目的:探究碳黑与镉（cadmium，Cd）复合暴露对人支气管上皮细胞株16HBE细胞蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）通路的影响，及其所致自噬和炎症反应的作用机制。方法:于2022年1月，复苏培养人支气管上皮16HBE细胞。将碳黑纳米颗粒（carbon black nanoparticles，CBNPs）氧化后吸附Cd 2+构建CBNPs-Cd复合物。CCK-8试验检测CBNPs与Cd不同浓度和时间组合暴露对16HBE细胞活力的影响。以2 μg/ml Cd，100 μg/ml CBNPs，100 μg/ml CBNPs+2 μg/ml Cd联合暴露24 h作为后续剂量分组。分别应用透射电镜检测自噬体和自噬溶酶体数量。蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测PERK通路蛋白PERK、真核翻译起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α，eIf2α）、激活转录因子4（activating transcription factor 4，ATF4）、自噬相关蛋白螯合体1（sequestosome 1，SQSTM1）/P62和微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，MAlPILC3，简称LC3）的表达。以基因沉默技术抑制PERK基因后，检测自噬标志蛋白P62、LC3的变化，使用荧光定量PCR技术检测炎症因子白细胞介素-6 （interleukin-6，IL6）、白细胞介素-8 （interleukin-8，IL8）的表达。多组比较采用单因素方差分析，组内两两之间的比较采用 LSD检验；多因素的成分分析采用析因分析。 结果:CBNPs与Cd单独/复合暴露24 h后，16HBE细胞活力变化均无统计学意义（ P>0.05）。与对照组比较，CBNPs与Cd单独/复合暴露组16HBE细胞P62和LC3表达均明显升高（ P<0.05），且复合暴露组较其他组别的自噬体和自噬溶酶体数量增加。与对照组比较，CBNPs和Cd单独暴露对p-PERK/PERK、p-eIf2α/eIf2α蛋白表达影响均无统计学意义（ P>0.05），但复合暴露组p-PERK/PERK、p-eIf2α/eIf2α、ATF4蛋白的表达均升高（ P<0.05），且CBNPs与Cd单独/复合暴露组16HBE细胞IL6、IL8水平均明显高于对照组（ P<0.05）。CBNPs-Cd复合暴露组敲低PERK基因后，LC3蛋白和IL6、IL8水平均减少（ P<0.05）。析因分析结果显示，CBNPs和Cd单独暴露对P62、LC3和IL6的表达发挥明显作用（ P<0.05），但两化学物之间交互作用无统计学意义（ P>0.05）。 结论:CBNPs-Cd复合暴露可能通过激活PERK-eIf2α-ATF4通路，致人支气管上皮细胞自噬受阻、炎症反应增加。

目的:检测真核翻译起始因子4γ1(EIF4G1)在胰腺癌中的表达，并探究其促进胰腺癌细胞增殖的相关机制。方法:利用在线数据库分析EIF4G1在肿瘤中的表达量与预后意义；实时荧光定量聚合酶链式反应检测人胰腺癌细胞系的EIF4G1表达水平。慢病毒转染构建EIF4G1低表达细胞系，分别为敲减#1，敲减#2与对照；慢病毒转染构建EIF4G1过表达细胞系，为过表达与空载；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与克隆形成实验检测胰腺癌的增殖能力；蛋白印迹法检测EIF4G1敲减后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号(mTOR)通路的变化，组间比较选择 t检验。 结果:多个数据库显示EIF4G1在胰腺癌中表达量升高，与胰腺癌的不良预后有关；低表达组PANC-1在第5天的吸光度显著低于对照组(0.85±0.03、0.92±0.05比1.35±0.04， t＝22.160、14.670， P<0.01)；低表达组PA-TU-8988T在第5天的吸光度显著低于对照组(1.00±0.05、0.99±0.04比1.99±0.07， t＝26.740、29.390， P<0.01)；低表达组PANC-1的克隆形成数目著低于对照组(91.00±7.55、107.00±7.00比147.70±21.83， t＝4.250、3.070， P<0.05)，低表达组PA-TU-8988T的克隆形成数目著低于对照组(137.00±16.09、147.30±13.50比222.70±18.50， t＝6.050、5.700， P<0.01)；过表达组MIA PaCa-2在第5天的吸光度显著高于对照组(1.55±0.14比1.21±0.10， t＝4.360， P<0.01)；过表达组BxPC-3在第5天的吸光度显著高于对照组(1.03±0.01比0.69±0.07， t＝10.840， P<0.01)；过表达组MIA PaCa-2的克隆形成数目显著高于对照组(127.30±14.57比81.33±10.26， t＝4.470， P<0.05)；过表达组BxPC-3的克隆形成数目显著高于对照组(105.70±13.58比47.00±7.55， t＝6.540， P<0.01)。低表达组PANC-1细胞的p-mTOR含量低于对照组PANC-1细胞(1.00±0.12比0.55±0.19、0.54±0.19， t＝3.480、3.450， P<0.05)；低表达组PA-TU-8988T细胞的p-mTOR含量低于对照组PA-TU-8988T细胞(1.00±0.05比0.57±0.14、0.49±0.09， t＝5.140、8.410， P<0.01)。 结论:EIF4G1在胰腺癌中上调，可能通过mTOR通路促进胰腺癌的增殖。

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1 在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系.方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000 法及Western免疫印迹检测eIF4G1 蛋白表达水平.统计学方法分析eIF4G1 表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系.结果 免疫组化结果表明,eIF4G1 在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).eIF4G1 表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均＜0.05).子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P＜0.05).结论 eIF4G1 在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关.eIF4G1 有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物.

