目的:探讨基于药敏试验比例法的耐多药肺结核(multidrug-resistant pulmonary tuberculosis，MDR-PTB)患者精准治疗的效果，为制订MDR-PTB治疗方案提供科学依据。方法:选取2016年1月5日至2018年4月30日在深圳市慢性病防治中心行结核病治疗的180例MDR-PTB确诊患者，初始治疗方案为6个月阿米卡星、吡嗪酰胺、左氧氟沙星、乙胺丁醇、丙硫异烟胺/18个月吡嗪酰胺、左氧氟沙星、乙胺丁醇、丙硫异烟胺。根据是否完善10种常用药物的药敏试验比例法分为精准治疗组和经验治疗组，精准治疗组根据药物敏感试验结果调整治疗方案。回顾性分析两组患者治疗方案及病情转归等资料。统计学分析采用 χ2检验。 结果:180例患者中，精准治疗组113例，经验治疗组67例。精准治疗组药物的耐药率从低到高依次为：卷曲霉素(0，0/113)、阿米卡星(2.65%，3/113)和卡那霉素(2.65%，3/113)、对氨基水杨酸(7.96%, 9/113)、丙硫异烟胺(11.50%，13/113)、氧氟沙星(38.05%, 43/113)、乙胺丁醇(39.82%, 45/113)、链霉素(76.99%, 87/113)。精准治疗组患者在治疗过程中根据药敏试验比例法进行药物调整104人次，从低到高依次为：阿米卡星(3人次)、丙硫异烟胺(13人次)、左氧氟沙星(43人次)、乙胺丁醇(45人次)。精准治疗组治疗成功率为78.8%(89/113)，高于经验治疗组的52.2%(35/67)，差异有统计学意义( χ2＝13.805， P＝0.000 2)。精准治疗组和经验治疗组患者治疗过程中，丙氨酸转氨酶升高[32.3%(31/96)比34.0%(18/53)]、血肌酐升高[4.2%(4/96)比5.7%(3/53)]、白细胞计数减少[24.0%(23/96)比22.6%(12/53)]患者比例差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:基于药敏试验比例法的传统MDR-PTB治疗方案具有较高的治疗成功率，仍是值得选择的治疗方式。

目的:探讨北京市北京基因型MTB的流行风险因素及其与二线抗结核药物耐药性的相关性。方法:收集北京各区县MTB菌阳临床株1 140例，采用比例法进行药敏试验；采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）方法鉴定北京基因型与非北京基因型MTB；使用SPSS 22.0统计学软件，采用χ 2检验或Fisher精确概率检验方法对实验数据进行统计学分析。 结果:在1 140株MTB临床分离株中，北京基因型941株（82.5%），非北京基因型199株；北京基因型菌株来源的患者中男性663例（70.5%），非北京基因型菌株来源的患者中男性124例（62.3%），两者比较差异有统计学意义[ P=0.021， OR（95 %CI）:1.442（1.048~1.985）]；北京基因型菌株来源的患者中流动人口441例（46.9%），非北京基因型菌株来源的患者中流动人口78例（39.2%），两者比较差异有统计学意义[ P=0.048， OR （95 %CI）：1.368（1.001~1.869）]；北京基因型菌株来源的患者中年龄≥65岁的患者129例（13.7%），非北京基因型菌株来源的患者中40例（20.1%），二者比较差异有统计学意义[ P=0.021， OR（95 %CI）：0.631（0.426~0.936）]；北京基因型菌株中对左氧氟沙星（Levofloxacin, Lfx）、阿米卡星（Amikacin, Am）、卷曲霉素（Capreomycin, Cm）、对氨基水杨酸（Para-aminosalicylic, PAS）的耐药率分别为5.5%（52/941）、1.3%（12/941）、3.2%（30/941）和3.0%（28/941），非北京基因型菌株对以上4种药物的耐药率分别为10.6%（21/199）、8.5%（17/199）、12.6%（25/199）和11.6%（23/199），二者对4种药物的耐药率比较差异均有统计学意义（均 P<0.05）；北京基因型菌株中耐多药（MDR）菌株58株（6.2%），非北京基因型菌株中MDR菌株19株（9.5%），两者比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:北京基因型MTB在北京广泛流行且在男性人群和流动人口中的比例较高；与非北京基因型菌株相比，北京基因型菌株对Lfx、Am、Cm及PAS的耐药率低，但MDR-TB患者的比例无显著差异。

