目的:探讨岩黄连总生物碱能否通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制M2 型巨噬细胞发挥抗小鼠H22 肝癌细胞实体瘤生长作用.方法:建立小鼠H22 肝癌细胞实体瘤模型,岩黄连总生物碱高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)给药10 d后,称量瘤体及脾脏、胸腺质量,计算脏器系数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变,RT-qPCR检测瘤组织M2型巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达.体外培养RAW264.7细胞,用IL-4、IL-13(20 ng/mL)诱导细胞M2极化,岩黄连总生物碱高、中、低浓度(25、12.5、6.25 μg/mL)干预24 h,流式细胞仪检测CD206阳性表达;RT-qPCR检测CD206、Arg-1、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7 细胞内PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达.结果:动物实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中剂量H22 肝癌细胞实体瘤的生长受到抑制,脾脏系数与胸腺系数显著升高(P<0.05),HE染色切片中肿瘤细胞浸润数减少,区域坏死肿瘤组织中CD206 mRNA表达显著降低(P<0.05 或P<0.01).细胞实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中浓度组M2型巨噬细胞标志物CD206阳性表达及CD206、Arg-1、IL-10 mRNA和通路PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05 或P<0.01).结论:岩黄连总生物碱可通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗小鼠H22 肝癌细胞实体瘤生长作用.

目的 研究岩黄连总生物碱对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的保护作用及机制.方法 通过向SD大鼠腹腔给予 30%CCl4 橄榄油溶液(0.1 mL/100 g)诱导复制肝纤维化模型,2次/周,连续 12周.将肝纤维化大鼠随机分为模型组,岩黄连总生物碱低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)组及联苯双酯(30 mg/kg)组,另设正常组大鼠,各组均为 8 只.各给药组于造模第 11 周按设定剂量灌胃相应药物(1.0 mL/100 g)干预,1次/d,连续 2周.正常组与模型组大鼠每天灌胃等体积的生理盐水.末次给药 24h后,收集大鼠血清、肝脏及脾脏组织,测定大鼠肝脾指数;采用HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化.比色法检测各组血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量;通过ELISA检测血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(type Ⅲ procollagen,PCⅢ)及Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ,Ⅳ-C)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平.结果 与正常组相比,模型组大鼠反应迟钝,肝脾指数增大(P<0.01),肝组织呈现明显纤维化,血清ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ和Ⅳ-C水平显著升高(P<0.01),血清TP、ALB、SOD及GSH-Px水平显著下降(P<0.01);血清中TGF-β1、IL-1β、IL-8 及IL-6 蛋白表达水平显著上调(P<0.01).与模型组比较,岩黄连总生物碱中、高剂量组均能明显改善大鼠状态和肝脾指数(P<0.05,P<0.01),有效调节大鼠肝组织病理学损伤和纤维增生;显著降低大鼠血清ALT、AST、MDA含量(P<0.01),明显提高血清TP、ALB、SOD及GSH-Px的表达水平(P<0.05,P<0.01);并能明显下调LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C、TGF-β1、IL-1β、IL-8 及IL-6 蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01).结论 岩黄连总生物碱具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与抗氧化、抑制炎症因子表达相关.

目的:探讨岩黄连总碱对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制.方法:体外培养人牙龈成纤维细胞,分为对照组(NC组)、Pg-LPS组、5 μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS 组、10 μg/ml 岩黄连总碱+Pg-LPS 组、20 μg/ml 岩黄连总碱+Pg-LPS 组、miR-NC+Pg-LPS 组、miR-223+Pg-LPS 组、anti-miR-NC+Pg-LPS 组、anti-miR-223+Pg-LPS 组、20 μg/ml 岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-NC组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-223组.采用EDU、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;RT-qPCR法检测miR-223的表达量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)、pro-caspase-3、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)蛋白表达.结果:岩黄连总碱(5、10、20 μg/ml)和下调miR-223表达可显著升高Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖活力和pro-caspase-3蛋白表达水平,降低细胞凋亡率、IL-1β 和TNF-α水平以及Cleaved-caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平(均P＜0.05).过表达miR-223可逆转岩黄连总碱对Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的作用.结论:岩黄连总碱可通过下调miR-223表达而抑制PI3K/AKT信号通路从而促进Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖,并抑制细胞凋亡和炎性反应.

目的:定性分析岩黄连总碱化学成分,并对其中8个含量较高的生物碱类成分进行定量分析.为研究岩黄连总碱的药效物质基础提供依据,也为岩黄连总碱质量控制提供参考.方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)定性分析岩黄连总碱化学成分,并用高效液相色谱法(HPLC)同时测定岩黄连总碱中原阿片碱、非洲防己碱、延胡索乙素、黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀、小檗碱和白屈菜红碱的含量.结果:岩黄连总碱提取物中共鉴定出38个生物碱类成分,其中原小檗碱类13个,小檗碱类9个.此外,定量分析的8个成分在各自范围内线性良好(r＞0.999 2),加样回收率96.70％～103.8％,RSD 0.68％～1.97％.结论:该方法专属性好,准确性高,可用于岩黄连总碱提取物的定性、定量分析.