目的 探讨真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达,以及对EC细胞増殖、侵袭、迁移和凋亡的影响.方法 首先采用实时定量PCR和免疫组化检测20例EC患者中肿瘤组织以及对应癌旁正常组织中EIF4G1 mRNA相对表达量和EIF4G1蛋白的阳性表达率.然后体外构建人EC细胞系Ishikawa中EIF4G1过表达质粒和对照质粒(pCMV6)、低表达质粒和对照质粒(PLKO.1),Lipofectamine?2000转染试剂转染,Western blot法筛选EIF4G1蛋白稳定表达的细胞系,实验分为5组:空白对照组、过表达组、过表达对照组、低表达组和低表达对照组.MTT法检测细胞增殖率,Tran-swell 法检测细胞侵袭数目,划痕实验检测细胞迁移距离,TUNEL 法检测细胞凋亡率.结果 与癌旁正常组织相比,肿瘤组织中EIF4G1 mRNA相对表达量及其蛋白的阳性表达率均增加(P＜0.05).与空白对照组相比,过表达组EIF4G1蛋白表达增加,而低表达组EIF4G1蛋白表达降低(均P＜0.05).与空白对照组和过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率明显升高,细胞侵袭数目和迁移距离增加,凋亡率下降(均P＜0.05);与空白对照组和低表达对照组相比,低表达组增殖率明显降低,细胞侵袭数目和迁移距离下降,凋亡率升高(均P＜0.05).结论 EIF4G1可能作为促癌基因参与EC的发生,并调控细胞的恶性生物学行为,EIF4G1有望成为EC的靶向干预位点.

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达的影响.方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组(M),化疗组(C),中药组(低、中、高剂量组,分别命名为QL、QM、QH),联合组(CQH),低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组以0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以中药高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组以等量生理盐水给药,1 次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;RT-qPCR法检测Ras mRNA表达水平;Westem Blot法检测肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结果:芪玉三龙汤可抑制肺癌移植瘤生长,电镜下可见凋亡小体,用药各组均可下调Ras转录水平,但中药各组之间无明显差异(P＞0.05),联合组与化疗组之间相比无统计学意义(P＞0.05).同时,该复方均可降低肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结论:芪玉三龙汤可抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,与下调肺癌生长的关键合成蛋白p70S6K和eIF4E表达相关.

目的 通过体内和体外研究探讨白藜芦醇在人核孔复合物细胞(NPC)中的抗癌活性.方法 用 MTT实验检测白藜芦醇对CNE-1细胞和CNE-2Z细胞(两种具有不同分化程度的NPC细胞株)生长增殖的影响.用流式细胞仪检测白藜芦醇诱导NPC细胞凋亡情况和NPC细胞周期分布变化.Western blot检测涉及细胞凋亡调控的数个重要基因和与细胞周期调控有关的数种Cyclins的蛋白表达水平.在裸鼠体内进行 CNE-2Z细胞移植瘤实验.结果 用白藜芦醇处理NPC细胞后,白藜芦醇不仅以时间和剂量依赖的方式降低 NPC细胞的增殖能力,还可以剂量依赖的方式诱导NPC细胞的凋亡.流式细胞仪分析结果表明,白藜芦醇处理可将NPC细胞生长阻滞于S-期和G2/M-期.白藜芦醇处理可下调Bcl-2和低氧诱导因子1 (HIF-1)蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白表达.此外,白藜芦醇处理不仅可以降低蛋白激酶B (Akt )、p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E-结合蛋白1 (4E-BP-1)的磷酸化水平,也可降低参与细胞周期调控的数个细胞周期蛋白(Cyclins)的表达水平.白藜芦醇可抑制裸鼠体内NPC移植瘤的生长,进一步确认白藜芦醇对NPC生长的治疗效果.结论 在人NPC细胞株中,白藜芦醇可能是通过干扰Akt/p70S6K信号通路而发挥有效的抗增殖和促凋亡作用.