目的:比较二代测序（NGS）检测方法在痰标本和结核分枝杆菌菌株中耐药性的诊断效能，从而探讨NGS方法检测痰标本耐药性的可行性。方法:本研究属于回顾性研究，收集了北京胸科医院2017年1—12月收治50例肺结核患者的痰标本和相应的临床分离菌株。用NGS方法分别检测痰标本和相应的临床分离菌株 katG、 inhA、 rpoB、 embA、 embB、 rpsL、 rrs、 gyrA、 gyrB、 tlyA的基因突变。采用比例法对菌株进行表型药敏试验（drug susceptibility test，DST）。以DST结果为参考，分别计算临床菌株NGS方法、痰标本NGS方法敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，以及与表型DST的一致性统计量（ Kappa）。对于NGS检测在痰标本和菌株样本中的准确性比较用 χ2检验。 结果:在各种突变基因中， rpoB（63.83%，30/47）与 rrs（57.45%，27/47）最常见，其次是 katG（46.81%，22/47）、 rpsL（29.79%，14/47）、 gyrA（27.66%，13/47）、 embB（21.28%，10/47）、 tlyA（12.77%，6/47）、 gyrB（8.51%，4/47），以及 inhA启动子区（19.15%，9/47）、 embA启动子区（12.77%，6/47）突变。NGS方法与异烟肼、利福平、乙胺丁醇、二线注射类药物（链霉素、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星）、左氧氟沙星的耐药表型相比，在痰样本中，敏感度分别为85.71%、91.67%、77.78%、81.82%、100.00%、87.50%、100.00%、69.23%，特异度分别为100.00%、94.12%、87.50%、89.47%、97.06%、96.97%、94.29%、89.29%。在菌株样本中，敏感度分别为92.86%、100.00%、81.82%、86.96%、88.89%、80.00%、100.00%、85.71%，特异度分别为100.00%、92.86%、87.10%、94.74%、100.00%、100.00%、97.14%、92.86%。与表型药敏结果相比，在痰标本中，NGS方法对异烟肼、利福平、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星具有较好的检测效能（ Kappa值≥0.75）；在菌株中，NGS方法对异烟肼、利福平、链霉素、卷曲霉素、卡那霉素，阿米卡星及左氧氟沙星具有较好的检测效能（ Kappa值≥0.75）。以NGS方法检测菌株的准确度为参照，检测的所有药物耐药情况在菌株和痰标本中的准确性差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:本研究表明通过NGS技术检测痰标本及菌株基因型来预测异烟肼、利福平及二线注射类药物（卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星）耐药均具有较好的效能，提示NGS方法直接检测痰标本作为早期耐药检测方法的可行性及潜力。

