目的 建立不同产地白屈菜Chelidonium majus的HPLC指纹图谱及多指标含量测定方法,综合评价不同产地白屈菜药材质量,为其进一步研究和开发提供依据.方法 采用Agilent Extend C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相为0.1％磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长284 nm,柱温25 ℃,进样量10μL.采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立4个主产地19批次白屈菜药材的HPLC指纹图谱并分析相似度.使用Origin2022软件进行聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、SIMCA-14.1软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA).通过对照品比对指认指标成分并定量测定,结果采用化学模式识别、箱线图以及熵权TOPSIS法进行综合评价.结果 19批次白屈菜HPLC指纹图谱共匹配出16个共有峰,指认出白屈菜碱、盐酸黄连碱、紫堇碱、盐酸血根碱和白屈菜红碱.指纹图谱相似度范围为0.745～0.983.HCA将19批白屈菜分为4类;PCA得到5个主成分的累积方差贡献率为84.758％;PLS-DA表明盐酸血根碱和白屈菜红碱等5个成分是不同产地白屈菜药材质量差异的标志性成分.白屈菜碱、盐酸黄连碱、紫堇碱、盐酸血根碱、白屈菜红碱质量分数分别为0.658～1.547、0.718～2.577、0.029～0.108、0.095～0.527、0.069～0.253mg/g.箱线图与熵权TOPSIS法评价均表明辽宁和陕西产地的白屈菜药材综合质量较优.结论 所建立的白屈菜药材HPLC指纹图谱方法分离度好,操作简单;含量测定方法具有较好的稳定性和重复性,可为白屈菜药材质量控制与进一步研究提供参考依据.

通过分析不同生长年限、不同采收月份、不同部位的两面针栽培品主要药效成分含量的变化规律,并与野生品比较,确定两面针的最佳采收期和合理药用部位.采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Kinetex C18(4.6 mm×100 mm,2.6 μm),流动相为 0.2%三乙胺的 0.3%磷酸水溶液-乙腈(80∶20),流速 1.0 mL·min-1,检测波长 273 nm,柱温 30℃,以主要药效成分氯化两面针碱和白屈菜红碱为指标,对两面针样品进行含量测定.结果表明野生与栽培两面针根的主要药效成分含量无显著性差异,栽培两面针根与根+茎无显著性差异;由层次聚类分析(HCA)与主成分分析(PCA)结果说明两面针根与茎能明显区分,但无法区分野生与栽培品,与显著性分析结果一致;1～6 年两面针根的氯化两面针碱和白屈菜红碱质量分数之和为0.114%～0.256%,茎 0.030%～0.133%,主要药效成分含量与生长年限呈正相关;4 个季节采样均无显著性差异,说明采收季节对两面针主要药效成分含量无影响;3 个种植基地的两面针(不含枝)以干燥品计算氯化两面针碱和白屈菜红碱含量之和,云浮为 0.308%±0.123%,茂名为 0.192%±0.025%,南宁为 0.197%±0.052%,3 个种植基地均≥0.15%,即移栽 2 年 6 个月以上的两面针同时以根(含须根、主根和地下茎)和茎(地上茎)入药可满足要求.综上,两面针栽培品可以作为两面针野生品的合理替代,为实现两面针资源的可持续开发与应用提供保障;根与茎均可作为两面针的药用部位,建议《中国药典》两面针的药用部位修订为干燥根和茎,全年均可采挖.为保障有效成分含量及临床有效性,建议采收移栽3年以上的两面针根和茎入药.