目的 建立坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠模型,研究肠道组织蛋白激酶受体样内质网激酶/真核翻译起始因子2a/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(PERK/eIF2a/CHOP)信号通路中PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、eIF2a、磷酸化eIF2a(p-eIF2a)、CHOP的动态表达,探讨NEC的发病机制,以期为NEC防治提供理论依据.方法 采用随机数字表法将150只1日龄SD大鼠分为3组.NEC组:配方奶喂养+缺氧+冷刺激+脂多糖灌胃建立NEC模型;Salubrinal(SAL)组:建模同时予SAL(1 mg/kg)腹腔注射;对照组:腹腔注射等量9 g/L盐水.造模0、12、24、48、72 h时,采用随机数字表法每组取10只大鼠处死,取肠道组织,观察肠道形态,行病理学检查,经Western blot检测PERK、p-PERK、eIF2a、p-eIF2a、CHOP蛋白动态表达,采用real-time PCR检测CHOP基因动态表达.结果 对照组无NEC发生,NEC组NEC发生率为90％(9/10只),SAL组NEC发生率为40％(4/10只).NEC组、SAL组p-PERK、p-eIF2a蛋白表达随建模时间延长上调;与对照组相比,NEC组、SAL组p-PERK、p-eIF2a蛋白表达上调(p-PERK:1.528±0.264、1.402±0.233比0.303±0.036;p-eIF2a:0.969±0.076、1.173±0.066比0.209 ±0.045;P ＜0.05);与NEC组相比,SAL组p-eIF2a蛋白表达增高(P＜0.05).NEC组、SAL组CHOP蛋白、mRNA表达均随建模时间延长上调,与对照组相比,NEC组、SAL组CHOP蛋白、mRNA表达上调(CHOP蛋白:1.456±0.223、0.929±0.064比0.165±0.026;CHOP mRNA:0.343±0.035、0.198±0.044比0.017 ±0.010;P ＜0.05);SAL组CHOP蛋白、mRNA表达较NEC组降低(P＜0.05).结论 PERK/eIF2a/CHOP信号通路参与新生大鼠NEC的发生、发展,而SAL可能通过抑制内质网应激信号通路中p-eIF2a去磷酸化、抑制CHOP基因及蛋白的表达而发挥作用.

目的 探讨真核翻译起始因子4G1(eukaryotic translation initiation factor 4 gamm1,EIF4G1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义.方法 收集接受手术治疗的NSCLC患者81例(男性49例,女性32例),应用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学方法检测癌组织及配对癌旁组织中EIF4G1mRNA和蛋白的表达,分析其在NSCLC癌组织中的表达特点及与患者临床病理特征的关系.结果 EIF4G1mRNA在NSCLC癌组织中的表达(6.92±1.87)明显低于癌旁组织(8.33±1.69)(t=7.01,P＜0.001).将NSCLC分为3种不同病理类型:鳞癌、腺癌和其他类型,EIF4G1 mRNA在各组表达差异均具有统计学意义(P＜0.05).EIF4G1 mRNA在低分化癌组织中的表达水平(8.90±1.33)明显高于在中分化(1.70±0.17)和高分化(0.84±0.15)癌组织(F=14.04,P＜0.001).EIF4G1 mRNA在Ⅳ期癌组织中的表达(15.42±3.99)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为1.67±0.37、2.96±0.77、5.44±0.99)(F=11.84,P＜0.001).不同年龄、性别和病理类型EIF4G1 mRNA表达水平均未见明显差异(均P＞0.05).Logistic回归分析显示EIF4G1高表达与NSCLC癌细胞分化程度密切相关(OR=23.74,P＜0.001).免疫组化结果显示EIF4G1在低分化癌组织中的蛋白表达水平明显高于中分化和高分化癌组织(P＜0.05).结论 EW4G1在NSCLC中特异性高表达,且其表达强度与癌细胞的分化程度密切相关.

目的 观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制.方法 淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1.取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120 μg/mL Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100 μL,模型组加含0.5％ DMSO的细胞培养液100 μL,对照组加细胞培养液100 μL;CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白.结果 与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P＜0.05).各组OD值及活细胞数两两比较,P均＞0.05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织;Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关.

目的 探索miR-139-5p在多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者中的表达水平,预测和验证miR-139-5p的靶基因.方法 利用实时定量PCR检测GBM患者和对照组脑组织中miR-139-5p的相对表达水平.选择starBase在线工具预测miR-139-5p的靶基因,通过TargetScan数据库分析miR-139-5p与靶基因的结合位点,并采用萤光素酶报告实验验证.检索miRPathDB数据库分析miR-139-5p靶基因显著富集的pathways,运用miRTargetLink工具构建miR-139-5p与其靶基因之间的交互网络.结果 相对于对照组,miR-139-5p在GBM患者脑组织中的表达水平显著下调.starBase预测工具取交集后得到8个靶基因,其中真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)为miR-139-5p靶基因之一.萤光素酶报告实验表明EIF4G2基因3′UTR区中含有明确的miR-139-5p结合位点.pathway富集分析发现靶基因显著富集于胰岛素样生长因子(IGF)-1信号通路、神经营养因子通路、趋化因子通路、T细胞受体通路、Ras信号通路和转化生长因子(TGF)-β信号通路等.结论 miR-139-5p在GBM患者中低表达,可能通过抑制靶基因EIF4G2表达参与肿瘤发生相关的过程.