目的:建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus, RCL) VSV-G qPCR检测方法，并进行方法学性能验证及初步应用。方法:以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列，建立荧光定量PCR检测方法，并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、准确度、线性范围、检测限、定量限及耐用性进行验证。利用所建立的方法进行CAR-T细胞、慢病毒载体生产终末细胞及慢病毒载体收获液样品的初步应用性研究。结果:建立的VSV-G荧光定量PCR法，专属性较好，对293T细胞、PBMC细胞及C8166细胞均无特异性扩增，线性范围为1×10 2拷贝/test～1×10 9拷贝/test， R2能够达到0.998以上，扩增效率在93%～98%之间，精密度RSD<12%，准确度回收率为85%～106%，最低检出限和最低定量限分别为5拷贝/test和40拷贝/test。另外，该方法的耐用性较好。各项验证结果均表明该方法能够满足检测的要求。利用该方法对54批样品(包括CAR-T细胞、慢病毒载体及载体生产终末细胞)进行RCL C8166细胞培养法的终点检测，结果显示54批样品均为阴性。 结论:成功建立了VSV-G实时荧光定量PCR法，各项验证参数均可满足检测要求，该方法的应用将进一步提高慢病毒载体相关产品的安全性。

目的:探讨基于随机森林模型分析内脏脂肪等级的相关指标。方法:本研究为横断面研究，选取2021年3—9月在黑龙江省医院健康管理中心进行体检的医院职工（包括在职职工和退休职工）共617例的各项实验室指标以及体成分分析各项指标，按照2∶1的比例将样本分为训练集（411例）和测试集（206例），模型共纳入预测变量110个，使用训练集数据进行随机森林模型构建，测试集数据进行模型验证，选择最优节点数和决策树数目，对构建模型的预测性能进行评价，同时选取重要性在前10位的相对重要因子进行下一步的研究。按内脏脂肪等级，对617名研究对象再次进行分组：内脏脂肪等级正常组和内脏脂肪等级偏高组，进一步分析前10位相对重要因子在组间的差异。结果:随机森林模型的最优节点数为39、决策树数目为300。模型在测试集上的准确率为83.3%、精确率为73.9%、灵敏度为89.4%、特异度为78.7%，其受试者工作特征曲线下面积为0.881（95% CI：0.832~0.931）。模型中前10位相对重要因子依次为：体重指数、性别、年龄、尿酸、红细胞计数、单核细胞计数、C肽、癌胚抗原、糖化血红蛋白、谷氨酰转肽酶。内脏脂肪等级偏高组的体重指数、年龄、尿酸、红细胞计数、单核细胞计数、C肽、癌胚抗原、糖化血红蛋白、谷氨酰转肽酶水平均高于内脏脂肪等级正常组（均 P<0.05）；内脏脂肪等级偏高的发生率男性大于女性（ P<0.05）。 结论:本研究构建的内脏脂肪等级的随机森林预测模型表现良好，内脏脂肪与机体肝功能、胰岛功能、免疫功能的改变均有关系。

目的:掌握克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）核蛋白（NP）和糖蛋白（GP）片段的精细抗原表位谱分布，明确优势抗原表位在克里米亚-刚果出血热（CCHF）实验室检测中的价值。方法:2014—2021年在新疆大学生命科学院实验室将CCHFV YL04057株采用改良生物肽合成方法分段表达出由8个氨基酸组成的最小合成短肽，以CCHFV多克隆抗体或单克隆抗体14B7（IgM）或CCHFV阳性羊血清为抗体，用免疫印迹方法鉴定出NP和GP片段上具有抗原活性的最小抗原表位（BCE），并采用邻接法将获得的具有序列多态性的BCE与不同地区的CCHFV进行空间聚类，确定BCE组合方式与地理区域分布的相关性，探讨其在建立血清学诊断中的应用价值。采用原核表达质粒（pET-32a、pGEX-KG）和带有不完整谷胱甘肽（GST188）标签的原核表达质粒（pXXGST-ST-1）构建和表达NP片段上6个不同肽段长度的优势抗原表位，建立间接酶联免疫吸附测定（ELISA）检测方法，以经免疫荧光法（IFA）鉴定的CCHF羊血清为对照，统计分析不同肽段长度的抗原表位重组蛋白与IFA检测结果的特异度、敏感度和总符合率。