目的 基于体外耐药细胞模型,研究白屈菜-元胡药对(Chelidonii Herba-Corydalis Rhizoma drug pair,CMCR)逆转乳腺癌阿霉素(adriamycin,ADR)耐药药效物质.方法 运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对CMCR不同配伍比例(1∶1、2∶1)95％、80％、70％、60％、50％乙醇提取部位的化学成分进行表征,确定共有成分;以人乳腺癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/ADR)为研究对象,采用CCK-8法检测ADR联合CMCR各提取部位对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,计算耐药倍数;利用灰色关联度、Pearson相关性分析和偏最小二乘回归分析建立表征图谱中共有成分峰面积与逆转耐药倍数的相关性,筛选出CMCR最佳逆转耐药活性部位及相关药效物质.采用荧光显微镜观察白屈菜碱联合延胡索乙素作用细胞后罗丹明123累积量的影响;Western blotting和qRT-PCR法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)蛋白和基因表达.结果 CMCR 10个提取部位分析得到30个共有成分.CMCR(1∶1)95％乙醇提取部位对ADR的逆转耐药活性最强,其逆转耐药倍数为11.08.根据相关性分析结果初步确定白屈菜碱、延胡索乙素、小檗碱、二氢血根碱和白屈菜红碱为CMCR逆转乳腺癌ADR耐药的潜在药效物质.选择药效相关性最高的白屈菜碱和延胡索乙素联合进行实验验证,发现白屈菜碱-延胡索乙素能够增加细胞内罗丹明123累积,显著下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和LRP蛋白和基因表达(P＜0.01、0.001).结论 阐明了CMCR逆转乳腺癌阿霉素耐药的药效物质,为其临床应用及后续抗肿瘤辅助用药开发奠定了基础.

目的:探讨白屈菜红碱(CHE)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,阐明其相关作用机制.方法:体外培养SKOV3细胞,分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0 μmol·L-1 CHE组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率.体外培养SKOV3细胞,分为对照组、转移生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+5 μmol·L-1 CHE组和TGF-β1+10 μmol·L-1 CHE组,采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度.结果:MTT法,与对照组比较,5.0、10.0、20.0和 40.0 μmol·L-1 CHE组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01).细胞划痕实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移率明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5 μmol·L-1 CHE组和 TGF-β 1+ 10 μmol·L-1 CHE组细胞迁移率明显降低(P<0.01).Transwell小室实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05);与TGF-β1 组比较,TGF-β1+5 μmol·L-1 CHE组和TGF-β1+10 μmol·L-1 CHE组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01).Westren blotting法,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+ 5 μmol·L-1 CHE组和TGF-β1+10 μmol·L-1 CHE组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01).免疫荧光染色,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin荧光强度明显降低,N-cadherin荧光强度明显升高;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5 μmol·L-1 CHE组和TGF-β1+10 μmol·L-1 CHE组细胞中E-cadherin荧光强度明显升高,N-cadherin荧光强度明显降低.结论:CHE能够抑制人卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT.

目的:定性分析岩黄连总碱化学成分,并对其中8个含量较高的生物碱类成分进行定量分析.为研究岩黄连总碱的药效物质基础提供依据,也为岩黄连总碱质量控制提供参考.方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)定性分析岩黄连总碱化学成分,并用高效液相色谱法(HPLC)同时测定岩黄连总碱中原阿片碱、非洲防己碱、延胡索乙素、黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀、小檗碱和白屈菜红碱的含量.结果:岩黄连总碱提取物中共鉴定出38个生物碱类成分,其中原小檗碱类13个,小檗碱类9个.此外,定量分析的8个成分在各自范围内线性良好(r＞0.999 2),加样回收率96.70％～103.8％,RSD 0.68％～1.97％.结论:该方法专属性好,准确性高,可用于岩黄连总碱提取物的定性、定量分析.

目的:为解释博落回中4个生物碱(原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱)生物利用低的原因,对这四个生物碱在模拟人工胃肠道环境下的稳定性进行考察.方法:采用HPLC测定博落回中4个生物碱在不同pH缓冲液、人工胃液(pH=1.3)和人工肠液(pH=6.8)中的稳定性.结果:原阿片碱和别隐品碱在酸性、中性、碱性、人工胃液及人工肠液环境下8h回收率为97.16％ ～ 101.89％;血根碱在pH =6.8磷酸盐缓冲液、水、pH =7.8 ～8.0磷酸盐缓冲液及人工肠液中8h回收率为48.81％～60.53％;白屈菜红碱在pH =5.8磷酸盐缓冲液、pH =6.8磷酸盐缓冲液、水及人工肠液中8h的回收率为81.21％ ～93.48％;在pH =7.8 ～8.0磷酸盐缓冲液中8h回收率为57.43％.结论:原阿片碱和别隐品碱的稳定性不受pH的影响,血根碱和白屈菜红碱随pH升高稳定性降低,博落回中4个生物碱在模拟人工胃肠道环境中的稳定性结果与其在不同pH环境中一致,为阐明博落回散在体内的药代动力学特点提供科学依据.

