目的:探讨荧光染色法在尿布皮炎(DD)继发真菌感染中的诊断应用。方法:选取2020年1月至2021年12月在厦门市儿童医院皮肤科门诊就诊的68例DD患儿，每例均行氢氧化钾(KOH)湿片法和荧光染色法检测，比较KOH湿片法和荧光染色法检出的真菌感染阳性率。结果:68例DD患儿中，KOH湿片法检出继发真菌感染38例，荧光染色法检出继发真菌感染50例；荧光染色法检测DD患儿继发真菌感染的阳性率(73.5%)明显高于KOH湿片法(55.9%)，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:荧光染色法诊断DD患儿继发真菌感染的灵敏度更高，且检测更快捷，值得临床推广应用。

目的:比较荧光染色和过碘酸希夫染色对真菌性角膜炎(FK)的诊断效果。方法:收集2017年1月至2019年5月于山东第一医科大学附属眼科医院就诊且角膜刮片或真菌培养阳性的FK患者147例角膜标本147份，其中行穿透角膜移植术(PKP)患者84例，板层角膜移植术(LKP)患者42例，病灶切除患者21例；选取11例单纯疱疹病毒性角膜炎活检组织作为阴性对照。对角膜组织标本分别行真菌荧光染色和过碘酸希夫染色。将染色完成的切片分别置于荧光显微镜和光学显微镜下查找真菌菌丝或孢子。比较2种染色方法的阳性率、不同手术方式获得的FK角膜组织以及不同真菌菌株标本间2种染色方法的阳性例数。结果:过碘酸希夫染色的阳性率为60.5%(89/147)，真菌荧光染色的阳性率为79.6%(117/147)，荧光染色法诊断FK的阳性率明显高于过碘酸希夫染色法，差异有统计学意义( χ2＝28.00， P<0.01)，2种染色方法的特异性均为100%。PKP手术切除标本荧光染色的阳性率为85.7%(72/84)，明显高于过碘酸希夫染色的阳性率65.5%(55/84)，差异有统计学意义( χ2＝17.00， P<0.01)；LKP手术切除标本荧光染色的阳性率为71.4%(30/42)，明显高于过碘酸希夫染色的52.4%(22/42)，差异有统计学意义( χ2＝8.00， P<0.01)；病灶切除标本分别采用荧光染色和过碘酸希夫染色法进行检查，阳性率分别为71.4%(15/21)和57.1%(12/21)，差异无统计学意义( χ2＝1.30， P＝0.25)。不同真菌菌株标本间2种染色的阳性例数不同，其中茄病镰刀菌复合群、谲诈腐霉菌、烟曲霉复合群、季也蒙假丝酵母、木霉和铺叶沼兰褐莺真菌行荧光染色的阳性例数分别为19、5、5、1、1和1例，行过碘酸希夫染色的阳性例数分别为11、0、3、0、0和0例。11例阴性对照均为阴性结果。 结论:荧光染色技术应用于石蜡包埋角膜组织检查真菌成分较过碘酸希夫染色法敏感性高，可显著提高真菌检测的阳性率。

目的:比较荧光染色法和KOH湿片法在浅表真菌感染中的诊断价值。方法:收集2019年10月至2020年10月广东省妇幼保健院皮肤科临床拟诊为皮肤浅表真菌感染的673例患者的标本，分别采用荧光染色法和KOH湿片法进行真菌直接镜检，比较两种方法的诊断阳性率及平均阅片时间。结果:荧光染色法总阳性率为91.23%，高于KOH湿片法的79.20%（ P<0.05），总平均阅片时间为（73.00±7.95）s，低于KOH湿片法的（89.62±9.41）s（ P<0.05）；荧光染色法在念珠菌性尿布皮炎、手足癣、体股癣、甲癣、头癣、花斑癣各病种中的诊断阳性率均高于KOH湿片法（均 P<0.05），荧光染色法在各病种中的平均阅片时间均低于KOH湿片法（均 P<0.05）。 结论:荧光染色法有良好的染色效果，是较KOH湿片法更快速、准确的真菌镜检方法，操作简单，易于常握，值得临床推广应用。

