目的:观察荷载精子相关抗原9(SPAG9)基因短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9联合放疗对前列腺癌LNCaP细胞的治疗作用并初步探讨其机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为4组，分别为磷酸盐对照组(PBS组)、放疗组(10 GY)、病毒组[ZD55-SPAG9，10感染复数(MOI)]、联合组(ZD55-SPAG9＋放疗，5 MOI＋5 GY)；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组LNCaP细胞增殖能力的变化；Hoechst-33258染色法检测各组细胞的凋亡；Transwell迁移及侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞SPAG9蛋白、凋亡相关蛋白及侵袭相关蛋白的表达。两组间差异的比较采用独立样本 t检验，多组间差异比较采用One-way ANOVA分析。 结果:CCK-8结果显示，联合组LNCaP细胞的存活率为(46.02±2.20)%、病毒组为(56.83±2.40)%( t＝12.855， P<0.01)、放疗组为(64.12±2.23)%( t＝22.389， P<0.01)、PBS组为(99.63±2.72)%( t＝59.407， P<0.01)，各治疗组的细胞存活率均低于PBS组，差异有统计学意义( F＝1407.384， P<0.01)，联合组与单一治疗组比较，LNCaP细胞的存活率更低。Hoechst-33258染色实验结果显示，联合组LNCaP细胞的凋亡率为(55.80±1.49)%、病毒组为(36.42±1.78)%( t＝－32.295， P<0.01)、放疗组为(30.01±1.80)%( t＝－42.814， P<0.01)、PBS组为(9.30±1.53)%( t＝－84.343， P<0.01)，各治疗组的细胞凋亡率均高于PBS组，差异有统计学意义( F＝2 010.396， P<0.01)，联合组与单一治疗组比较，LNCaP细胞的凋亡更加明显。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，(1)迁移实验：联合组迁移细胞数为(102.60±16.03)个、病毒组为(163.67±11.00)个( t＝12.166， P<0.01)、放疗组为(206.47±17.05)个( t＝17.192， P<0.01)、PBS组为(304.73±17.16)个( t＝33.345， P<0.01)，各治疗组迁移细胞数均少于PBS组，差异有统计学意义( F＝450.498， P<0.01)，联合组迁移细胞数明显少于单一治疗组；(2)侵袭实验：联合组侵袭细胞数为(90.93±13.91)个、病毒组为(145.33±15.31)个( t＝10.184， P<0.01)、放疗组为(191.33±13.32)个( t＝20.187， P<0.01)、PBS组为(295.47±19.00)个( t＝33.645， P<0.01)，各治疗组侵袭细胞数均少于PBS组，差异有统计学意义( F＝467.586， P<0.01)，联合组侵袭细胞数明显少于单一治疗组。Western blot实验结果显示，联合组、病毒组、放疗组、PBS组内，SPAG9蛋白相对表达量分别为0.41±0.07、0.81±0.13、1.41±0.17、1.98±0.10，各治疗组SPAG9的相对表达量均低于PBS组，差异有统计学意义( F＝98.785， P<0.01)，联合组内SPAG9表达明显低于单一治疗组，差异有统计学意义( t＝4.868、9.603， P<0.01)；凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8在联合组、病毒组、放疗组、PBS组内相对表达量分别为1.51±0.11、1.26±0.05、1.11±0.07、0.64±0.10，各治疗组内Caspase-8的表达高于PBS组，差异有统计学意义( F＝56.728， P<0.01)，与单一治疗组比较，联合组内Caspase-8的上调更加显著，差异有统计学意义( t＝－3.713、－5.499， P<0.05)；侵袭相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在联合组、病毒组、放疗组、PBS组内相对表达量分别为(1.44±0.05、0.26±0.06)、(1.23±0.05、0.56±0.01)、(0.91±0.06、0.79±0.07)、(0.25±0.04、1.21±0.07)，各治疗组内E-cadherin表达高于PBS组，Vimentin表达低于PBS组，差异有统计学意义( F＝287.276、138.020， P<0.01)，与单一治疗组比较，联合组内E-cadherin的上调和Vimentin的下调更加显著，差异有统计学意义( t＝－5.017、8.386， P<0.01； t＝－10.982、10.034， P<0.01)。 结论:ZD55-SPAG9联合放疗可以显著抑制LNCaP细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并促进其凋亡，效果优于单一治疗；机制可能是上调Caspase-8诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化进程有关。

