目的:优选滋阴清骨丸的最佳提取工艺。方法:以溶剂量、提取时间、浸泡时间为影响因素，以知母皂苷BⅡ、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、甘草苷各成分含量及干浸膏得率的总评归一值（OD值）为评价指标，采用中心组合设计-响应面法优选滋阴清骨丸的最佳提取工艺。结果:滋阴清骨丸最佳提取工艺为：提取时间115 min，浸泡时间26 min，溶剂量10倍，提取2次。结论:优化的提取工艺合理、稳定、可靠，可为滋阴清骨丸的提取工艺及进一步成型工艺提供依据。

目的 建立HPLC-ELSD法测定滋阴清骨丸中知母皂苷BⅡ的含量,HPLC-PDA法同时测定该制剂中芍药苷、柚皮苷、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、橙皮苷、甘草苷的含量.方法 HPLC-ELSD分析采用Waters Symmetry C18 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-水(75∶25);体积流量 1.0 mL/min;柱温 25℃.HPLC-PDA 分析采用Waters Symmetry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-水-0.2%磷酸,梯度洗脱;体积流量 0.5、1.0 mL/min;柱温 25℃;检测波长 230 nm.结果 7 种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率98.50%～100.10%,RSD 0.86%～1.44%.结论 该方法简便可靠,重复性好,可用于滋阴清骨丸的质量控制.

目的 建立主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)及熵权优劣解距离法(EW-TOPSIS)评价抗菌消炎胶囊的多组分质量差异.方法 采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定15批抗菌消炎胶囊中獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ、原百部碱、对叶百部碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,借助PCA、OPLS-DA及EW-TOPSIS模型对15批消炎胶囊样品进行质量差异分析,筛选出导致差异的特征成分,并进行质量排序.结果 12种成分在各自范围内呈现良好的线性关系(r＞0.999),平均加样回收率(n=9)96.90％～100.23％(RSD＜2.0％).化学计量学筛选出2个主成分,方差贡献率累计达95.172％;OPLS-DA发掘出黄芩苷、绿原酸、知母皂苷B Ⅱ和对叶百部碱对抗菌消炎胶囊质量有显著影响:EW-TOPSIS分析结果显示Ci值0.082 7～0.849 5,15批样品质量差异较大.结论 所建立的方法可用于抗菌消炎胶囊质量的综合评价.

目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定百合知母汤中菝契皂苷元、王百合苷C、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷、王百合苷A、王百合苷B、知母皂苷BⅢ、异芒果苷、知母皂苷BⅡ的含量.方法 分析采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱(3.0 mm×150 mm,2.7 μm);流动相水(含 0.1%甲酸)-乙腈(含 0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温 30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式.结果 10 种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.998 1),平均加样回收率 95.65%～106.5%,RSD 1.2%～5.5%.结论 该方法准确、灵敏、快速,可用于百合知母汤的质量控制.

目的 观察知母皂苷B-Ⅱ(TB-Ⅱ)通过抑制cAMP/PKA/CREB途径减轻对脑缺血再灌注大鼠损伤(CIRI)的疗效.方法 将大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,TB-Ⅱ低、中、高剂量组,尼莫地平组.采用"Longa"线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型后,检测各组大鼠神经功能评分,脑梗死面积、脑含水量、脑埃文斯蓝(EB)含量测定;通过免疫荧光染色观察大脑神经元结构损伤及神经元凋亡情况;通过ELISA检测和Western Blot检测炎症因子及相关通路蛋白水平表达.结果 与假手术组比较,模型组EB含量增加(P＜0.05);与模型组比较,尼莫地平组脑含水量、EB含量、脑梗死面积等均降低(P＜0.05,P＜0.01),中、高剂量组脑含水量降低(P＜0.05),各剂量组EB含量、脑梗死面积均降低(P＜0.05,P＜0.01);TB-Ⅱ各组均不同程度地下调IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的分泌(P＜0.05),并通过PKA/CREB通路,降低AQP-4蛋白的表达(P＜0.05).结论 本研究揭示了 TB-Ⅱ通过cAMP/PKA/CREB通路,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制.

目的:建立石膏-知母组合物的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为石膏-知母药对的物质基础研究提供参考.方法:收集不同产地石膏、知母药材,按石膏-知母(1∶1)制备 12 批石膏-知母组合物;采用离子色谱法(IC)和超高效液相色谱法(UPLC),测定石膏-知母组合物的指纹图谱及Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷BⅡ 6 个指标的含量;采用相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)对石膏-知母组合物的指纹图谱进行化学模式识别分析.结果:建立的石膏-知母组合物IC指纹图谱共标定了 5 个共有峰,指认峰 1、峰 3、峰 4、峰 5 分别为Na+、K+、Mg2+、Ca2+;UPLC指纹图谱共标定了 15 个共有峰,指认了峰 7、峰 10、峰 11分别为新芒果苷、芒果苷、异芒果苷;12 批石膏-知母组合物指纹图谱相似度均大于 0.9,CA与PCA均可将 12 批样品分为 3 类;6 个指标的含量均存在一定差异;石膏、知母合煎可明显促进Na+、K+、Mg2+、新芒果苷的溶出.结论:建立的石膏-知母组合物指纹图谱及多指标成分含量测定方法准确度高、重复性好,可为石膏-知母药对的质量评价及物质基础研究提供参考.

