cm ×4.5 cm ×4.0 cm,底深约1.0 cm,切面灰白,质韧脆,局部呈胶冻状,肠系膜可触及肿大淋巴结,最大者直径约1 .8 cm;右侧睾丸、附睾及肿物组织,总体积约3.0 cm ×2.5 cm × 1.4 cm,切面灰白质硬,边缘睾丸组织萎缩,与附睾分界不清;左侧睾丸及结节状肿物一块,大小约2.2 cm ×1.5 cm ×1.2 cm,肿物切面灰白质硬,周围睾丸组织萎缩.