目的:比较博落回属植物博落回和小果博落回不同部位中生物碱随生长期积累的动态量化规律,为博落回属资源品质评价和合理利用提供依据.方法:采用HPLC对不同药用部位中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的含量进行测定,并对数据进行比较分校.结果:在根、茎、叶和果实不同部位中,两种植物的果实中生物碱类化合物量均为最多;茎中积累生物碱的量最少;根中积累较多的原阿片碱;生物碱在叶中的积累具有显著的种属特异性;另外,小果博落回果实中别隐品碱的量远高于其他生物碱.结论:该研究为博落回属植物资源的综合利用提供了有力的科学依据,由于生物碱类成分在该属植物中的累积具有种属特异性,在植物资源利用方面需要综合考虑具体的药用部位及其生物量.

目的:研究博落回叶的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构.结果:从博落回新鲜叶的乙醇提取物中分离纯化得到14个生物碱,分别鉴定为:原阿片碱(1)、别隐品碱(2)、血根碱(3)、白屈菜红碱(4)、去甲基白屈菜红碱(5)、去氢紫堇碱(6)、N-甲基四氢黄连碱(7)、黄柏碱(8)、6-甲氧基去甲基血根碱(9)、6-氰基二氢血根碱(10)、6-氰基二氢白屈菜红碱(11)、6-丙酮基二氢血根碱(12)、二氢血根碱(13)、二氢白屈菜红碱(14).结论:其中化合物5～9为首次在博落回属植物中分离得到.

目的:研究博落回根中的生物碱成分.方法:采用硅胶柱色谱、重结晶、半制备液相色谱制备化合物,利用NMR、MS等波谱技术鉴定化合物结构.结果:从博落回根的乙醇提取物中分离得到9个生物碱类化合物,分别为二氢白屈菜红碱(1), 6-氰基二氢血根碱(2),R-6-((R)-1-hydroxyethyl)dihydrochelerythrine(3),碎叶紫堇碱(4),四氢小檗碱(5),8-去甲基二氢白屈菜红碱(6),8-去甲基白区菜红碱(7),原阿片碱(8),别隐品碱(9).结论:化合物4~6首次在博落回属植物中分离得到.

目的 白屈菜临床用于肿瘤治疗,具有良好的疗效,且毒副作用小.运用网络药理学方法筛选白屈菜有效部位和主要活性成分,构建活性化合物-靶点网络,对其抗肿瘤作用的分子机制进行科学阐释.方法 采用ADME计算方法筛选白屈菜活性成分,通过文献挖掘、多个数据库联用检索收集白屈菜活性成分与潜在靶点,并利用SysDT模型对化合物靶点进行筛选.利用Cytoscape软件构建化合物-靶点网络并进行网络拓扑学分析,通过生物学信息注释数据库(DAVID)分析靶点基因功能及信号通路.结果 生物碱是白屈菜抗肿瘤主要活性成分,通过ADME方法筛选出21种生物碱类成分,相关靶点168个,肿瘤相关通路60条,整合相关通路绘制了白屈菜抗肿瘤通路.根据网络拓扑学分析结果以及成分修正结果推测,白屈菜红碱、小檗碱和血根碱为白屈菜主要活性成分,作用于PTGS2、SCN5A、F10、NCOA2、CHRM3、AR、TP53、CASPl/3/9、DRD1、MAPT、MAPK1和BLM等关键靶点.结论 白屈菜主要通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖、转移和侵袭等多表型干预的网络模式产生作用,从而发挥抗肿瘤活性,且具有一定的中枢镇痛作用.