目的:研究秀丽隐杆线虫肌肉表达物3 （caenorhabditis elegans muscle excess, Mex3c）基因敲除对胚胎神经管发育及其线粒体凋亡相关蛋白的影响。方法:利用聚合酶链式反应（PCR）法鉴定小鼠基因型，根据鉴定结果将雌鼠分为Mex3c +/+（WT组）与Mex3c -/-（KO组），按随机数字表法每组选取10只，另选鉴定好的Mex3c +/+雄鼠10只用于繁殖，获取第14. 5 d胚胎。HE染色观察胚胎神经管的形态变化，免疫组织化学及蛋白质印迹法检测nestin蛋白表达水平；透射电镜观察胚胎神经管及其线粒体的超微结构，JC-1检测线粒体膜电位的变化，荧光素酶法测定线粒体ATP含量；Tunel染色检测胚胎神经细胞的凋亡情况，蛋白质印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。测定的线粒体膜电位、ATP含量、nestin蛋白、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、tunel阳性细胞数均符合正态分布，进行两样本 t检验。 结果:HE染色结果显示与WT组相比，KO组胚胎神经管的神经细胞密度较低。免疫组织化学结果显示，WT组及KO组nestin蛋白的相对表达量分别为16. 40±0. 61和11. 84±0. 61，组间差异有统计学意义（ P<0. 001）；蛋白质印迹法检测结果显示，WT组及KO组nestin蛋白的相对表达量分别为0. 84± 0. 35和0. 65±0. 20，组间差异有统计学意义（ P<0. 01）。透射电镜下可见两组神经管中神经元细胞突触前、后膜均清晰，但KO组突触间隙消失有一定程度融合，神经管发育具有明显的缺陷；而KO组胚胎神经管线粒体水肿，线粒体嵴断裂、模糊甚至消失。JC-1荧光探针检测结果显示，KO组线粒体膜电位为32 939. 00±1173. 35较WT组的45 133. 67±3799. 31下降，组间差异有统计学意义（ P< 0. 01）。ATP含量检测显示，KO组（0. 48±0. 35 ）μmol/L较WT组（0. 65±0. 36）μmol/L下降，组间差异有统计学意义（ P<0. 01）。Tunel染色结果显示，KO组tunel阳性细胞数（88. 33±14. 57）个比WT组（46. 67±6. 80）个明显增多，组间差异有统计学意义（ P<0. 05）。蛋白质印迹法检测Bax/Bcl-2比值结果显示，KO组1. 44±0. 12高于WT组0. 90±0. 42，组间差异有统计学意义（ P<0. 01）。 结论:Mex3c基因敲除会引起小鼠胚胎神经管发育障碍及线粒体凋亡增加。

目的:探讨秀丽隐杆线虫肌肉表达物3(caenorhabditis elegans muscle excess，Mex3c)参与调控小鼠胚胎神经管发育中的配对盒基因(paired box 3，PAX3)、巢蛋白(Nestin)的表达及其对于神经管发育的影响。方法:选取Mex3c +/-和正常野生型小鼠各18只和正常野生型雄鼠6只(用于繁殖)。在母鼠孕10.5 d、12.5 d、14.5 d时，两组各取6只母鼠获取小鼠胚胎并记录总胚胎数、吸收胎数、存活胎数。免疫组织化学染色及蛋白质印迹法检测小鼠胚胎Nestin、PAX3表达，免疫荧光染色检测PAX3，Tunel染色检测细胞凋亡，HE染色观察形态学变化。总胚胎数、吸收胎数、存活胎数为计数资料采用卡方检测；测定的Nestin蛋白、PAX3蛋白、Mex3c蛋白、细胞凋亡数据检测符合正态分布，进行单因素方差分析及S-N-K两两比较。 结果:免疫组织化学染色检测母鼠下丘脑Mex3c蛋白表达，Mex3c组(16.52±1.60)较对照组(26.05±2.00)低，且差异有统计学意义( P<0.0001)。各组不同时期吸收胎及总胚胎数差异无统计学意义( P>0.05)，表明缺陷Mex3c基因不会导致子代胚胎发育畸形。HE染色结果显示，与对照组相比，Mex3c组神经细胞较小、密度较低。Tunel染色结果显示，Mex3c组孕10.5 d、12.5 d、14.5 d小鼠胚胎神经管内凋亡细胞表达阳性率分别为(12.20±1.30)%、(11.20±0.84)%和(10.00±0.71)%，与对照组的(4.83±1.17)%、(5.17±0.75)%和(7.17±0.75)%比较，差异均有统计学意义( P均<0.01)。免疫组织化学染色结果显示，Nestin蛋白表达在神经纤维，PAX3蛋白表达在细胞核。免疫荧光实验检测PAX3蛋白结果显示，Mex3c组孕12.5 d和孕14.5 d小鼠胚胎PAX3蛋白表达阳性率分别为(9.20±1.30)%和(8.80±1.30)%，与对照组(5.83±0.98)%和(3.67±0.82)%比较，差异均有统计学意义( P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示，Mex3c组孕10.5 d、12.5 d、14.5 d时小鼠胚胎Nestin蛋白表达水平分别为0.06±0.02、0.57±0.09和0.69±0.04，与对照组0.79±0.07、0.39±0.14和0.27±0.07比较，Mex3c组表达呈上升趋势而对照组呈下降趋势，组间不同时间点比较，差异均有统计学意义( P均<0.05或0.001)。Mex3c组孕10.5 d、12.5 d、14.5 d时小鼠胚胎PAX3蛋白表达水平分别为0.17±0.02、0.63±0.09和0.72±0.03，与对照组0.03±0.01、0.46±0.08和0.45±0.06比较，Mex3c组表达呈上升趋势而对照组呈下降趋势，组间不同时间点比较，差异均有统计学意义( P均<0.01或0.001)。 结论:Mex3c参与调控小鼠胚胎神经管发育中PAX3、Nestin蛋白表达并抑制神经管中神经细胞发育及成熟和促使神经管内细胞凋亡。