目的:观察小干扰RNA(siRNA)沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:体外培养人肾癌细胞786-O和OS-RC-2(购自中国科学院上海细胞库)；应用siRNA转染下调SPAG9在786-O和OS-RC-2的表达；分组采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分析转染后SPAG9在786-O和OS-RC-2中mRNA及蛋白的表达水平；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染24、48、72、96 h后786-O及OS-RC-2的增殖活性；Transwell法检测转染后786-O、OS-RC-2的迁移与侵袭能力；Western blot分析转染后786-O、OS-RC-2中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的蛋白表达量；利用小管形成实验观察SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力的变化。采用 t检验。 结果:(1)RT-PCR及Western蛋白印迹结果提示siRNA能够有效沉默786-O及OS-RC-2中SPAG9 mRNA和蛋白的表达。si-Ctrl组表达量为参照和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组mRNA及蛋白的表达量为(0.41±0.02、0.12±0.03， t＝14.420， P<0.01)、(0.64±0.02、0.13±0.01， t＝36.690， P<0.01)；(1.36±0.13、0.83±0.04， t＝6.816， P<0.05)、(0.93±0.01、0.63±0.04， t＝12.410， P<0.05)。(2)SPAG9基因沉默后对786-O以及OS-RC-2增殖能力无明显影响，差异无统计学意义( t＝3.182、6.674， P>0.05)。(3)SPAG9敲低后的786-O以及OS-RC-2迁移、侵袭能力显著降低，si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组迁移细胞数目为(105.32±10.13)、(53.34±5.17)个( t＝9.232， P<0.05)、(132.00±11.23)、(65.45±7.23)个( t＝11.161， P<0.05)；侵袭细胞数目为(88.33±16.56)、(32.08±6.79)个( t＝6.093， P<0.05)、(90.67±13.01)、(28.67±4.02)个( t＝5.924， P<0.05)。(4)SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力明显降低。si-Ctrl组、786-Osi-SPAG9组中平均管样结构数为12.56±2.40、3.05±0.86( t＝2.254， P<0.05)。(5)Western blot显示转染后的786-O和OS-RC-2细胞中，MMP-2的蛋白表达量显著降低。si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组中MMP-2的相对表达量为0.37±0.02、0.24±0.01( t＝8.712， P<0.001)、0.26±0.01、0.21±0.02( t＝4.558， P<0.05)；而TIMP-2的表达量显著升高，其相对表达量为0.52±0.03、0.59±0.03( t＝2.720， P>0.05)、0.52±0.01、0.54±0.01( t＝2.102， P>0.05)。 结论:SPAG9基因具有促进肾癌细胞迁移、侵袭及血管形成的能力，其机制可能与MMP-2的激活有关。

目的:检测精子相关抗原5（sperm-associated antigen 5，SPAG5）在胰腺癌组织中的表达情况，初步探究SPAG5与胰腺癌的临床预后关系。探讨SPAG5作为胰腺癌潜在生物标志物的可能性。方法:用生物信息学的方法分析SPAG5在胰腺癌组织及癌旁正常组织中的mRNA水平，并分析其表达与胰腺癌患者的生存率间的关系。回顾性分析94例接受手术治疗的胰腺癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测胰腺癌组织和癌旁正常组织中的SPAG5蛋白表达水平，分析其与胰腺癌患者临床病理特征的关系。结果:生物信息学分析结果显示，SPAG5的mRNA在胰腺癌组织中显著高表达，并与患者总生存率和无病生存率显著相关。免疫组化结果表明，SPAG5在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。SPAG5在胰腺癌组织中的高表达与肿瘤分期、肿瘤尺寸及淋巴结的转移情况相关（均 P<0.05），而与年龄、性别、肿瘤分级无关（均 P>0.05）。 结论:SPAG5的表达量与胰腺癌的进展显著相关，标靶SPAG5或可成为胰腺癌的一个新的治疗方法。SPAG5可能作为胰腺癌的一个新的潜在生物标志物。

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1 和SIRT1 在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义.方法:留取2022 年6 月至2023 年7 月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1 蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测 YBX1 及 SIRT1 mRNA 表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2 相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1 与SIRT1的相互作用.结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1 蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P＜0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r＜0,P＜0.05),与E2、AMH、AFC正相关(r＞0,P＜0.05);在颗粒细胞中上调YBX1 后SIRT1 蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P＜0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P＜0.05).结论:YBX1 和SIRT1 在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1 结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1 和SIRT1 有望成为POI诊疗的新靶点.

