目的:观察着丝粒蛋白U(CENPU)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用短发夹RNA(shRNA)方法构建低表达HepG2细胞系，将其分为实验组(sh-HepG2)和对照组(NC)；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测实验组和对照组CENPU表达量；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其对HepG2增殖能力的影响；采用划痕实验检测其对HepG2迁移能力的影响；Transwell检测其对HepG2侵袭能力的影响；应用SPSS 26.0统计软件分析。结果:RT-qPCR检测结果表明，实验组表达量低于对照组表达量(1.49±0.14比6.72±0.21， t＝8.593， P<0.01)，差异有统计学意义；实验组中CENPU蛋白相对表达量低于对照组表达量(1.01±0.13比2.12±0.04， t＝11.572， P<0.05)，差异有统计学意义；CCK-8结果显示0、24、48、72 h实验组吸光度( A)值低于对照组(0.40±0.01、0.46±0.02、0.73±0.01、1.29±0.02比0.39±0.01、0.63±0.01、0.99±0.02、1.73±0.01， t＝8.735、9.774、7.682、4.482， P<0.01)，差异均有统计学意义；Transwell结果示24 h实验组侵袭的细胞数低于对照组侵袭细胞数[(63±3.57)个比(143±2.49)个， t＝14.758， P<0.05]，差异有统计学意义；划痕实验表明24 h实验组迁移的细胞数低于对照组迁移细胞数[(29.51±7.26)个比(61.31±3.71)个， t＝11.385， P<0.05]，差异有统计学意义。 结论:CENPU可以促进肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是好发于中老年的浆细胞恶性肿瘤,发病机制尚不清楚.由于其多发、复发、耐药的特点,MM仍是一种无法治愈的疾病.氨基酸代谢异常是MM的重要特征之一.氨基酸重要的代谢途径是作为基本原料参与蛋白质合成.氨酰转移核糖核酸合成酶(aminoacyl transfer ribonucleic acid synthetase,ARS)基因是蛋白质合成过程中的关键调节基因.本研究旨在探究在MM中异常表达的氨基酸代谢关键因子ARS通过调控氨基酸代谢影响MM生长的分子机制.方法:对应基因编号合并基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中基因表达谱GSE5900数据集及GSE2658数据集数据,对ARS家族基因表达数据进行标准化处理.采用GSEA_4.2.0软件分析健康供者(healthy donor,HD)与MM患者基因富集的差异.采用GraphPad Prism 7绘制基因热图并进行数据分析.采用Kaplan-Meier及Cox回归模型分别对ARS家族基因表达与MM患者预后情况进行单因素及多因素回归分析.收集7例MM初诊患者的骨髓样本,使用CD138抗体磁珠分选获得CD138+、CD138-细胞,采用real-time RT-PCR分析ARS在MM临床样本中的表达情况.以人B淋巴细胞GM12878细胞,人MM细胞系ARP1、NCI-H929、OCI-MY5、U266、RPMI 8266、OPM-2、JJN-3、KMS11、MM1.s细胞为研究对象,采用real-time RT-PCR及蛋白质印迹法分析ARS在MM细胞系中的表达情况.利用短发夹核糖核酸(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒构建基因敲减质粒(VARS-sh组),将其与空载质粒(scramble组)分别转染HEK 293T细胞后进行病毒包装,分别感染ARP1、OCI-MY5细胞并建立稳定表达的细胞系,分别采用细胞计数法和流式细胞术检测敲减缬氨酰tRNA合成酶(valyl-tRNA synthetase,VARS)基因对MM细胞增殖和凋亡的影响.