目的:基于 Toll 样受体(Toll-like receptor,TLR)/髓系分化初级反应蛋白质 88(myeloid differentiation primary response pro-tein 88,MyD88)信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)的作用机制.方法:将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,每组8只.模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组大鼠以高尿酸造模法结合尿酸盐注射法在右侧踝关节进行AGA造模,空白组以生理盐水灌胃,并在右侧踝关节注射生理盐水.AGA造模结束后,观察大鼠右侧踝关节,评估炎症指数,并计算踝关节肿胀指数.AGA造模结束后24 h,中药低、中、高剂量组大鼠均以四妙散加土茯苓方药液灌胃(生药用量分别为5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1),秋水仙碱组以秋水仙碱混悬液灌胃,空白组和模型组大鼠均以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃7 d.药物干预结束后24 h,腹主动脉取血,测定血清尿素氮和肌酐含量;取右侧踝关节滑膜组织,以实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TLR/MyD88信号通路相关基因TLR2、TLR4、MyD88、核因子κB抑制剂激酶 α(nuclear factor-κB inhibitor kinase-α,IKK-α)、核因子 κB 抑制剂 α(nuclear factor-κB inhibitor-α,IκB-α)mRNA 表达水平,以蛋白质印迹技术检测IKK-α、IκB-α蛋白表达水平,采用免疫组化技术观察TLR2、TLR4蛋白表达情况及巨噬细胞聚集情况.结果:①模型验证结果.除空白组外,其余5组大鼠右侧踝关节注射尿酸盐混悬液后均逐渐发生肿胀,24 h后炎症指数均达到2级以上.造模后4 h、8 h、12 h、24 h,模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组的踝关节肿胀指数均高于空白组(造模后 4 h:P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.004,P=0.031;造模后 8 h:P=0.001,P=0.000,P=0.002,P=0.007,P=0.002;造模后 12 h:P=0.000,P=0.000,P=0.004,P=0.010,P=0.006;造模后 24 h:P=0.004,P=0.000,P=0.003,P=0.001,P=0.006).②血清尿素氮和肌酐含量检测结果.6组大鼠血清尿素氮、肌酐含量总体比较,组间差异均无统计学意义.③踝关节滑膜组织中TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA水平检测结果.6组大鼠踝关节滑膜组织中MyD88 mRNA水平比较,差异无统计学意义.模型组的TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.020).秋水仙碱组和中药中剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平均低于模型组(TLR2:P=0.000,P=0.005;TLR4:P=0.018,P=0.000;IKK-α:P=0.003,P=0.004;IKB-α:P=0.008,P=0.010);中药低剂 量组的 TLR2、IKB-α mRNA 水平均低于模型组(P=0.000,P=0.020),2组TLR4、IKK-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.564,P=0.884);中药高剂量组的TLR4 mRNA水平低于模型组(P=0.024),2组TLR2、IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.349,P=0.320,P=0.579).中药低、中剂量组与秋水仙碱组的TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA水平比较,组间差异均无统计学意义(TLR2:P=0.836,P=0.056;TLR4:P=0.669,P=0.069;IKK-α:P=0.387,P=0.989;IKB-α:P=0.721,P=0.518);中药高剂量组的 TLR2、TLR4 mRNA水平均高于秋水仙碱组(P=0.000,P=0.002),2组IKK-α、IKB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.313,P=0.136).中药低、高剂量组的 TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA 水平均高于中药中剂量组(TLR2:P=0.000,P=0.047;TLR4:P=0.000,P=0.001;IKK-α:P=0.006,P=0.042;IKB-α:P=0.021,P=0.037);中药低剂量组的 TLR2、TLR4 mRNA 水平均低于中药高剂量组(P=0.001,P=0.006),2组IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.394,P=0.068).④踝关节滑膜组织中IKK-α、JKB-α蛋白水平检测结果.模型组大鼠踝关节滑膜组织中IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);秋水仙碱组IKK-α、IKB-α蛋白水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000);秋水仙碱组IKK-α蛋白水平高于中药低剂量组(P=0.000),2组IκB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.050);秋水仙碱组IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.000;IκB-α:P=0.000,P=0.000);中药低剂量组IKK-α、IKB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.005;IKB-α:P=0.000,P=0.006);中药中剂量组IKK-α蛋白水平低于中药高剂量组(P=0.005),2组IKB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.108).⑤踝关节滑膜组织中巨噬细胞聚集情况观察结果.与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中巨噬细胞均明显聚集,其中模型组巨噬细胞数量最多;4个药物干预组巨噬细胞数量均较模型组减少,其中中药中剂量组和秋水碱组巨噬细胞数量减少更明显.⑥踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白表达情况观察结果.与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白均明显表达,其中模型组表达最明显;4个药物干预组TLR2、TLR4蛋白表达水平均较模型组降低,其中中药中剂量组和秋水仙碱组降低更明显.结论:四妙汤加土茯苓方治疗AGA的机制可能与其减少巨噬细胞聚集,下调TLR/MyD88信号通路相关基因表达,减少炎症因子释放有关,其中中剂量作用效果最佳,作用效果与秋水仙碱相当.