结果:CCHFV NP和GP片段共有30个具有抗原活性的BCE，其中NP片段抗原表位集中的核心中间片段NP 2（aa 170~305）有6个BCE，两端的NP 1（aa 1~200）和NP 3（aa 286~482）有9个BCE；GP片段的Gc（aa 1~558）和Gn（aa 533~708）片段有14个BCE和1个包含15个氨基酸的长抗原肽（AP），NP片段BCE氨基酸序列的同源性为97.1%，GP片段对应的同源性为89.1%。在GP片段9个具有序列多态性的BCE中，由GnEc1、GnE2、GnE4、GcE3、GcE6和GcAP-4（Ap）6个组合BCE可将15株来自全球不同地区的CCHFV聚类成亚洲Ⅰ、亚洲Ⅱ、非洲Ⅰ、非洲Ⅱ和欧洲 5个地理类群。构建表达的PET-32a-NP（全长）、PGEX-KG-NP 2（aa 170~305）、pGEX-KG-NP 2-1（aa 235~275）、PGEX-KG-NP 2-1-1（aa 237~256）、pXXGST-1-NP 2-1-2（aa 250~265）和PGEX-KG-NP 2-1-3（aa 260~276）6个重组蛋白CCHFV NP兔多克隆抗血清（pAb）免疫印迹反应阳性，以33份经IFA CCHF检测的羊血清为参照，以NP 2和NP 2-1 2个片段构建的重组蛋白为抗原建立的间接ELISA检测方法检测敏感度、特异度和总符合率最好，敏感度分别为73.4%（11/15）和66.7%（10/15），特异度分别为100%（18/18）和94.4%（17/18），总符合率分别为87.9%（29/33）和81.8%（27/33）。 结论:CCHFV NP和GP上分布着数量较多的具有抗原免疫活性的BCE，其中，优势抗原表位在CCHF实验室血清学诊断中具有较高的应用价值。

目的:观察荷载精子相关抗原9(SPAG9)基因短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9联合放疗对前列腺癌LNCaP细胞的治疗作用并初步探讨其机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为4组，分别为磷酸盐对照组(PBS组)、放疗组(10 GY)、病毒组[ZD55-SPAG9，10感染复数(MOI)]、联合组(ZD55-SPAG9＋放疗，5 MOI＋5 GY)；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组LNCaP细胞增殖能力的变化；Hoechst-33258染色法检测各组细胞的凋亡；Transwell迁移及侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞SPAG9蛋白、凋亡相关蛋白及侵袭相关蛋白的表达。两组间差异的比较采用独立样本 t检验，多组间差异比较采用One-way ANOVA分析。 结果:CCK-8结果显示，联合组LNCaP细胞的存活率为(46.02±2.20)%、病毒组为(56.83±2.40)%( t＝12.855， P<0.01)、放疗组为(64.12±2.23)%( t＝22.389， P<0.01)、PBS组为(99.63±2.72)%( t＝59.407， P<0.01)，各治疗组的细胞存活率均低于PBS组，差异有统计学意义( F＝1407.384， P<0.01)，联合组与单一治疗组比较，LNCaP细胞的存活率更低。Hoechst-33258染色实验结果显示，联合组LNCaP细胞的凋亡率为(55.80±1.49)%、病毒组为(36.42±1.78)%( t＝－32.295， P<0.01)、放疗组为(30.01±1.80)%( t＝－42.814， P<0.01)、PBS组为(9.30±1.53)%( t＝－84.343， P<0.01)，各治疗组的细胞凋亡率均高于PBS组，差异有统计学意义( F＝2 010.396， P<0.01)，联合组与单一治疗组比较，LNCaP细胞的凋亡更加明显。