根据VARS表达将GEO数据分为高表达组和低表达组,通过生物信息学分析探索VARS影响的下游通路,采用飞行时间质谱(gas chromatography time-of-flight/mass spectrometry,GC-TOF/MS)及高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分别检测临床患者骨髓样本CD138+细胞及敲减VARS基因的ARP1、OCI-MY5细胞及上清液中缬氨酸含量.结果:基因富集分析结果表明:与HD相比,tRNA加工相关的基因在MM中显著富集(P<0.0001).进一步筛选tRNA加工通路相关子集发现胞质氨酰tRNA合成酶家族基因在MM中显著富集(P<0.0001).基因表达热图结果表明GEO数据中ARS家族基因除丙氨酰tRNA合成酶(alanyl-tRNA synthetase,AARS)、精氨酰tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RARS)、丝氨酰tRNA合成酶(seryl-tRNA synthetase,SARS)外,其余ARS家族基因均在MM中高表达(均P<0.01),且随着意义未明单克隆丙种球蛋白血症(monoclonal gammopathy of undetermined significance,MGUS)到MM的发展进程,基因表达水平逐渐增加.Kaplan-Meier生存情况单因素分析结果表明甲硫氨酰tRNA合成酶(methionyl-tRNA synthetase,MARS)、天冬酰胺基tRNA合成酶(asparaginyl-tRNA synthetase,NARS)、VARS高表达组与低表达组MM患者预后情况差异均具有统计学意义(均P<0.05).Cox回归模型多因素分析结果表明:VARS的高表达与MM的总生存时间异常有关(HR=1.83,95%CI 1.10～3.06,P=0.021);NARS(HR=0.90,95%CI 0.34～2.38)及MARS(HR=1.59,95%CI 0.73～3.50)的高表达均对MM患者的总生存时间无影响(均P>0.05).Real-time RT-PCR及蛋白质印迹法结果表明VARS、MARS和NARS在临床患者CD138+MM细胞及MM细胞系中均高表达(均P<0.05).细胞计数法及流式细胞术结果表明,敲减VARS的MM细胞增殖能力被显著抑制(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).生物信息学分析结果表明除包括细胞周期在内的通路受VARS调控外,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸分解代谢通路被上调.非靶向代谢组学数据表明:与HD相比,MM患者的CD138+MM细胞中缬氨酸含量降低(P<0.05).HPLC结果表明:与scramble组相比,VARS-shRNA组的ARP1细胞与培养基上清液及OCI-MY5培养基上清液中缬氨酸含量均增加(均P<0.05).结论:VARS在MM中异常高表达,且与MM患者的不良预后相关.VARS可通过影响缬氨酸代谢调控促进MM细胞的生长.