目的:分析儿童感染性角膜炎的病原学特征。方法:回顾性研究。纳入2007至2016年在首都医科大学附属北京同仁医院眼科拟诊为细菌性、真菌性、棘阿米巴性角膜炎的14岁及以下639例（649只眼）患者的资料，其中男性361例，女性278例，年龄（5.6±4.4）岁。按年龄≤3岁、4~7岁、>7岁分别进行分析。收集患眼角膜病灶组织标本649份进行病原学检查及药物敏感试验。定性资料的比较采用 χ2检验。 结果:在649份标本中140份培养结果为阳性，阳性率21.6%。细菌培养标本共368份，其中培养阳性114份（占培养阳性标本总数的81.4%），阳性率31.0 %；细菌菌群分布主要为革兰阳性球菌，其次是革兰阴性杆菌。链球菌属（34.2%）居首位，其次是葡萄球菌属（27.2%）和假单胞菌属（7.9%），≤7岁患儿的标本中肺炎链球菌最常见，8~14岁者表皮葡萄球菌最常见。革兰阳性球菌均对万古霉素敏感；大多数细菌对氟喹诺酮类药物敏感性较高，对头孢类和氨基甙类抗菌药敏感性较低，耐甲氧西林葡萄球菌检出率为68%（17/25）。细菌对各种喹诺酮类抗菌药的敏感率为59.0%~84.4%，其中加替沙星最高，但与莫西沙星、左旋氧氟沙星、氧氟沙星相比差异无统计学意义（ χ2=0.836，0.358，1.490； P=0.361，0.550，0.222）。真菌培养标本共254份，其中培养阳性22份（占培养阳性标本总数的15.7%），阳性率8.7%。2007至2011年真菌培养阳性率为9.2%（11/119），2012至2016年为8.1%（11/135），差异无统计学意义（ χ2=0.096， P=0.757）。真菌感染的菌群分布主要为镰刀菌属（34.8%，8/22）、曲霉菌属（26.1%，6/22）和念珠菌属（13.0%，3/22）。镰刀菌属对特比萘芬敏感率较高，对氟康唑和伊曲康唑不敏感；曲霉属对特比萘芬和伏立康唑敏感率高，两性霉素次之；念珠菌属对两性霉素、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑敏感率高。棘阿米巴送检标本27份，培养阳性4份（占培养阳性标本总数的2.9%），阳性率14.8%，危险因素包括佩戴角膜塑形镜和外伤。 结论:细菌是儿童感染性角膜炎主要致病病原，其中7岁及以下的患儿肺炎链球菌最常见，8~14岁者表皮葡萄球菌最常见；真菌感染明显低于细菌，以镰刀菌属、曲霉属和念珠菌属为主。

目的:评价全基因组测序（WGS）技术对耐多药结核病二线注射类抗结核药物耐药性检测的临床应用价值。方法:利用比例法药敏试验和WGS同时对2013至2017年深圳市慢性病防治中心结核病实验室菌株库保存的172株耐多药结核病（MDR）菌株进行卡那霉素、阿米卡星和卷曲霉素3种二线注射类抗结核药物耐药性检测。以比例法药敏试验为金标准，评价WGS的敏感度、特异度和一致性。两种方法有差异的样本用最低抑菌浓度（MIC）检测法进行比较。采用McNemer检验对两种方法的检出率进行统计分析， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:共172株MDR菌株纳入本研究，WGS检测发现了2个突变基因： rrs和 eis基因， rrs-A1401G是主要的突变位点，分别占阿米卡星、卡那霉素和卷曲霉素耐药菌株的58.3%、14/18和14/14。WGS预测阿米卡星的敏感度、特异度和一致性分别为14/15、93.6%和68.0%；卡那霉素的敏感度、特异度和一致性分别为15/15、98.1%和90.0%；卷曲霉素的敏感度、特异度和一致性分别为14/15、100%和96.0%。2种方法检测结果不一致的菌株共13株，MIC复检1株为耐药菌株，12株为敏感菌株。阿米卡星检测结果不一致的菌株11株，其中WGS检测结果显示8株发生 rrs-514-A/C位点突变，而药敏试验和MIC检测均为敏感。 结论:WGS诊断阿米卡星、卡那霉素和卷曲霉素具有较高的敏感度和特异度，一致性较强，表明WGS技术在实际应用中对MDR菌株二线注射类抗结核药物耐药检测具有较高的真实性，可广泛应用于临床。

目的:探讨北京地区初治和复治肺结核病病例中北京基因型结核分枝杆菌( M. tb)流行与抗结核药物耐药性出现的相关性。 方法:收集北京各区县菌阳 M. tb临床分离株1 140例，采用比例法进行药物敏感性检测；应用间隔区寡核苷酸分型方法鉴定北京基因型和非北京基因型；分析基因型流行和耐药性产生间的相关性。 结果:在初治病例中，北京基因型 M. tb中异烟肼(INH)、阿米卡星(AK)、卷曲霉素(CPM)和对氨基水杨酸(PAS)的耐药率均低于非北京基因型( χ2值分别为2.670、15.282、16.219、22.676， P值均<0.05)。在复治病例中，北京基因型 M. tb中AK、PAS的耐药率均低于非北京基因型( χ2值分别为15.167、4.574， P值均<0.05)；北京基因型 M. tb中耐多药结核病菌株的比例低于非北京基因型( χ2值为7.046， P<0.05)。 结论:在初治和复治病例中北京基因型 M. tb的流行和抗结核药物耐药性的出现有不同的相关性，在初治病例中和INH、AK、CPM和PAS耐药性的出现有关联，而在复治病例中只在AK和PAS耐药性的产生上有关联，同时在复治病例中北京基因型菌株中出现耐多药结核病的概率更低。