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，(1)迁移实验：联合组迁移细胞数为(102.60±16.03)个、病毒组为(163.67±11.00)个( t＝12.166， P<0.01)、放疗组为(206.47±17.05)个( t＝17.192， P<0.01)、PBS组为(304.73±17.16)个( t＝33.345， P<0.01)，各治疗组迁移细胞数均少于PBS组，差异有统计学意义( F＝450.498， P<0.01)，联合组迁移细胞数明显少于单一治疗组；(2)侵袭实验：联合组侵袭细胞数为(90.93±13.91)个、病毒组为(145.33±15.31)个( t＝10.184， P<0.01)、放疗组为(191.33±13.32)个( t＝20.187， P<0.01)、PBS组为(295.47±19.00)个( t＝33.645， P<0.01)，各治疗组侵袭细胞数均少于PBS组，差异有统计学意义( F＝467.586， P<0.01)，联合组侵袭细胞数明显少于单一治疗组。Western blot实验结果显示，联合组、病毒组、放疗组、PBS组内，SPAG9蛋白相对表达量分别为0.41±0.07、0.81±0.13、1.41±0.17、1.98±0.10，各治疗组SPAG9的相对表达量均低于PBS组，差异有统计学意义( F＝98.785， P<0.01)，联合组内SPAG9表达明显低于单一治疗组，差异有统计学意义( t＝4.868、9.603， P<0.01)；凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8在联合组、病毒组、放疗组、PBS组内相对表达量分别为1.51±0.11、1.26±0.05、1.11±0.07、0.64±0.10，各治疗组内Caspase-8的表达高于PBS组，差异有统计学意义( F＝56.728， P<0.01)，与单一治疗组比较，联合组内Caspase-8的上调更加显著，差异有统计学意义( t＝－3.713、－5.499， P<0.05)；侵袭相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在联合组、病毒组、放疗组、PBS组内相对表达量分别为(1.44±0.05、0.26±0.06)、(1.23±0.05、0.56±0.01)、(0.91±0.06、0.79±0.07)、(0.25±0.04、1.21±0.07)，各治疗组内E-cadherin表达高于PBS组，Vimentin表达低于PBS组，差异有统计学意义( F＝287.276、138.020， P<0.01)，与单一治疗组比较，联合组内E-cadherin的上调和Vimentin的下调更加显著，差异有统计学意义( t＝－5.017、8.386， P<0.01； t＝－10.982、10.034， P<0.01)。 结论:ZD55-SPAG9联合放疗可以显著抑制LNCaP细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并促进其凋亡，效果优于单一治疗；机制可能是上调Caspase-8诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化进程有关。

目的:分析未治疗的经性传播和注射吸毒感染HIV-1患者的病毒分离特征和独特重组型特征，为了解不同传播途径感染HIV-1的病毒生物学特性和精准防控提供依据。方法:根据不同的HIV-1传播风险，筛选北京、广西、四川3个省市新诊断未治疗的HIV-1患者，静脉采血检测病毒载量、CD4 + T细胞计数，以及分离外周血淋巴细胞进行病毒分离，从病毒培养上清中提取RNA扩增全长序列，对序列进行分析。 结果:65名HIV-1感染者中，经男男性行为、异性性行为和注射吸毒感染分别为32(49.2%)、20(30.8%)和13(20.0%)例；亚型主要包括：26例(40.0%)CRF07_BC、23例(35.4%)CRF01_AE、9例(13.8%)独特重组型。共分离到46株HIV-1临床毒株，HIV-1分离阳性率与CD4 +T细胞显著负相关( χ2＝4.22， P＝0.04)，而与病毒载量正相关( χ2＝22.4， P<0.001)；HIV-1的P24抗原含量多因素广义估计方程模型分析呈现类似结果。