脓癣是由亲动物性或亲土性的真菌感染毛发及其周围组织引起的化脓性炎症反应，其确诊依赖于真菌镜检和培养。传统的真菌镜检方法是10%~15%氢氧化钾（KOH）湿片法，容易出现假阴性和假阳性的结果。我科于近期采用荧光染色法诊断脓癣3例，取得很好的效果。

目的:研究小鼠腐皮镰刀菌性角膜炎中中性粒细胞来源的基质金属蛋白酶8(MMP-8)对角膜组织的损伤作用及其机制。方法:取108只6~8周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠，采用腐皮镰刀菌感染法制备右眼真菌性角膜炎(FK)模型，裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜炎症情况并评分，依据FK模型眼角膜炎症评分将模型眼分为造模后0、12、24、48和72 h组。于相应时间点处死小鼠并取材角膜组织，采用Western blot法检测MMP-8、腺苷酸激活蛋白激酶α(AMPKα)及其丝氨酸172位点磷酸化形式(p-AMPKα)蛋白在角膜中的相对表达量；采用苏木精－伊红染色法检测各时间点组小鼠角膜中中性粒细胞数量；采用免疫荧光染色法观察角膜中中性粒细胞与MMP-8蛋白的共定位表达。体外角膜胶原降解实验中将角膜组织分为MMP-8组、缓冲液组和生理盐水组，分别采用100 μl活化的重组MMP-8、检测缓冲液和生理盐水处理角膜，采用羟脯氨酸检测试剂盒测定并比较各组角膜组织中羟脯氨酸质量分数。分别提取人外周血中性粒细胞和采集培养的腐皮镰刀菌孢子，将人中性粒细胞分为4个组，其中阴性对照组为培养的中性粒细胞，共培养组为中性粒细胞加孢子共培养，AICAR处理组和化合物C处理组分别向中性粒细胞和孢子共培养体系内加入p-AMPK蛋白酶激动剂AICAR和抑制剂化合物C，采用免疫荧光染色法检测各组人中性粒细胞中MMP-8蛋白的表达水平。结果:造模后24 h组小鼠模型眼出现角膜混浊，造模后72 h组出现角膜穿孔。造模后24、48和72 h组角膜炎症评分均高于12 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。造模后12、24和48 h组角膜中MMP-8蛋白相对表达量高于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；模型眼角膜中MMP-8蛋白相对表达量与炎症评分呈中等强度正相关( rs＝0.50， P<0.05)。造模后24、48和72 h组角膜内p-AMPKα(Thr 172)/AMPKα值高于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；角膜中p-AMPKα(Thr 172)/AMPKα值与MMP-8蛋白相对表达量呈中等强度正相关( r＝0.54， P<0.01)。造模后24、48和72 h组角膜中中性粒细胞数目明显多于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；角膜中中性粒细胞数目与炎症评分呈强正相关( rs＝0.77， P<0.001)，与MMP-8蛋白相对表达量呈中等强度正相关( r＝0.56， P<0.05)。模型眼角膜中MMP-8蛋白表达与中性粒细胞高度共定位。缓冲液组、生理盐水组和MMP-8组角膜羟脯氨酸质量分数分别为(0.52±0.02)、(0.51±0.03)和(0.27±0.02)μg/mg，组间总体比较差异有统计学意义( F＝156.63， P<0.01)，其中MMP-8组角膜羟脯氨酸质量分数低于缓冲液组和生理盐水组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养的镰刀菌孢子感染人中性粒细胞实验中，AICAR处理组MMP-8表达荧光强度值明显高于阴性对照组和化合物C处理组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:小鼠真菌性角膜炎中性粒细胞分泌的MMP-8可降解角膜基质层胶原纤维，导致角膜混浊或穿孔。人中性粒细胞中MMP-8蛋白的表达水平变化可能与AMPK活化有关。

冰冻切片对临床术中快速诊断意义重大[1].肺冰冻切片多用于肺部肿瘤的快速良恶性诊断,其中良性病变的真菌感染主要通过常规石蜡切片PAS染色及六胺银染色来明确诊断[2].近年来荧光染色法检测的应用越来越多[3].针对石蜡制片耗时长的问题,本研究采用肺冰冻切片真菌荧光染色,与石蜡切片真菌荧光染色、PAS染色及六胺银染色结果进行对比分析,发现肺冰冻切片真菌荧光染色结果准确、快速,具有较强的临床实用价值,现介绍如下.