目的:分析甘肃省初治肺结核患者耐药现状及其影响因素，为精准防控提供参考依据。方法:纳入2014年9月至2017年8月甘肃省30家结核病定点医疗机构（耐药监测点）初治肺结核患者，并进行问卷调查。临床分离的结核分枝杆菌进行异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、卡那霉素、阿米卡星、氧氟沙星、卷曲霉素、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸钠10种抗结核药物表型药敏（比例法）鉴定。采用logistic回归模型分析耐多药结核病产生的危险因素。结果:1 815例初治患者中，1例患者对应1株结核分枝杆菌，其中总耐药率、单耐药、多耐药、耐多药和广泛耐药率及其95% CI分别为25.45%（23.45%~27.46%）、11.40%（9.94%~12.87%）、6.23%（5.11%~7.34%）、7.82%（6.59%~9.06%）、0.28%（0.03%~0.52%）；142例耐多药患者中，农民、20~59岁青壮年及低收入者分别占90.85%、62.68%、31.69%。单因素及多因素分析结果显示，男性、少数民族、治疗<1个月且停药<2个月为耐多药结核病的危险因素。 结论:与全国平均水平相比，甘肃省初治患者总耐药率低，但耐多药率高。对农村低收入结核病患者提供救助是甘肃省遏制耐多药传播的重要策略，重点关注并解决患者治疗不规范及依从性差等问题。

目的:对武汉地区呼吸道非结核分枝杆菌(NTM)的分离与耐药情况,以及确诊为NTM肺病患者的临床特征进行分析,为疾病的防治提供参考.方法:采用回顾性研究方法,搜集2021年3月至2023年10月于武汉市肺科医院就诊的疑似肺部分枝杆菌感染住院患者作为研究对象,共计8619例.研究对象年龄均≥15岁,呼吸道样本(包括痰、诱导痰、支气管肺泡灌洗液)分枝杆菌病原学(分枝杆菌培养)阳性和(或)菌种鉴定为NTM.收集所有研究对象的病史、临床特征、影像学表现、临床诊断及治疗等资料.对NTM菌株分离情况、人口学特征及耐药情况进行统计;将确诊为NTM肺病患者,按胞内分枝杆菌(胞内组)、脓肿分枝杆菌(脓肿组)及堪萨斯分枝杆菌感染(堪萨斯组)分为三组,比较各组研究对象的基本情况、临床症状、影像学表现、基础疾病及合并肺部疾病等方面的情况.结果:8619例研究对象中有629例的临床分离菌株鉴定为NTM菌株,NTM分离率为7.30％.共分离653株NTM菌株,主要菌种包括胞内分枝杆菌398株(60.95％)、脓肿分枝杆菌138株(21.13％)、鸟分枝杆菌41株(6.28％)、堪萨斯分枝杆菌41株(6.28％).确诊为NTM肺病的510例患者中,女性297例(58.24％),主要临床症状为咳嗽(71.96％,367/510)、咳痰(51.76％,264/510)、咯血(26.67％,136/510);影像学表现主要为斑片影(61.57％,314/510)、结节影(65.49％,334/510)、支气管扩张影(79.02％,403/510)、空洞影(40.98％,209/510);基础疾病主要为贫血(24.12％,123/510)和低蛋白血症(24.90％,127/510);合并肺部疾病主要有肺气肿肺大疱(18.63％,95/510)、慢性阻塞性肺疾病(17.84％,91/510).三组NTM肺病为胞内组332例、脓肿组115例、堪萨斯组35例.胞内组、脓肿组、堪萨斯组女性分别占55.12％(183/332)、75.65％(87/115)、17.14％(6/35),差异有统计学意义(x2=39.534,P＜0.001);胞内组、脓肿组、堪萨斯组平均年龄分别为(63.60±10.67)岁、(60.60±10.26)岁、(53.30±13.20)岁,差异有统计学意义(F=15.724,P＜0.001);胞内组、脓肿组、堪萨斯组吸烟者占比[分别为 23.19％(77/332)、12.17％(14/115)、42.86％(15/35);x2=15.623,P＜0.001]、饮酒者占比[分别为10.54％(35/332)、4.35％(5/115)、22.86％(8/35);x2=10.079,P=0.006]差异均有统计学意义.胞内组、脓肿组、堪萨斯组的支气管扩张影发生率[分别为78.31％(260/332)、90.43％(104/115)、54.29％(19/35);x2=22.345,P＜0.001]、空洞影发生率[分别为 42.77％(142/332)、29.57％(34/115)、68.57％(24/35);x2=17.534,P＜0.001]差异均有统计学意义.胞内组、脓肿组、堪萨斯组慢性阻塞性肺病发病率[分别为18.67％(62/332)、15.65％(18/115)、37.14％(13/35);x2=8.222,P=0.016]、肺曲霉病发病率[分别为 6.93％(23/332)、1.74％(2/115)、11.43％(4/35);x2=7.016,P=0.030]差异均有统计学意义.鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌对克拉霉素、阿米卡星、利奈唑胺耐药率分别为 0、0、23.53％(4/17)和 3.14％(5/159)、6.92％(11/159)、13.21％(21/159);堪萨斯分枝杆菌对克拉霉素、阿米卡星、利奈唑胺、莫西沙星、利福平及利福布汀耐药率均为0,对环丙沙星耐药率为43.75％(7/16);脓肿分枝杆菌对克拉霉素、阿米卡星、利奈唑胺、头孢西丁耐药率分别为7.02％(4/57)、1.75％(1/57)、43.86％(25/57)、8.77％(5/57).结论:武汉地区疑似肺部分枝杆菌感染住院患者呼吸道分离NTM菌种主要以胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为主;除堪萨斯分枝杆菌外,其他NTM对常用抗结核药物均有较高耐药率;胞内分枝杆菌肺病、脓肿分枝杆菌肺病和堪萨斯分枝杆菌肺病患者性别分布、影像学表现及合并症均存在一定的差异.