该研究开发经典名方瓜蒌薤白半夏汤(Gualou Xiebai Banxia Decoction,GXBD)基准物质最优前处理技术,建立GXBD基准物质全面质量控制方法,为其整体质量评价提供参考.作者制备15批GXBD样品并创新性地采用基峰色谱图模式下的提取离子色谱图建立液相色谱-质谱联用(LC-MS)指纹图谱,鉴别其特征峰,对其进行归属,并对指标性成分进行定量分析.15批GXBD样品的出膏率50.28％～76.20％.在正离子模式下,LC-MS指纹图谱共检测到12个共有特征峰,通过与对照品比对,鉴定了其中5个共有峰的结构,不同批次样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.920～0.984.最后,采用液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(LC-QQQ/MS)以多反应监测(MRM)模式对GXBD中8个指标性成分黑麦草内酯、金圣草黄素、芦丁、葫芦素D、薤白皂苷Ⅰ、25S-知母皂苷B Ⅱ、25R-知母皂苷B Ⅱ和五肽脯氨酸-色氨酸-缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸(proline-trypto-phan-valine-proline-glycine,PWVPG)进行了含量测定.该研究所建立的方法能降低复方中基质干扰,准确性、稳定性良好,具有较大实用价值,有效地反映出GXBD样品的质量属性,可用于GXBD全面整体的质量控制.

玉女煎是治疗胃热阴虚所致慢性牙周炎的经典名方,化学成分主要包括环烯醚萜苷类、甾体皂苷类、双苯吡喃类、异黄酮类、糖类、生物碱、无机盐等成分.文章根据中药质量标志物(Q-marker)的研究方法预测玉女煎的质量标志物.在此基础上,根据成分传递与溯源性筛选从药材传递到方剂的成分,根据特有性筛选方剂专属性成分,根据可测性评测指标成分的可测性,将成分重要性按配伍规律排序,再对玉女煎药效成分进行分析,明确有效性评价指标.基于"五原则"预测发现芒果苷、知母皂苷BⅡ、β-蜕皮甾酮、鲁斯可皂苷元、地黄苷D、梓醇可作为玉女煎的质量标志物,为相关产品研发和质量评价体系提供参考.

目的 研究知母皂苷B-Ⅱ抑制人胃癌细胞株BGC-823和MGC-803增殖及迁移的作用机制.方法 使用终浓度为50 ng/mL的知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823和MGC-803细胞48 h,用qPCR和蛋白质印迹实验分别检测细胞内清道夫受体A5(SCARA5)的mRNA含量及蛋白表达;采用生物信息学方法预测hsa-miRNA-766-3p与SCARA53′UTR区的结合位点,并通过荧光素酶报告基因实验进行验证;转染hsa-miRNA-766-3p mimic或siRNA-SCARA5至BGC-823、MGC-803细胞,24 h后使用50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理细胞48 h,用qPCR和蛋白质印迹实验检测细胞内hsa-miRNA-766-3p相对含量和SCARA5蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖活性及迁移能力.结果 50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823、MGC-803细胞48 h能增强肿瘤细胞中SCARA5蛋白表达(P<0.01),而SCARA5 mRNA相对含量变化差异无统计学意义(P>0.05).与报告基因表达载体单独转染比较,hsa-miRNA-766-3p mimic和hsa-miRNA-766-3p inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染可分别抑制和增强细胞内荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01);hsa-miRNA-766-3p mimic和hsa-miRNA-766-3p inhibitor转染对突变型荧光素酶报告基因载体荧光素酶活性无明显影响(P>0.05).50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823、MGC-803细胞48 h,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量均降低,SCARA5蛋白表达则升高(P<0.01);hsa-miRNA-766-3p mimic转染+皂苷处理与单纯皂苷处理比较,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量上升(P<0.01)、SCARA5蛋白表达降低(P<0.01);siRNA-SCARA5转染+皂苷处理与单纯皂苷处理比较,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量无明显变化(P>0.05),但SCARA5蛋白表达降低(P<0.01).细胞增殖及迁移实验检测结果表明,与细胞对照或溶媒对照比较,经知母皂苷B-Ⅱ处理的胃癌细胞BGC-823和MGC-803增殖活性及迁移能力均降低(P<0.01),siRNA-SCARA5转染+皂苷处理的细胞增殖活性和迁移能力与单纯皂苷处理的细胞相比增强(P<0.01).结论知母皂苷B-Ⅱ能够抑制hsa-miRNA-766-3p的表达,进而上调其靶基因SCARA5的表达,最终抑制胃癌细胞BGC-823和MGC-803的增殖和迁移.

目的 考察知母皂苷BⅡ在不同生理pH介质和生物样品中的体外稳定性.方法 取知母皂苷BⅡ分别在不同生理pH介质(pH 1.2,6.8,7.4,8.0)的缓冲液、人工胃液、无蛋白酶人工胃液、人工肠液、无蛋白酶人工肠液介质和离体生物介质中进行孵育,利用HPLC测定不同介质中知母皂苷BⅡ的含量变化,考察知母皂苷BⅡ的降解情况及酶稳定性.结果 知母皂苷B Ⅱ在不同生理pH介质溶液中9h内未发生明显降解,在离体大鼠大肠和小肠及其内容物中发生明显降解.结论 知母皂苷B Ⅱ在模拟人体胃肠道环境的溶液中很稳定,不会发生明显降解,在大鼠大肠及其内容物和小肠及其内容物中发生明显降解,不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响,受肠道茵群作用的影响.