白芍是临床常用中药之一,有养血调经、柔肝止痛、平抑肝阳、敛阴止汗之功.白芍的化学成分主要有单萜类及其苷类化合物、三萜类化合物、黄酮及其苷类化合物、苯乙醇苷类、鞣质类、挥发油类、多糖类和微量元素等,具体药理作用有脑缺血后损伤保护、保护心肌细胞、保护神经抗抑郁、保肝、保护胃肠黏膜、调节胃肠功能、抗炎、抗肿瘤、调节自身免疫等.近年来对于白芍的药理作用研究取得了显著进展,但对其药理作用的机制研究还不够深入,未来应采用液相色谱-质谱联用等现代分析技术,通过分子生物学、细胞生物学等手段,全面分析白芍的化学成分,深入研究其药理作用机制.

目的:运用网络药理学和分子对接分析枳实-白芍药对镇痛的作用机制.方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台检索枳实、白芍的有效成分及对应靶点,GeneCards、DisGeNet以及OMIM数据库检索疼痛相关基因靶点,取两者交集靶点,借助STRING数据库构建蛋白互作网络图,应用Cytoscape3.9.1软件筛选核心靶点,构建"药物-成分-靶点"网络图.通过DAVID数据库对共同靶点进行GO和KEGG通路富集分析.通过AutoDock 1.5.7对主要成分和核心靶点进行分子对接.结果:经筛选获得药物有效成分16个,药物与疾病共同靶点75个,其中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(serine/threonine-protein kinase 1,AKT1)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)等17个核心靶点可能是枳实-白芍药对镇痛的关键靶点.GO生物学过程主要涉及基因表达正调控、对外源性刺激的反应、脂多糖介导的信号通路等,KEGG信号通路主要涉及TNF信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3 kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)信号通路、癌症通路等.分子对接结果显示主要成分与核心靶点结合较好.结论:枳实-白芍药对中的木犀草素、山柰酚、柚皮素等有效成分可能通过作用于TNF、IL-6、AKT1、VEGFA、TP53等靶点来调节TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症通路等通路发挥镇痛作用.

基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体信号通路探讨白芍总苷胶囊(total glucosides of White Paeony Capsules,TGP)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型小鼠的改善作用及分子机制.在小鼠原代骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)上建立NLRP3 炎症小体活化模型,通过蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、免疫荧光染色、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和流式细胞术探究其分子机制.将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、TGP 组、模型组(LPS组)、LPS+TGP 低剂量组、LPS+TGP高剂量组、LPS+MCC950 组、LPS+MCC950+TGP 组,每组 8 只,建立小鼠 ALI模型.最后,收集肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fluid,BALF)以及肺组织.测定各组小鼠肺指数及肺重湿干比,通过苏木精-伊红(HE)染色技术分析肺部组织的病理学变化,使用流式细胞术检测各组BALF中中性粒细胞数量,采用ELISA法测定BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time,RT-qPCR)法测定肺组织中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的基因表达.结果表明TGP通过抑制上游线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen spe-cies,mtROS)的产生以及随后的凋亡相关斑点(apoptosis-associated speck,ASC)的寡聚化,显著阻断了NLRP3 炎症小体的激活.此外,在小鼠ALI模型中,与空白组相比,模型组肺组织出现肺泡结构破裂,肺泡间隔增厚,肺指数及肺重湿干比明显增高,中性粒细胞数量显著增加,炎性因子水平明显升高;与模型组相比,TGP和MCC950 各组的肺组织病理形态明显改善,肺指数和肺重湿干比明显减低,中性粒细胞数量显著减少,炎性因子水平显著下调;值得注意的是,与MCC950 组相比,MCC950+TGP组效果无明显差异.综上,该研究揭示了白芍总苷胶囊可能是通过抑制NLRP3 炎症小体的激活从而改善小鼠ALI,也提供了一种安全有效的防治ALI/ARDS的候选药物.

通过实验研究心舒宝片全方及其单味药肠吸收液对抗炎、血管舒张和心肌保护的影响,并结合网络药理学阐明其潜在作用机制,Western blot进一步验证潜在核心靶点的表达情况.脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7 细胞产生炎症因子观察抗炎作用,离体微血管活性实验观察血管舒张作用,氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤H9c2 细胞实验观察心肌保护作用.使用Herb数据库结合心舒宝片肠吸收液成分信息,获得心舒宝片化学成分,SwissTargetPrediction数据库查找成分作用靶点;GeneCards数据库查询抗炎、血管舒张和心肌保护相关的靶点.药物靶点分别与各疾病靶点以及疾病总靶点取交集后,进行蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)分析,得到核心靶点,最后将四者交集核心靶点导入Cyto-scape 3.9.1 进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析.抗炎实验表明心舒宝片全方和各单味药均有抗炎作用,以郁金抑制肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的作用最强,以丹参抑制白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的作用最强.离体微血管舒张实验表明心舒宝片、郁金和山楂均有血管舒张作用,单味药以山楂最强.心肌保护实验表明心舒宝片全方、丹参、刺五加和白芍均具有心肌保护作用,单味药以丹参最强.网络药理学研究结果表明除全方外,抗炎作用以丹参活性成分最多,血管舒张和心肌保护作用以郁金活性成分最多,丹参次之.心舒宝片发挥抗炎、血管舒张和心肌保护作用的核心靶点为内皮型一氧化氮合酶 3(nitric oxide synthase 3,NOS3),并用Western blot实验验证表明心舒宝片可显著增加OGD损伤H9c2 细胞NOS3 表达水平.GO生物学过程分析主要与细胞脂质输出、血压调节和炎症因子等有关;KEGG通路富集分析主要涉及AGE-RAGE信号通路和HIF-1信号通路等.