1 病例介绍@@患者,女,70岁,因乏力、纳差4个月,尿黄1个月余于2017-12-05入院.患者于4个月不明诱因出现乏力、纳差,伴有恶心,偶有腹胀,1个月余前出现尿黄,去当地医院(临沂市中心医院)检查示肝功能异常:总蛋白91.7g/L,白蛋白38.9,球蛋白52.8g/l,ALT 114U/L,AST 63U/L,ALP 517U/L,GGT 402U/L,总胆红素25.3μmol/L,间接胆红素22.4μmol/L,A/G 1.85;心脏及颈部血管彩超:双侧颈动脉硬化,并左侧斑块形成,轻度主动脉瓣反流,轻度二尖瓣反流,左室充盈异常.胃镜:浅表性胃炎伴隆起糜烂;上腹部CT平扫:符合脂肪肝的表现.肝胆胰脾肾超声:弥漫性肝病声像图;未治疗.现为求进一步诊治来临沂市人民医院就诊,门诊以慢性肝炎收住院.患者既往体键,否认肝炎病史.入院后体检:皮肤及巩膜无黄染,心肺无异常,腹软,无压痛及反跳痛,肝脏剑突下10cm,肋下5cm,质硬无触痛,脾脏未触及,双下肢无水肿.入院后辅助检查:血常规:WBC 5.51×109/L,RBC 4.28×1012/L,HB 127g/L,PLT 299×109/L;血沉58mm/h;肝功能:总蛋白89.5g/L,白蛋白32.2g/L,球蛋白57.3g/L,A/G 0.56,ALT 19.2U/L,AST45.0U/L,ALP 357.4U/L,GGT 213.3U/L,总胆红素16.9μmol/L,间接胆红素9.1μmol/L,直接胆红素7.8μmol/L;血脂:总胆固醇6.3mmol/L,三酰甘油2.36mmol/L,高密度脂蛋白胆固醇0.67mmol/L,低密度脂蛋白胆固醇3.84mmol/L;血清铜43.7μmol/L,铜蓝蛋白0.442g/L;抗核抗体(ANA)系列、肝抗原抗体谱、中性粒细胞胞浆抗体、抗线粒体抗体、抗核提取物抗体(ENA组合、A3谱)等自身免疫指标:ANA 1:320(+),抗着丝点抗体(+),余均阴性;肝炎病毒病原学检查(EBV/CMVIgM/HAV/HBV/HCV/HEV)、梅毒螺旋体抗体、HIV均阴性;尿常规、凝血功能、肾功能、电解质、血清铁、甲状腺激素、肿瘤标志物(AFP/CEA/CA199/CA125)均未见明显异常.肝胆脾MRI(平扫+强化)、MRCP:肝硬化、肝大、脾大、肝多发囊肿.肝脏穿刺活检:肝细胞水肿、轻度淤胆伴碎屑状坏死,肝索间较多淀粉样物质沉积,汇管区较多炎细胞浸润,肝索及汇管区浸润炎细胞内可见嗜酸粒细胞;免疫组化:HBcAg(-),HBsAg(-),CK(+),Heppar-1(+);特殊染色:网状纤维染色(+),Masson染色(-),刚果红(+),Fe染色(-),PAS染色(-).病理诊断:肝脏淀粉样变性(图1).

目的 研究慢性丙型肝炎患者基因型分布情况,并对相关基因型进行血清学指标分析.方法 收集安徽省立医院感染病院114例慢性丙型肝炎患者血清样本,采用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法对患者丙型肝炎病毒进行分型,利用实时荧光定量PCR检测外周血丙肝病毒核糖核酸(HCV-RNA),同时检测肝功能[谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)]、凝血指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶原活动度(PTA)、血小板(PLT)]及自身抗体[抗核抗体(ANA)、抗U1小核糖核蛋白抗体(抗RNP)、抗狼疮细胞抗体(抗Sm)、抗52 kD的多肽条段(抗Ro-52)、着丝粒蛋白B抗体(抗CENP B)、M2型线粒体抗体(AMA-M2)、抗肝/肾微粒体1型抗体(LKM1)]等相关血清学指标.结果 在114例慢性丙型肝炎患者中,丙型肝炎病毒基因型主要为1b型(80.70％),2a型(7.01％),6a型(1.75％),未分型(0.88％).除了单基因型,还发现非单基因型11例(9.65％).对单基因型和非单基因型相关实验室指标分析发现,非单基因型ALT及自身抗体检测阳性率要高于单基因型(Z=1.999,P=0.045;χ2=13.408,P=0.000),而对AST、GGT、PT、PTA、PLT等指标,单基因型与非单基因型患者比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 该研究的丙型肝炎病毒感染的患者中,丙型肝炎病毒基因型以1b为主;非单基因型对肝损害要高于单基因型,自身抗体出现的阳性率也更高,可能也更易出现自身免疫性疾病.