选取健康纯种新西兰大白兔28只，以抽签法随机抽出7只为对照组，其余21只建立VX2肝癌模型并进行经导管肝动脉栓塞化疗术（TACE）。于TACE术前1d和术后1、5、10 d分别经耳缘静脉取外周血后测量血清谷丙转氨酶（ALT）、二胺氧化酶（DAO），D-乳酸（D-LA），Toll样受体4 (TLR4）和血清脂多糖（LPS），采用单因素方差分析比较手术前后差异，并以Pearson相关性分析评价ALT、DAO与LPS两两间相关性。结果显示与对照组比较，VX2肝癌模型兔血清ALT、DAO、D-LA、LPS、TLR4均增高，差异有统计学意义（ P<0.05），且术后1 d高于术前，术后5 d和术后10 d降低，DAO、D-LA、LPS、TLR4术后10 d均低于术前（ P<0.05）。ALT与DAO、DAO与LPS、ALT与LPS均呈正相关， r分别为0.43、0.83、0.64（ P<0.05）。本研究结果表明VX2肝癌模型兔在行TACE治疗后，随着肿瘤的控制和肝肠循环的改善，能提高肠道屏障功能，降低血LPS含量，下调TLR4，协同影响肿瘤疗效。

目的:应用网络药理学分析方法，从整体水平观察牛黄－靶点－角膜炎的复杂网络关系，探讨牛黄治疗角膜炎的分子作用机制。方法:首先通过DisGeNET在线数据库收集角膜炎相关的基因，构建角膜炎相关蛋白质的互作网络，然后经中药系统药理学分析(TCMSP)平台、中国科学院化学数据库查询，结合文献报道，收集牛黄中分离鉴定的组成成分，导出各成分SMILES结构式信息，利用在线软件SwissTargetPrediction预测作用靶点，进而构建牛黄活性成分－预测靶点网络图，最后将角膜炎相关蛋白质的互作网络与牛黄活性成分－预测靶点网络进行合并，得到牛黄活性成分－潜在靶点网络，系统分析牛黄治疗角膜炎的潜在作用靶点及其在信号通路中的作用，构建成分－靶点－通路网络图，分析牛黄治疗角膜炎的作用机制。结果:共搜索到39个已分离鉴定的牛黄组成成分，角膜炎相关靶点65个，牛黄治疗角膜炎的潜在靶点28个；28个潜在靶点中包含7个直接作用靶点，即肿瘤坏死因子、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、Toll样受体9、C-X-C基序趋化因子配体8、白细胞介素(IL)6、丝裂原活化蛋白激酶8和神经营养受体酪氨酸激酶1。28个潜在靶点可被注释入12项生物过程、18项细胞组分、13个分子功能，经京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析，共纳入10条KEGG信号通路，主要涉及人巨细胞病毒感染、阿米巴病、抗叶酸耐受性、PI3K-Akt信号通路、类风湿性关节炎、凋亡、细胞因子－细胞因子受体相互作用、疟疾、非酒精性脂肪肝、IL-17信号通路。结论:牛黄可能通过抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节和炎症调控等作用发挥对角膜炎的辅助治疗作用。