目的 观察绒促性素穴位注射对男性迟发性性腺功能减退症的影响及安全性.方法 采用随机对照的研究方法,将 40 例男性迟发性性腺功能减退症患者随机分为试验组和对照组,每组 20 例.试验组采用绒促性素穴位注射治疗,对照组采用绒促性素肌肉注射治疗.比较两组治疗前后老年男性症状(aging male symptoms,AMS)评分、国际勃起功能指数问卷表-5(International index of erectile function-5,IIEF-5)评分和国际前列腺症状评分(international prostate symptom score,IPSS).观察两组治疗前后血清睾酮(testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)、前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)及精液参数(精液体积、精子浓度、精子总数、精子总活力、前向运动精子和精子正常形态率)的变化.观察两组不良反应发生情况.结果 治疗后,两组AMS和IIEF-5评分以及TT和FT水平均较治疗前改善(P＜0.05),试验组AMS和IIEF-5评分均优于对照组(P＜0.05).两组均未出现明显不良反应.结论 绒促性素穴位注射在改善男性迟发性性腺功能减退症患者AMS和IIEF-5评分方面优于绒促性素肌肉注射,可提高血清睾酮和游离睾酮的水平,不影响前列腺特异性抗原及精液相关参数,且未发生不良反应.

目的 观察精子相关抗原5(SPAG5)在乳腺癌组织中的表达,探讨其表达情况与临床病理因素及TEC方案(T:多西他赛,E:表柔比星,C:环磷酰胺)新辅助化疗疗效之间的关系.方法 收集107例接受TEC方案新辅助化疗的乳腺癌患者化疗前的组织标本,通过免疫组织化学法检测各标本中SPAG5蛋白的表达,结合临床病理因素及新辅助化疗疗效进行分析.结果 107例原发性乳腺癌组织中SPAG5蛋白高表达率48.6％ (52/107),与人类表皮生长因子受体2过表达呈正相关性(P=0.000),与细胞增殖核抗原过表达呈正相关性(P =0.019).SPAG5的表达在患者年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、组织学分级、淋巴结状况、雌激素受体及孕激素受体的表达情况中均差异无统计学意义.化疗总体客观缓解(OR)率为70.1％(75/107),其中病理完全缓解(pCR)率9.3％(10/107),SPAG5高表达组OR率为82.7％(43/52),低表达组56.1％(32/57),差异有统计学意义(P=0.006).SPAG5高表达组pCR率为15.4％ (8/44),SPAG5低表达组pCR率为3.6％(2/53),差异有统计学意义(P=0.048).结论 SPAG5作为肿瘤增殖指标,其表达状态对于乳腺癌患者TEC方案新辅助化疗的疗效具有预测作用.

患者男,37岁,间断肉眼血尿5个月,加重伴尿频、尿痛1个月入院.患者自诉备育1年,其妻子曾以"不孕"就诊于我院妇科门诊,后经输卵管造影及其他检查均显示正常,因此排除了女方不孕症的可能.患者近1个月出现无痛性肉眼血尿加重,射精时出现腹股沟区疼痛.肛门指诊:前列腺Ⅱ度增大,中央沟消失,左侧叶未触及结节,右侧叶质地偏硬,表面不光滑,可触及结节,有压痛,边界触及不清.总前列腺特异抗原(TPSA ) 45 μg／L,游离前列腺特异抗原(FPSA) 6.3 μg／L .精液检查:精液量3.8 ml,pH 7.40,精子总活力12.01%,前向运动力11.69%,精子浓度70.84× 106／ml,精子总数280.60 × 106.尿常规检查:红细胞25 792.6／μl,白细胞5 992.6／μl .经腹泌尿系超声检查:前列腺大小51 mm×40 mm×39 mm,内回声不均,内部血流信号丰富,与膀胱后壁分界不清,右侧输尿管全程扩张,右侧输尿管膀胱壁内段处周围膀胱壁明显增厚,与增大的前列腺无明显分界,增厚膀胱壁内部血流信号丰富(图1),右肾重度积水,双侧精囊腺体积增大,回声不均,精囊内可见10 mm×5 mm弧形强回声,后伴声影(图2).超声初步诊断:前列腺占位,右肾积水,右侧输尿管增宽,膀胱后壁增厚,精囊腺结石.入院后临床初步诊断:前列腺占位,精囊结石,右肾重度积水.完善相关检查后,在我院泌尿外科行手术治疗.术中剖开精囊腺发现结石1枚,大小约10 mm×5 mm,术后病理结果:前列腺腺癌,Gleason分级(2+4＝6) .免疫组化结果:CK-H (－), Ki67 (＜ 10% +), P5043 (部分+), PSA (+), CK-L (+) .最终诊断:前列腺腺癌、精囊腺结石.术后患者恢复良好,2周后出院.