目的 研究新一代真菌荧光成像及计算机视觉系统(简称为"视觉系统")在浅部真菌中的临床应用价值.方法 收集从2022年4月至2022年9月到三家医院皮肤科就诊且拟诊为浅部真菌感染的患者,刮取皮损位置的甲屑或皮屑,将每份样本平均分成3份,分别予以视觉系统、特敏增强荧光染色法及传统KOH湿片法检测标本,比较3种检测方法的敏感性、特异性和工作效率.结果 共检测300份阳性皮损,其中特敏增强荧光染色法检出率最高(96％),其次为视觉系统(92％),传统KOH检出率最低(77.67％).视觉系统存在2％的假阳性率,部分标本将纤维、荧光杂质自动识别为真菌结构;视觉系统的优势在于速度快,不依赖于人工,可同时扫描10份标本.结论 视觉系统是一种对检验人员技术水平要求较低,可进行高效批量检测的新型真菌检测技术,但目前版本仍存在假阳性率,需要继续优化提升.

目的:评估真菌荧光染色法在侵袭性真菌感染(IFIs)石蜡包埋组织病理切片中的应用价值.方法:经真菌培养确诊,同时行组织病理学检查的55例真菌感染患者,其中马尔尼菲篮状菌感染30例,取其石蜡包埋切片分别行过碘酸—希夫(PAS)染色、六胺银(GMS)染色及真菌荧光染色,采用McNemar检验对3种染色方法的检出率进行比较分析.结果:55例样本中,真菌荧光染色检出43例(78.2%),GMS染色检出37例(67.3%),PAS染色检出23例(41.8%),真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色(P＜0.01);30例马尔尼菲篮状菌感染中,真菌荧光染色检出21例(70.0%),GMS染色检出14例(46.7%),PAS染色检出6例(20.0%),真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色(P＜0.01).结论:真菌荧光染色在IFIs真菌病理学诊断中检出率高于PAS染色和GMS染色,是组织病理学诊断IFIs的快速、高效的方法.

目的:总结分析6例新型冠状病毒感染(COVID-19)合并机会性感染的临床病理特征,以期为临床诊治提供帮助.方法:收集2020至2021年广州医科大学附属市八医院临床确诊COVID-19且病理提示合并机会性感染的患者6例,回顾分析其临床特征及病理组织学特征,特殊染色法(六胺银、PAS及抗酸染色)、免疫荧光染色法(真菌荧光及抗酸荧光染色)及病原宏基因组二代测序法(mNGS)进行病原体检测,并进行相关文献复习.结果:本研究中6例COVID-19患者均有基础疾病,有不同程度发热及咳嗽、咳痰等呼吸道症状,并出现肺部CT改变,主要表现为双肺斑片状或磨玻璃密度影.6例均出现C反应蛋白升高,并出现CD4+及CD8+T淋巴细胞计数降低.在6例标本中,从肺泡灌洗液标本中检出耶氏肺孢子菌2例(均为老年患者合并肺部基础疾病,CD4+T细胞<150个/μl),从背部痂皮组织中检出毛霉菌1例(糖尿病患者出现皮肤破损),2例肺泡灌洗液和1例压疮组织检出真菌孢子(均合并基础疾病),其中病例6肺泡灌洗液标本经mNGS检测查见白色假丝酵母菌.结论:COVID-19患者特别是年龄较大合并基础疾病且未注射新冠疫苗,病程较长病情复杂,出现CD4+及CD8+T细胞计数降低,C反应蛋白升高时,要警惕真菌等机会性感染可能,避免漏诊延误治疗;如可疑肺孢子菌等真菌感染时建议行病理学检查,必要时行病原宏基因组检测,有助于病原学确诊.

脓癣是一种由亲动物的小孢子菌属感染引起的真菌性皮肤病,可致瘢痕性脱发,影响患者的身心健康,早期确诊极为重要.真菌病原学检测是目前头癣诊断的主要依据,但真菌直接镜检存在一定的假阴性率,真菌培养所需时间长.我们通过皮肤镜检查及真菌荧光染色法快速诊断了幼儿脓癣1例,予氟康唑联合糖皮质激素治疗,疗效满意.