目的:研究岩黄连总碱(CSBTA)对巨噬细胞Ml型分化的影响.方法:THP-1细胞经佛波脂(PMA)刺激48 h诱导分化为巨噬细胞(Mψ).倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测巨噬细胞表面分子CD11b、CD14;加入脂多糖(LPS,1 μg/mL)、γ干扰素(IFN-γ,20ng/mL)刺激48h诱导Mψ巨噬细胞分化为Ml型巨噬细胞.不同浓度(0.002 5 g/L-0.02 g/L)CSBTA干预Ml型巨噬细胞24h.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6mRNA相对表达量,Western blotting法检测Ml型巨噬细胞CD86蛋白表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中IL-1β的含量.结果:0.02 g/L的CSBTA对Ml型巨噬细胞活力产生明显的毒性作用(P<0.05).在0.002 5 g/L、0.005 g/LCSBTA的干预下,M1型巨噬细胞IL-6和TNF-αmRNA相对表达量、CD86蛋白表达量及IL-1β含量均显著降低(均P<0.05).结论:CS-BTA可以有效抑制THP-1源性巨噬细胞M1型的分化,并改善炎症环境.

目的 研究岩黄连总碱对高糖高脂饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠的治疗作用.方法 随机取C57BL/6小鼠7只设置为对照组,喂以正常饲料;造模小鼠给予高脂饮食和高糖饮水(含20％果糖水),连续喂养10周;将造模小鼠按体质量随机分为模型组、盐酸二甲双胍(阳性药,200 mg/kg)组和岩黄连总碱低、高剂量(25、100 mg/kg)组,继续饲以高脂高糖饮食,连续ig给药5周.记录小鼠体质量,取肝脏并拍照,测定小鼠肝脏质量,计算肝脏指数;应用血糖仪测定小鼠空腹血糖(FBG)及口服糖耐量(OGTT);试剂盒法测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及游离脂肪酸(NEFA)的水平;取肝组织进行HE染色、油红O染色和Masson染色;Western blotting检测肝组织中AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝脏指数显著升高;给药后小鼠体质量及肝脏指数显著下降(P＜0.05、0.01).与模型组比较,岩黄连总碱显著降低小鼠的FBG及OGTT水平(P＜0.01);显著降低血清TC、TG、LDL-C及NEFA水平(P＜0.01);显著改善小鼠肝组织脂肪变及纤维化;显著上调MAFLD小鼠肝组织p-AMPK、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P＜0.01).结论 岩黄连总碱对MAFLD发挥显著治疗作用,其作用机制可能与通过激活AMPK/PI3K/Akt信号通路,减轻肝脏脂质沉积有关.

目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中脱氢卡维丁的浓度,研究不同剂量岩黄连总碱胶囊在中国健康受试者多次给药后的药动学.方法:采用随机、开放、多剂量给药设计的方法.16名健康志愿者随机分为2个剂量组(2 400 mg和3 200 mg),男女各半,每组8例,分别多次口服岩黄连总碱胶囊,每日1次,连续7 d,第7天在给药前及给药后不同时间点采取血样本.血浆样品以乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(3.0 mm×100 mm,3.5 μm),流动相为0.2％甲酸水溶液(含1 mmol·L-1甲酸铵)∶乙腈(30∶70,V/V),ESI离子源,正离子扫描,MRM检测模式.检测离子:m/z 350.3→334.3(脱氢卡维丁);m/z 272.2→171.3(右美沙芬).利用WinNonlin 8.0软件计算药动学参数.结果:脱氢卡维丁线性范围为0.015～3 ng·mL-1,定量下限为0.015 ng·mL-1,方法学的各项指标均符合要求.2个剂量组(2 400 mg和3 200 mg)多次给药后的主要药动学参数分别为tmax:(1.75±1.04),(2.06±0.98)h;t1/2:(31.59±17.32),(35.98±14.46)h;AUC0-t:(2.637±0.504),(3.150±0.485)ng·h·mL-1;AUC0-∞:(5.512±1.792),(7.649±3.306)ng·h·mL-1.结论:本研究建立的 LC-MS/MS测定法简便、灵敏,可用于岩黄连总碱胶囊的人体药动学研究.

目的 研究岩黄连Corydalis saxicola总碱对胰岛素抵抗小鼠的影响及作用机制.方法 高脂饮食喂养诱导胰岛素抵抗小鼠,造模成功后给予岩黄连总碱4周,观察岩黄连总碱对胰岛素抵抗小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素、口服糖耐量(oral glucose tolerance test,OGTT)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、瘦素、脂联素(adiponectin/ADPN,ADP/Acrp30)及肝糖原水平的影响;利用Western blotting检测肝组织中磷酸烯醇式丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、叉头框蛋白 O1(Forkhead box protein O1,FoxO1)、p-FoxO1、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、p-GSK-3β、胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt蛋白表达情况.结果 岩黄连总碱可以显著降低胰岛素抵抗指数(P＜0.01),改善糖耐量(P＜0.01),降低血清中 TCH、TG、GSP、LDL-C、瘦素水平(P＜0.01),升高 HDL-C、ADP/Acrp30 水平(P＜0.05),促进肝糖原合成(P＜0.01),激活InsR/PI3k/Akt通路(P＜0.05).结论 岩黄连总碱可以改善高脂诱导的小鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与激活InsR/PI3K/Akt通路有关.