目的:探讨不同能量平衡对胎盘瘦素(leptin)及瘦素受体(leptin receptor，LEPR)表达和脑发育中巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达的影响。方法:选取FVB/N(宁夏医科大学动物中心)雌性小鼠54只利用随机数字表分为3组：秀丽隐杆线虫肌肉表达物3组(Mex3c)，高脂饮食组(HFD)和对照组(给予普通饲料)全部饲养至14周龄，各18只。在母鼠孕10.5、12.5、14.5 d时获取实验标本。苏木精-伊红(HE)染色观察孕12.5 d、孕14.5 d的胚胎脑部形态学变化，免疫组织化学实验(IH)检测孕14.5 d胚胎前脑、中脑、小脑内nestin表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测孕14.5 d胚胎脑部nestin、GFAP表达和孕10.5 d、孕12.5 d、孕14.5 d的胎盘组织内leptin、LEPR表达。组间比较单因素方差分析。结果:HE结果12.5 d及14.5 d的对照组、Mex3c组、HFD组鼠胚胎形态学染色未见明显不同但对照组左右脑比Mex3c组、HFD组发育完全。Western blot结果，胎盘孕10.5 d、孕12.5 d、孕14.5 d时对照组leptin蛋白(0.43±0.13)、(0.64±0.23)、(0.67±0.18)高于Mex3c组(0.04±0.02， t＝7.91， P<0.01)、(0.07±0.01， t＝8.49， P<0.01)、(0.18±0.07， t＝9.03， P<0.01)和HFD组(0.06±0.02， t＝7.05， P<0.01)、(0.09±0.03， t＝8.10， P<0.01)、(0.30±0.14， t＝5.83， P<0.01)。胎盘孕10.5 d、孕12.5 d、孕14.5 d时对照组LEPR蛋白高于(0.36±0.03)、(0.60±0.13)、(0.34±0.12)Mex3c组(0.10±0.02， t＝17.72， P<0.01)、(0.15±0.03， t＝13.17， P<0.01)、(0.21±0.05， t＝4.98， P<0.01)和HFD组(0.09±0.04， t＝12.35， P<0.01)、(0.20±0.06， t＝11.01， P<0.01)、(0.18±0.04， t＝5.94， P<0.01)。IH结果nestin表达在神经纤维上；Western blot结果对照组孕14.5 d的nestin蛋白表达(0.15±0.31)低于Mex3c组(0.56±0.09， t＝13.96， P<0.01)和HFD组(0.52±0.14， t＝8.71， P<0.01)表达；对照组孕14.5 d的GFAP蛋白表达(0.38±0.06)高于Mex3c组(0.13±0.02， t＝15.10， P<0.01)和HFD组(0.08±0.03， t＝17.99， P<0.01)。 结论:正负能量平衡通过抑制小鼠胎盘leptin、LEPR表达进而诱导小鼠脑部高表达nestin抑制GFAP表达可能影响脑发育及成熟。

目的 探索秀丽隐杆线虫肌肉表达物3(Mex3c)诱导下丘脑神经核团C-FOS蛋白(原癌基因表达产物)表达的作用.方法 8周龄正常和Mex3c-/+小鼠各15只,随机分为正常对照组、正常瘦素组、正常饥饿激素组、Mex3c-/+对照组、Mex3c-/+瘦素组、Mex3c-/+饥饿激素组,每组5只,Mex3c-/+各组小鼠注射干预及数量同正常一样且均采取腹腔注射.注射2 h后麻醉灌注后取小鼠脑组织,免疫组织化学染色分析下丘脑弓状核(Arc)、腹内侧核(VMH)核团C-FOS蛋白的表达量.结果 病理学染色正常小鼠和Mex3c-/+小鼠未见明显差异.免疫组化结果显示,正常对照组小鼠下丘脑Arc、VMH核团中C-FOS蛋白表达量较低,在注射瘦素和饥饿激素2 h后C-FOS的表达量均增加(P<0.05);Mex3c-/+对照小鼠相比正常正常对照小鼠,C-FOS为高表达(P<0.05),与正常瘦素组小鼠差异无统计学意义(P>0.05);给予Mex3c-/+小鼠饥饿激素干预后,C-FOS的表达量下调(P<0.05),正常瘦素组和饥饿激素组与Mex3c-/+对照组和瘦素组之间C-FOS表达量差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 Mex3c可以诱导小鼠下丘脑Arc、VMH核团C-FOS的表达进而参与神经信号转导.