患者,男,主因消瘦2个月,发热20 d于2019年11月25日入院.最高体温39℃,2个月前因消瘦在秦皇岛市第三医院就诊,CT提示肺部感染,结核待除外,完善相关检查后并未明确肺部病变性质,经验性予"异烟肼、利福喷丁"抗结核治疗后出院.既往"霍奇金淋巴瘤"病史 5 年,在外院行放化疗.查体:T 38. 8℃,P 109次/min.贫血貌,全身未见出血点及瘀斑;胸骨无压痛,双肺未闻及明显干湿性啰音,腹软,无压痛,脾肋下3 cm可触及.辅助检查: T 淋巴细胞计数 0. 589, CD3 + CD4 +0. 399 × 109/L.血常规:WBC 1. 99 × 109/L,RBC 2. 9 × 1012/L, Hb 79 g/L,L 0. 19 × 109/L,N 9. 5％.生化全项:白蛋白25. 6 g/L,γ-谷氨酰转肽酶380. 7 U/L ,二氧化碳结合19. 1 mmol/L.红细胞沉降率103 mm/h;肿瘤六项:铁蛋白>2000 ng/ml;甲功七项:总T30. 34 ng/ml.入院时胸部CT:左肺多发小结节,左肺上叶空洞病变性质待定,双肺下叶炎性病变,双侧胸膜增厚.第一次骨穿骨髓示:三系增生,嗜血细胞可见.骨髓病理示:(骨髓)增生活跃骨髓像,各系造血细胞均见,巨核细胞2 ～6个/HPF.第二次骨穿骨髓示:三系增生,噬血现象可见.B型超声:脾轻度肿大.双侧颈部超声探及淋巴结(内部结构清晰),右侧锁骨下探及淋巴结(内部结构不清晰),双侧腹股沟探及淋巴结(内部结构不清晰),双侧锁骨上探及淋巴结(内部结构不清晰),动态随诊.自身免疫性抗体示:抗着丝点抗体阳性(+ +) 32,抗核抗体-IF+胞浆颗粒1:100,余阴性.EB病毒抗原、巨细胞病毒抗体:阴性.血培养(需氧+厌氧):未见异常.真菌D-葡聚糖<10 pg/ml.气管镜检查:气管镜检查未见异常,肺泡灌洗液宏基因检测示:结核分枝杆菌 3 条.初步诊断:发热待查,肺部感染,肺结核? 霍奇金淋巴瘤,贫血.

患者女,58岁.因“口干、眼干、手足发绀5年,加重半年”入院.听诊无异常发现.血常规:白细胞18.54×109/L↑、淋巴细胞计数11.92×109/L ↑,中性粒细胞百分比25.3％↓、淋巴细胞百分比64.3％↑、单核细胞计数1.24×109/L↑、嗜碱性粒细胞计数0.09×109/L ↑.抗核自身抗体谱:ANA核型1颗粒型、ANA滴度11:3200、ANA核型2着丝点型、抗SmD1抗体1+、抗SSA/Ro60kD抗体3+、抗Ro52kD抗体3+、抗着丝点蛋白B抗体2+、抗U1snRNP抗体3+,补体C30.83g/L↓、补体C4 0.09g/L↓.肺部CT显示双肺野透光度均匀减低,呈磨玻璃样改变.

目的 分析抗核抗体(ANA)和ANA谱的相关性,探讨其在临床疾病中的特征.方法 采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(IgG),免疫印迹法检测抗核抗体谱.结果 690例怀疑自身抗体阳性的临床标本涉及多种疾病,其中ANA阳性标本为494例,以滴度为1:1000的阳性标本居多;自身免疫性疾病ANA滴度偏高,其他继发性免疫反应疾病ANA滴度在不同疾病中的分布无明显规律;ANA谱检测特异性自身抗体阳性标本共245例,抗SSA和抗Ro-52抗体阳性率最高;抗核小体、抗dsDNA、抗组蛋白、抗Sm、抗U1-nRNP、抗着丝点B蛋白、抗SSB、抗抗线粒体抗体-M2抗体阳性标本ANA滴度主要集中在1:320～1:1000;抗SSA、抗Ro-52、抗Scl-70、抗Jo-1抗体阳性标本可存在于各种滴度的ANA阳性标本中,无明显的ANA滴度分布特征.结论 ANA和ANA谱阳性可出现在各种疾病中,ANA检查对疑似自身抗体阳性患者有重要初筛作用,ANA谱特异性抗体检测对ANA检测阳性的标本具有补充诊断作用,但两种方法检测结果并不完全相关,不能代替,同时检测ANA和ANA谱能更好的为临床诊断和评估预后提供帮助.

目的 通过对77例湿疹患者血清中抗核抗体谱检测结果的分析,了解湿疹患者的自身抗体分布特点,探讨抗核抗体谱在湿疹患者中的临床意义.方法 获取77例湿疹患者3 ml外周血,提取血清并使用欧盟公司免疫荧光方法以及免疫印迹法对77例湿疹患者血清进行抗核抗体谱检测,荧光显微镜下观察免疫荧光结果,半定量免疫印迹仪对抗核抗体中自身抗体谱进行半定量检测并记录结果.结果 在77例湿疹患者血清中,14例患者抗核抗体弱阳性(1 ∶32),5例患者抗核抗体滴度阳性(1 ∶ 100),6例患者抗核抗体滴度强阳性(1 ∶320),其中U1RNP阳性1例,SSA阳性5例,Ro抗体阳性8例,SSB阳性3例,PM-SCL阳性2例,组蛋白抗体阳性1例,核糖体P蛋白阳性2例,着丝点抗体阳性3例,线粒体抗体阳性3例,抗核膜抗体阳性1例,其中湿疹患者合并3例干燥综合征及2例系统性红斑狼疮.结论 32.4％湿疹患者自身抗体异常,且会合并干燥综合征或系统性红斑狼疮,临床诊疗时应予以重视.