本实验创新性采用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4 )腹腔注射联合甲状腺片灌胃构建化学性肝损伤肝阴虚证病证结合模型，通过观察白芍多糖对肝阴虚证模型大鼠证候表征以及内分泌、能量代谢等相关指标的影响，进一步探讨白芍多糖治疗肝损伤肝阴虚证疗效和作用机制，为课题组后续相关实验研究提供了新的研究角度及相关数据支持。 文章造模方法可靠，方法学设计有很好的创新性，统计学表述规范，写作表达全面。

为揭示河西干旱区白芍干物质积累及营养元素吸收特征和药效成分累积规律,明确影响药效成分积累的营养元素种类,科学制定白芍施肥方案和规范化种植,以甘肃省古浪县古丰镇芍药产业基地4年生白芍为研究对象,通过田间试验测定白芍不同生长期干物质积累特征以及根中9个营养元素含量和3类药效成分含量,并分析白芍根中有效成分含量与营养元素的相关性.结果表明,(1)随着生育期延续,白芍根部干物质积累先下降后上升,全株干物质积累量逐渐增加,出苗后90～130 d是白芍干物质积累最快的时期,占总积累量的79.29％,是白芍生长的关键时期.(2)白芍地上部氮、钾含量总体呈下降趋势,而磷素含量总体呈明显增加趋势,而根部氮、磷含量总体呈减少趋势,钾含量变化不明显;地上部和根氮累积总量分别在出苗后130 d和150 d达到最高,地上部磷积累量在出苗后150 d达到最大,根部磷积累量分别在出苗后30 d、150 d达到高峰,地上部和根部钾积累量分别在出苗后70 d和150 d达到高峰.地上部氮、钾含量在不同生长时期均高于根部,其磷含量则在出苗后90 d前低于根部,在出苗后110 d后高于根部.(3)白芍根中芍药苷、芍药内酯苷积累量均先升高后降低,最后趋于稳定,多糖积累量表现为高-低-高的变化趋势.(4)芍药苷含量与氮、钙、铜含量均呈极显著正相关,与钾含量呈显著正相关,芍药内脂苷含量与氮、钾、钙、铜含量均呈极显著正相关,而芍药多糖与各营养元素含量之间没有相关性.可见,白芍氮、磷、钾营养最大效率期在出苗后110～150 d,适时追加氮、钾肥有利于根部生物量的积累,施肥中添加Ca、Cu元素能有效促进白芍药效成分的积累;河西冷凉山区白芍宜在9月中下旬(9月16日以后)采挖.

目的 在建立肝阴虚证病证结合实验模型的基础上,研究白芍多糖对大鼠化学性肝损伤肝阴虚证证候表征及内分泌/能量代谢的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,适应性喂养一周后,根据体质量随机区组法分为空白组、模型组、一贯煎组、白芍多糖组.除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射浓度 20%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)橄榄油溶液,联合甲状腺片30 mg/kg同时灌胃给药,连续6 周.6 周后观察大鼠体质量、易激惹程度、毛发光泽度、小便颜色、大便颜色及质地等并进行评分,测量体质量、肛温、舌面干湿度、摄食量、摄水量,测定血清环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量,计算cAMP/cGMP比值.测定血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aliquot aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)的含量变化并取肝脏进行苏木精—伊红染色病理切片检查;测定血清睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、皮质类固醇(crticosteroid,COR)水平,测定肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性.结果 与模型组相比,白芍多糖组大鼠大便评分升高(P<0.01),其余体征评分均显著下降(P<0.01);白芍多糖组体质量均有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05);实验第 2、4 周,白芍多糖组肛温下降(P<0.01);白芍多糖组舌面干湿度上升(P<0.01),24 小时摄食量、饮水量无统计学差异(P>0.05);白芍多糖组血清cAMP降低,cGMP升高,cAMP/cGMP下降(P<0.01),ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL均下降(P<0.01),TBA含量降低但无统计意义(P>0.05);病理染色显示肝组织结构中度异常,视野内部分肝细胞轻度脂肪变性,胞质内可见大量小空泡,部分肝细胞气球样变性,肝实质内少量炎症细胞浸润,且未见明显炎症细胞浸润,肝脏组织病理状态有所恢复.白芍多糖组血清 E2 水平降低,COR水平升高(P<0.05,P<0.01),T 水平升高但差异无统计意义(P>0.05);白芍多糖组肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均降低(P<0.01).结论 白芍多糖能有效保护肝阴虚型化学性肝损伤,调节环核苷酸、内分泌紊乱和能量代谢亢进,这可能是白芍发挥保护肝损伤肝阴虚证的作用机制之一,从一定程度上揭示了白芍养肝阴的科学内涵.