目的:探讨Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)基因多态性与福建籍非人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)相关隐球菌性脑膜炎易感性的关联。方法:纳入2016年10月至2019年4月在上海市复旦大学附属华山医院和福建省福州市联勤保障部队第九〇〇医院仓山院区住院治疗的101例福建籍非HIV相关隐球菌性脑膜炎患者为病例组，270名福建籍门诊健康体格检查者为健康对照组。提取患者基因组DNA，采用多重SNaPshot单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)分型技术，对既往文献报道的与疾病相关但未得到充分验证的8个TLR SNP位点进行基因分型。分别比较病例组和健康对照组、无易感因素患者组和健康对照组TLR基因多态性的分布差异。统计学分析采用 χ2检验或Fisher确切概率法。 结果:除TLR1 rs5743563外，TLR1 rs5743604、TLR2 rs3804099、TLR4 rs1927907、TLR6 rs3796508、TLR6 rs5743794、TLR9 rs164637、TLR9 rs352140 7个TLR SNP检测位点的等位基因频率分布均符合哈迪-温伯格平衡。病例组与健康对照组比较发现，TLR2 rs3804099位点的T/T基因型[52.5%(53/101)比40.4%(109/270)，比值比(odds ratio, OR)＝1.63, χ2＝4.378， P＝0.036]和TLR6 rs5743794位点的G/G基因型[44.6%(45/101)比32.2%(87/270)， OR＝1.69, χ2＝4.877， P＝0.027]为隐球菌性脑膜炎的风险基因型；而TLR6 rs3796508的G/G基因型[83.2%(84/101)比92.6%(250/270)， OR＝0.40, χ2＝7.271， P＝0.007]和TLR9 rs164637的C/C基因型[96.0%(97/101)比100.0%(270/270)，Fisher确切概率法， P＝0.005]为隐球菌性脑膜炎的保护性因素。101例患者中有70例无易感因素。无易感因素患者组与健康对照组比较发现，TLR6 rs5743794位点的G/G基因型[52.9%(37/70)比32.2%(87/270)， OR＝2.36, χ2＝10.216， P＝0.001]为隐球菌性脑膜炎的风险基因型，TLR6 rs3796508的G/G基因型[81.4%(57/70)比92.6%(250/270)， OR＝0.35, χ2＝7.906， P＝0.005]和TLR9 rs164637的C/C基因型[97.1%(68/70)比100.0%(270/270)，Fisher确切概率法， P＝0.042]为隐球菌性脑膜炎的保护性因素。 结论:TLR基因多态性与福建籍非HIV相关隐球菌性脑膜炎的易感性密切关联，提示TLR在隐球菌性脑膜炎的发病过程中可能起到重要作用。

目的:探讨Toll样受体(TLR)7、TLR9及髓样分化因子88(MyD88)在白癜风患者皮损及健康对照皮肤的表达差异及其意义。方法:2016年6月至2018年6月，收集广州市皮肤病防治所白癜风患者24例，男12例，女12例，年龄5～65(28.75 ± 13.12)岁，病程14 d至20年。用免疫组织化学方法分别检测24例白癜风患者皮损、20例健康对照皮肤中TLR7、TLR9及MyD88表达。结果:白癜风患者皮损中TLR7、MyD88表达水平高于健康对照组，与健康对照组相比，差异有统计学意义( P<0.05)。TLR9表达高于健康对照组，但与健康对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:TLR7、TLR9及MyD88在白癜风患者皮损表达均上调，提示白癜风的发生可能与TLR7、TLR9异常表达有关。