目的 利用全合成纳米抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的纳米抗体.方法 制备AFB1完全抗原并依托全合成纳米抗体库进行4轮筛选,将捕获的高亲和力抗体基因转化至原核表达系统表达,分析纯化后的抗体特异性及亲和力,并构建抗体G5-AFB1复合三维结构,分析二者的结合特点.结果 在AFB1完全抗原制备基础上筛选,随着轮数的增加,特异性噬菌体明显富集,最终获得一株阳性单克隆G5,经鉴定,其半数效应浓度(effec-tive concentration 50％,EC50)为 0.953 μmol/L,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为 43 μmol/L.另外,G5-AFB1复合物不仅形成了稳定的氢键,也具备较好的疏水和静电作用.结论 通过全合成纳米抗体库可以筛选出良好的AFB1抗体,为AFB1检测与治疗提供了良好基础,也证实了噬菌体展示技术以及全合成纳米抗体库在小分子生物毒素抗体制备中具有较大的发展潜力.

[目的]通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素.[方法]以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3 进行过表达;通过荧光显微镜观察CmCns1 和CmCns2 在米曲霉中的亚细胞定位;利用高效液相色谱法(HPLC)测定转基因米曲霉虫草素含量,同时对米曲霉发酵液添加合成虫草素的前体甘氨酸和腺嘌呤,探究其在米曲霉中对合成虫草素的影响.[结果]蛹虫草CmCns1 和CmCns2 在米曲霉中定位于脂滴;并且米曲霉中单独过表达CmCns1、共表达CmCns1 和CmCns2 以及共表达CmCns1-CmCns3 均能合成虫草素,发酵 48 h虫草素胞外产量最高达到 37.74 μg/mL;向米曲霉发酵液添加甘氨酸和腺嘌呤,不能有效提升虫草素的含量.[结论]成功在米曲霉异源表达合成虫草素.