目的 阿尔茨海默病(AD)是世界第一的神经退行性疾病,目前缺乏有效的治疗药物.研究发现,AD与2型糖尿病(T2DM)之间存在密切联系.课题组系统分析了19种糖尿病治疗复方,从中筛选出具有AD治疗作用的黄芪葛根汤,并通过网络药理学以及现代药理学基础分析探讨黄芪葛根汤治疗AD的潜在靶点及信号通路,阐述其可能的作用机制.方法 采用Aβ1-42基因诱导的秀丽隐杆线虫作为AD病理模型,探讨黄芪葛根汤的抗AD作用.从TCMSP和BATMAN-TCM数据库搜索黄芪葛根汤中2味中药的化合物及靶点,使用GeneCards、NCBI、CTD以及OMIM数据库检索AD和T2DM的靶点;通过STRING数据库构建蛋白质相互作用网络;通过cytoHubba,选择MCC对关键靶点进行分析;采用Metascape数据库对关键靶点进行聚类分析;采用Omicshare平台对关键靶点进行KEGG分析及GO分析,以获取潜在靶标与机制.结果 黄芪葛根汤共包含2味中药,14种化合物,相对应的药物靶标有113个,黄芪葛根汤、AD、T2DM共同交集靶点共31个.对交集靶点进行MCC聚类分析获得JUN,PTGS2和SIRT1等核心靶点.交集靶点可以聚类为3类,分别与过氧化物酶体增殖剂激活受体信号传导途径、发育生长和凋亡信号通路有关,这些途径和AD密切相关.通过KEGG信号通路富集筛选所得排名前三的信号通路分别为钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用和cAMP信号通路.GO分析得到主要的生物过程聚类分析包括氮化合物的细胞反应、血液循环和神经递质水平的调节;细胞组成聚类分析主要有突触后膜、突触后、突触膜;核心分子功能聚类分析包括神经递质受体活性、核糖核酸聚合酶Ⅱ特异性脱氧核糖核酸结合转录因子结合,以及乙酰胆碱结合.另外,秀丽隐杆线虫实验结果表明,黄芪葛根汤可以延缓线虫肌肉组织因过度表达Aβ1-42导致麻痹表型的AD样病理特征,其中0.5 g·L-1的抗AD活性最优.进一步实验证明黄芪葛根汤还可显著减缓泛神经元过度表达Aβ1-42导致的线虫对外源5-羟色胺超敏感的AD样病理特征.结论 黄芪葛根汤可能通过对钙离子稳态失衡、线粒体氧化应激、炎症等的调节治疗AD,且实验研究证明黄芪葛根汤对AD线虫有治疗作用.

目的 探讨秀丽隐杆线虫肌肉表达物3(Mex3c)诱导下的负能量状态中瘦素(leptin)、瘦素受体(leptin receptor,LEPR)蛋白在肾小管细胞中表达作用研究.方法 选取FVB/N小鼠18只,分为三组,高脂饮食组(HFD组)、对照组、Mex3c组.HE染色观察肝脏、脂肪及肾脏组织;ELISA检测血清内LEPR、肌酐浓度;免疫组化染色、蛋白印迹法、RT?PCR测定leptin、LEPR表达结果.结果 HE染色结果显示,与对照组的肝脏相比,Mex3c组中有脂滴和HFD组内有大脂滴.HFD组的腹部脂肪细胞比对照组、Mex3c组大且融合.与对照组相比,HFD组和Mex3c组的肾小球与包囊空隙大.与对照组leptin的mRNA相比,Mex3c组和HFD组均高表达(P<0.01);与对照组LEPR mRNA结果相比,Mex3c组和HFD组均低表达LEPR(P<0.05).免疫组化结果显示,leptin和LEPR均表达在肾小管细胞膜;蛋白印迹结果显示,与对照组的leptin和LEPR相比,Mex3c组leptin高表达、LEPR低表达(均P<0.05)和HFD组leptin高表达、LEPR低表达(均P<0.01).与对照组血清中LEPR相比,HFD组高表达(P<0.01).与对照组血清肌酐相比,Mex3c组低表达和HFD组高表达(均P<0.01).结论 正负能量失调导致肾脏组织高表达leptin蛋白,低表达LEPR蛋白;特别是正能量失调可致肾脏功能损伤.