目的:探究外周血可溶性糖基化终末产物受体（sRAGE）、内毒素、Toll样受体（TLR）在重症急性胰腺炎（SAP）合并腹腔感染患者中的变化，并明确其与病情的关系。方法:回顾性分析上海市浦东新区人民医院2017年1月至2020年12月105例SAP患者的临床资料。其中，合并腹腔感染28例（感染组），有类似腹腔感染症状但未确诊腹腔感染77例（未感染组）。记录入院时急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHE Ⅱ）。患者出现疑似腹腔感染症状和体征时，采用酶联免疫吸附法检测血清sRAGE、内毒素、TLR4、TLR9水平。血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9水平与APACHE Ⅱ相关性采用Pearson分析；影响SAP患者发生腹腔感染的危险因素采用多因素Logistic回归分析；绘制受试者工作特征（ROC）曲线，评估血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9对SAP患者发生腹腔感染的诊断效能；绘制Kaplan-Meier生存曲线，比较采用log-rank检验。结果:感染组血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9明显高于未感染组[（822.16 ± 104.51）ng/L比（728.09 ± 96.47） ng/L、（62.59 ± 20.11） ng/L比（41.62 ± 13.64） ng/L、（45.17 ± 8.54） μg/L比（37.34 ± 6.22） μg/L、（26.35 ± 6.73） μg/L比（20.02 ± 5.49） μg/L]，差异有统计学意义（ P<0.01）。Pearson相关性分析结果显示，SAP患者血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9与APACHE Ⅱ呈正相关（ r = 0.632、0.556、0.521、0.631， P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，合并脏器功能损伤、休克、低氧血症及血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9是SAP患者发生腹腔感染的独立危险因素（ P<0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9联合诊断SAP患者发生腹腔感染的曲线下面积最大，为0.910（95% CI 0.838~0.957， P<0.01），灵敏度为82.14%，特异度为87.01%。以ROC曲线分析的血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9截断值（分别为764.58 ng/L、58.01 ng/L、40.24 μg/L和22.61 μg/L）为界将28例SAP合并腹腔感染患者分为高水平患者（分别为21、14、23和22例）和低水平患者（分别为7、14、5和6例）；Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9高水平患者28 d生存率明显低于低水平患者（61.90%比71.43%、50.00%比78.57%、60.87%比80.00%和59.09%比83.33%），差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:血清sRAGE、内毒素、TLR-4和TLR-9在SAP合并腹腔感染中联合诊断价值较高，且均与病情程度相关，对生存状况有明显影响。

X染色体失活（XCI）是雌性哺乳动物胚胎发育过程中的自然现象，然而约30%的X连锁基因可以逃避XCI，这种现象可能是导致SLE患病性别差异的原因之一。近年来学者利用前沿的单细胞测序技术、CRISPR-Cas技术等对人类XCI及其免疫特征与SLE疾病表型及其性别差异的内在联系予以研究，不断取得了新突破。Toll样受体（TLR）是一种模式识别受体，可以识别病原体相关分子模式（PAMPs）。已证实TLR可以通过激活多种免疫细胞从而在SLE的发病过程中起到重要作用，最新研究表明，部分种类的TLR如TLR7等可以通过逃避X染色体的随机失活增加X染色体中具有致病效应的基因剂量，继而增加女性对于SLE的易感性。本文就SLE中X染色体失活与TLR相关性研究最新进展予以综述。

目的:探讨Tyrobp基因参与抽动障碍模型小鼠神经炎性反应及相关作用机制。方法:6周龄C57BL/6J和Tyrobp -/-雄性小鼠各20只，按照随机数字表法分为4组：野生型对照组(WT+NS组)、Tyrobp基因敲除对照组(Tyrobp -/-+NS组)、野生型模型组(WT+IDPN组)和Tyrobp基因敲除模型组(Tyrobp -/-+IDPN组)。WT+IDPN组和Tyrobp -/-+IDPN组小鼠连续7 d按150 mg/(kg·d)的剂量腹腔注射亚氨基二丙腈(3，3-iminodipropionitrile，IDPN)以建立抽动障碍小鼠模型，WT+NS组和Tyrobp -/-+NS组小鼠腹腔注射等量生理盐水。造模结束后，对小鼠的刻板行为进行评估。采用Western blot检测大脑纹状体组织的酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein，Tyrobp)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、Toll样受体4 (Toll-like receptor，TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88，MyD88)、磷酸化的核转录因子-κB (phospho-nuclear factor kappa B，p-NF-κB) p65、磷酸化的核因子-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB alpha，p-IκBα)的蛋白表达情况。采用免疫荧光染色观察脑组织小胶质细胞激活情况。采用GraphPad Prism 8.0软件对所得数据进行统计分析，两组数据比较采用 t检验；多个样本均数比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。 结果:刻板行为评估显示，四组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均差异有统计学意义( F＝270.9，379.7，均 P<0.01)。WT+IDPN组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均高于Tyrobp -/-+IDPN组[运动刻板行为：(3.23±0.26)分，(2.13±0.21)分， t＝9.02， P<0.05；分类刻板行为：(45.80±4.29)分，(26.60±3.48)分， t＝12.00， P<0.05]。Western blot结果显示，各组小鼠纹状体TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、Myd88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达水平差异有统计学意义( F＝29.07，23.09，39.36，57.6，52.55，15.50，40.48，均 P<0.05)。WT+IDPN组蛋白水平高于WT+NS组( t＝8.31，7.37，8.13，11.43，10.47，6.05，9.96，均 P<0.05)，Tyrobp -/-+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp -/-+NS组( t＝3.60，3.00，5.84，4.81，3.59，2.26，4.68，均 P<0.05)，WT+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp -/-+IDPN组( t＝3.97，3.93，4.14，6.40，7.63，3.45，3.03，均 P<0.05)。免疫荧光显示，WT+IDPN组和Tyrobp -/-+IDPN组小鼠纹状体区小胶质细胞胞体增大，小胶质细胞呈激活状态，WT+IDPN组较Tyrobp -/-+IDPN组小鼠小胶质细胞激活形态更明显。 结论:Tyrobp可能通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路参与神经炎性反应介导的抽动秽语综合征的发病机制。