目的 利用梗阻性无精子症(OA)和非梗阻性无精子症(NOA)患者的睾丸组织建立诱导性多能干细胞(iPSCs)系,比较两者建系过程有无差别.方法 分别取3例OA患者和特发性NOA患者5～6 mm3的睾丸组织,组织块培养方法进行原代培养,传至3～4代转染仙台病毒,待细胞增殖满后转移至饲养层细胞上继续培养,第21～22天挑取克隆,建立iPSCs系并进行多能性和分化能力的鉴定.结果 两株iPSCs系均成功建立,建系过程无明显差异,碱性磷酸酶(AP)染色均为阳性;八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定基因相关蛋白2(SOX2)、阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、肿瘤排斥抗原-1-60(TRA-1-60)的免疫荧光染色均为阳性;小鼠体内的畸胎瘤实验也表明获得的两株iPSCs系具有向3个胚层分化的潜能.结论 利用仙台病毒非基因整合方法,OA患者和特发性NOA患者的睾丸组织均能建立iPSCs系.

目的:为研究支架蛋白JLP在肾脏中的生理功能,建立小鼠精子相关抗原(mSpag9)肾脏特异性基因敲除小鼠模型,为研究该基因所发挥的重要生理功能提供材料和思路.方法:构建mSpag9基因重组载体,通过电转打靶转染胚胎干细胞(ES细胞),将筛选出的阳性ES细胞克隆,经显微注射至超排小鼠的囊胚腔后移植于受体小鼠,从子代筛选嵌合体小鼠,与携带flp位点C57/BL6N小鼠杂交后得到mSpag9flox/+基因敲除小鼠,自交筛选出mSpag9flox/flox小鼠,再与KSP-CreERT2小鼠杂交得到mSpag9flox/flox-Cre肾脏特异性基因敲除小鼠并进行鉴定,待小鼠成长至5周,使用Tamoxifen(10 mg/mL葵花籽油溶解)腹腔注射(0.04 mg/g)诱导Cre重组酶特异性表达于肾小管上皮细胞.结果:经PCR扫描后得到10株阳性ES细胞克隆,其中6株使用Southern Blot鉴定;经显微注射后得到4只雄性、5只雌性嵌合体小鼠,与flp小鼠杂交后得到9只mSpag9flox/+基因敲除小鼠,将自交得到的mSpag9flox/flox小鼠与KSP-CreERT2小鼠交配筛选出mSpag9flox/+-Cre+3只小鼠,将其与mSpag9flox/flox小鼠回交得到基因型为mSpag9flox/flox-Cre+小鼠,即为mSpag9肾脏特异性基因敲除小鼠.结论:该模型利用Cre-Loxp系统实现基因mSpag9的基因打靶,Tamxifen诱导基因mSpag9实现该基因在肾小管上皮细胞上敲除,为进一步研究mSpag9基因及支架蛋白在肾脏生理病理进展中所发挥的作用提供工具.

不孕不育是指夫妻在婚后至少同居一年,有正常性生活,未采取任何避孕措施而不能生育的状态[1].世界卫生组织(WHO)的调查数据显示,全世界有 6000万 ～ 8000万夫妇处于不育不孕的状态,并且由于环境、激素和相关疾病等因素的影响,不孕不育夫妇的数量日益增多[2-3].据统计,在所有引起不孕不育的原因中,免疫学因素所致的不孕不育症占 10％ ～ 28％[4-5].免疫性不孕不育是指由于生殖系统抗原的自身免疫或同种免疫引起的不孕不育症.