患者,女,64岁,因"反复咳嗽咳痰1年余"于2019年3月12日入住浙江省人民医院呼吸内科.患者1年来反复出现阵发性呛咳,伴少量白色黏液痰,闻到烟味及粉尘后症状明显加重.2019年3月7日查胸部CT (图1)提示:左肺上叶支气管闭塞,阻塞性不张及炎症;双肺散在炎症,右肺中叶、下叶支气管扩张.既往史:患者8年前做过眼部手术,体质一般.入院查体:体温37 ℃,脉搏74次/min,呼吸20次/min,血压104/82 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa).神志清,精神可,口唇无发绀,气管居中,锁骨上浅表淋巴结未及肿大,两肺听诊呼吸音粗,未闻及明显干湿性啰音.入院检查:3月12日血常规显示,白细胞计数4.84×109/L,嗜酸性粒细胞分类14％,血红蛋白129 g/L,血小板计数138×109/L,超敏C反应蛋白<1.3 mg/L;患者生化,凝血功能等未见明显异常.患者胸部CT提示左肺上叶支气管闭塞,阻塞性不张及炎症,需进一步排除肿瘤、真菌等特殊感染可能,建议患者行支气管镜检查.3月13日患者痰涂片发现少量真菌菌丝,真菌G+GM试验:曲霉菌半乳甘露聚糖:(-), 1-3-β-D葡聚糖(-).3月14日行支气管镜检查(图2):左肺上叶舌段、前段开口可见黄色黏液栓覆着,刷取黏液栓送病理及肺泡灌洗液完善病原学检查.结合辅助检查,患者炎症指标无异常,嗜酸性粒细胞明显升高,排除细菌感染可能,考虑存在过敏因素,进一步检查血IgE.3月15日IgE (血清)为286.0 U/mL,进一步表明患者存在过敏及真菌感染可能.3月15日病理检查(图3):左上支气管黏膜慢性炎伴黏液栓形成,未找到癌细胞.

目的:探讨下调着丝粒蛋白U(CENPU)对卵巢癌(OC)细胞顺铂耐药的影响,并分析其作用机制.方法:采用Western blotting法检测OC细胞(OVCAR3和SKOV3细胞)和顺铂耐药OC细胞(OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞)中CENPU蛋白表达水平.将OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞分为shControl组(转染shControl质粒)和CENPU短发夹RNA质粒(shCENPU)组(转染shCENPU质粒).CCK-8法检测0～100μmol·L-1顺铂刺激24 h后2组细胞活性,流式细胞术检测20μmol·L-1顺铂刺激24 h后2组细胞凋亡率,肿瘤球形成实验检测2组细胞的细胞球形成率(SFE),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组细胞中自我更新相关基因性别决定区Y框蛋白2(Sox2)、Nanog和八聚体结合转录因子4(Oct4)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中Wnt/β-catenin通路相关蛋白无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、细胞周期素D1(cyclinD1)、c-Myc和β-连环素(β-catenin)蛋白表达水平.结果:与OVCAR3和SKOV3细胞比较,OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞中CENPU蛋白表达水平均明显升高(P<0.05).顺铂作用后,与shControl组比较,shCENPU组OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).与shControl组比较,shCENPU组OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞的SEF,细胞中Sox2、Nanog和Oct4 mRNA水平以及Wnt1、cyclin D1、c-Myc和β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论:敲低CENPU能抑制顺铂耐药OC细胞的自我更新、顺铂耐药和Wnt/β-catenin信号活性.