目的:探讨脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）预适应对脑缺血再灌注大鼠的保护作用。方法:120只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、LPS小剂量组（0.05 mg/kg）、LPS中等剂量组（0.15 mg/kg）和LPS大剂量组（0.45 mg/kg）。通过腹腔注射LPS进行预适应，1次/d，连续7 d，最后一次注射后24 h采用线栓法构建左侧大脑中动脉闭塞模型，缺血1.5 h后再灌注。在再灌注后24 h时，通过神经行为学评价神经功能缺损，通过三苯基氯化四氮唑染色测定脑梗死体积，通过酶联免疫吸附法检测血清促炎性细胞因子白细胞介素（interleukin, IL）-1、IL-6以及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α水平，通过蛋白质印迹分析检测缺血脑组织Toll样受体4（Toll-like receptor 4, TLR4）以及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）-2和MMP-9表达。结果:与假手术组比较，模型组血脑屏障通透性增加，血清IL-1β、IL-6和TNF-α上调，缺血脑组织TLR4、MMP-2和MMP-9蛋白表达上调。与模型组比较，各LPS干预组神经功能损伤显著减轻，脑梗死体积显著缩小，血脑屏障通透性显著下降，血清IL-1β、IL-6和TNF-α下调，缺血脑组织TLR4、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调，以中等剂量组和大剂量组更为明显。结论:LPS预适应能够诱导机体形成缺血耐受，抑制TLR4-MMP-2/MMP-9信号通路激活，减轻血脑屏障结构破坏和炎症，从而对脑缺血再灌注大鼠发挥神经保护作用。

目的 通过生物信息学方法建立基于双硫死亡相关基因表达量预测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)预后和药物敏感性的评分模型,并结合CRC患者来源类器官(CRC patient-derived organoids,CRC-PDOs)验证.方法 利用NMF(non-negative Matrix Factorization)算法、Cox和LASSO回归分析明确对CRC预后有预测价值的双硫死亡相关基因,构建双硫死亡相关风险评分公式,结合GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析不同集群之间的差异基因及富集通路.通过GDSC数据库预测不同分组CRC患者对化疗药物的敏感性,并利用CRC-PDOs进行验证.结果 NMF算法结果显示基于双硫死亡相关基因可建立CRC患者分群,COX回归分析显示LRPPRC和SLC7A11是能够预测CRC患者预后的潜在基因(P=0.047、0.033),CRC患者肿瘤中的SLC7A11低表达或LRPPRC高表达与总生存率(overall survival,OS)显著相关(P=0.004、0.003).基于LASSO回归分析,双硫死亡风险评分公式为:Risk score=LRPPRC×(-0.670 5)+SLC7A11×0.311 2,且能将GSE161158 数据集分群为高风险和低风险组.双硫死亡高低危群集间有 125 个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),结合GO和KEGG结果,高危群集患者的上调基因主要富集于免疫调节,如白细胞趋化性、粒细胞迁移和Toll样受体结合.低风险集群的特征是与硫化物代谢和运输相关的途径,如硫化物跨膜转运蛋白活性.基于GDSC数据库,双硫死亡相关的双基因表达水平可预测化疗药物敏感性,化疗药物(伊立替康)对于CRC-PDOs的生长抑制结果提示患者的结直肠癌组织中SLC7A11和LRPPRC的相对表达量与其类器官映射疗效呈线性相关(P=0.007、0.040).结论 根据生物信息学分析和CRC-PDOs实验结果,双硫死亡相关评分能够预测结直肠癌患者预后和药物敏感性,具有潜在的临床应用前景.