本实验创新性采用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4 )腹腔注射联合甲状腺片灌胃构建化学性肝损伤肝阴虚证病证结合模型，通过观察白芍多糖对肝阴虚证模型大鼠证候表征以及内分泌、能量代谢等相关指标的影响，进一步探讨白芍多糖治疗肝损伤肝阴虚证疗效和作用机制，为课题组后续相关实验研究提供了新的研究角度及相关数据支持。 文章造模方法可靠，方法学设计有很好的创新性，统计学表述规范，写作表达全面。

目的 基于肠道菌群变化研究白芍苷治疗坏死性小肠结肠炎新生大鼠效果.方法 60只新生雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只:空白对照组,模型组,阳性药组,白芍苷低剂量组,白芍苷中剂量组,白芍苷高剂量组.除空白对照组外,其余组均采用人工喂养+缺氧、复氧、冷刺激+脂多糖灌胃构建坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型.空白对照组和模型组每天灌胃生理盐水0.1 mL;阳性药组每天灌胃利福昔明50 mg/kg;白芍苷低剂量组每天灌胃3 mg/kg;白芍苷中剂量组每天灌胃6mg/kg;白芍苷高剂量组每天灌胃9 mg/kg.每组连续灌胃两周.Elisa检测血清Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α,免疫组织化学检测结肠组织ZO-1、Occludin表达,RT-PCR检测结肠组织ZO-1、Occludin mRNA,应用16S r DNA技术研究各组大鼠肠道菌群丰度和多样性的变化情况,以及观察在白芍苷干预后肠道菌群的恢复情况.结果 与空白对照组相比,模型组ZO-1、Occludin mRNA和蛋白水平明显降低(P＜0.05),血清中Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α水平显著增加(P＜0.05).与模型组相比,阳性药组、白芍苷低、中、高剂量组ZO-1、Occludin mRNA和蛋白水平显著上升(P＜0.05),血清中Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α 水平显著下降(P＜0.05),与空白对照组比,模型组 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides、Oscillibacter 丰度降低,Desulfovibrio、Akkermansia、Escherichia、Enterococcus 丰度升高;与模型组 比较,白芍苷组 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides 丰度升高,Desulfovibrio、Akkermansia、Parasutterella、Enterococcus 丰度相对降低.结论 白芍苷能够上调肠道菌群 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides丰度,下调Desulfovibrio、Akkermansia、Parasutterella、Enterococcus丰度,进而上调坏死性小肠结肠炎模型大鼠结肠组织ZO-1、Occludin表达、下调Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α,从而达到治疗坏死性小肠结肠炎的效果.

目的:通过通络止痛方中君药的活性成分桂皮醛(CA)和白芍总苷(TGP)的对滑膜成纤维细胞(FLS)的干预,研究固有免疫系统中TLR2和TLR4及其介导的信号通路的下游产物白介素1β (IL-1β)和基质金属蛋白酶(MMP-13)在骨关节炎滑膜炎性反应中的表达及其相互关系.方法:将高、低浓度的CA和TGP分别对经脂多糖(LPS)活化的FLS进行干预,收集细胞上清采用ELISA法测定IL-1 β和MMP-13的浓度;收集细胞采用流式细胞术测定FLS表面TLR2和TLR4的表达,并分析它们之间的相关性.结果:LPS对滑膜炎性反应有显著的诱导活化作用,高、低CA和TGP均可不同程度抑制IL-1β、MMP-13的释放和TLR2、TLR4的表达,其中CA高浓度组抑制作用最强(P＜0.05).TLR2、TLR4、IL-1β、MMP-13之间均存在显著的正相关性,具体为:TLR2与TLR4(r=0.862,P＜0.05),IL-1β与MMP-13(r=-0.994,P＜0.05),TLR2与IL-1β(r=0.754,P＜0.05),TLR2与MMP-13(r=-0.717,P＜0.05),TLR4与IL-1β(r=0.929,P＜0.05),TLR4与MMP-13(r=0.929,P＜0.05).结论:CA和TGP在通过调控固有免疫应答进程进而抑制滑膜炎性反应的作用,明确了固有免疫效应网中不同环节的元件的相关性,为中药有效成分作用靶点的探寻及未来防治OA有效方案的制定提供数据支持及新的思路.