此外，广义估计方程模型显示P24抗原含量与培养时间正相关(52.14，95% CI: 9.42~94.87， P＝0.017)，病毒生长曲线分析显示，在培养后第14天，男男性行为感染者的病毒P24抗原水平显著高于异性性行为和注射吸毒感染者(调整后 P值分别为 P<0.01和 P<0.05)。9株独特重组型病毒均来自性传播感染者，男男性行为感染者中独特重组型的比例高于异性性行为感染者中的比例，且男男性行为感染者中的病毒基因重组断点多于异性性行为感染者。 结论:男男性行为感染者的血样对HIV-1病毒分离更敏感；性传播人群具有独特重组型多样性的特征，尤其是男男性行为感染者病毒基因重组更为明显。

目的:构建基于增强计算机断层扫描(CT)影像学特征的列线图模型，辅助医师鉴别胃神经鞘瘤与胃间质瘤。方法:回顾性收集2012年1月1日至2022年1月1日于浙江大学医学院附属第二医院和中国科学院大学宁波华美医院经手术病理证实的57例胃神经鞘瘤和275例胃间质瘤患者的相关资料，其中39例胃神经鞘瘤和201例胃间质瘤患者纳入训练集，余18例胃神经鞘瘤和74例胃间质瘤患者纳入验证集。收集增强CT影像学特征(肿瘤大小指数、增强扫描动脉期CT值、增强扫描静脉期CT值、有无坏死、有无钙化、黏膜面是否完整、是否均匀强化等)和临床资料[胃炎病史、糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原、单核细胞与淋巴细胞比值(MLR)等]。采用最小绝对收缩和选择算法(LASSO)回归分析筛选鉴别胃神经鞘瘤与胃间质瘤的影像学特征独立预测因子，基于增强CT影像学特征构建列线图模型。采用logistic回归分析筛选鉴别胃神经鞘瘤与胃间质瘤的临床指标独立预测因子，构建临床对照模型。绘制受试者操作特征曲线(ROC)分析列线图模型在训练集和验证集的曲线下面积(AUC)，并通过一致性指数(CI)、决策曲线分析(DCA)评估列线图模型的预测效能和临床应用价值。统计学方法采用DeLong检验。结果:LASSO回归分析显示，肿瘤大小指数、增强扫描动脉期CT值、增强扫描静脉期CT值、有无坏死、有无钙化、黏膜面是否完整、是否均匀强化是鉴别胃神经鞘瘤与胃间质瘤的影像学特征独立预测因子(均 P<0.05)。logistic回归分析显示，胃炎病史( OR＝0.280，95%置信区间0.138~0.566)、CA19-9( OR＝0.940，95%置信区间0.890~0.993)、癌胚抗原( OR＝0.794，95%置信区间0.661~0.952)、MLR( OR＝0.087，95%置信区间0.009~0.860)为鉴别胃间质瘤与胃神经鞘瘤的临床指标独立预测因子( P<0.001、＝0.028、0.013、0.037)。列线图模型在训练集、验证集的AUC为0.881、0.850，临床对照模型在训练集、验证集的AUC为0.814、0.772，差异均有统计学意义( Z＝2.57、1.96， P＝0.005、0.030)。列线图模型平均CI为0.885。DCA显示，列线图模型在区分胃神经鞘瘤与胃间质瘤方面比临床对照模型具有更高的总体净获益。 结论:基于增强CT影像学特征构建的列线图模型可有效区分胃神经鞘瘤与胃间质瘤，有助于医师做出精确的临床决策。

目的:探讨热平衡温度(TT)对小鼠单侧肾脏缺血再灌注后肾损伤的影响及其作用机制。方法:8~9周龄的C57/B6雄性小鼠，根据完全随机法分为常温假手术组(sham 22 ℃)，热平衡温度假手术组(sham 32 ℃)，常温单侧缺血再灌注组(UIR 22 ℃)，热平衡温度单侧缺血再灌注组(UIR 32 ℃)。UIR组取左肾肾蒂夹闭32 min，再灌注24 h后，分别置于22 ℃或32 ℃人工气候箱中，3周后处死小鼠，留取左肾组织进行组织学、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测。组间比较采用 t检验或方差分析。 结果:苏木精-伊红(HE)染色示，UIR 32 ℃较之UIR 22 ℃有更严重的肾小管损伤及肾小管、肾间质炎性细胞浸润；胶原纤维(Masson)染色示，UIR 32 ℃较之UIR 22 ℃纤维化更严重；RT-qPCR分析显示，UIR 32 ℃组白细胞介素-1β(IL-1β) (UIR 32 ℃ 36.020±10.750比UIR 22 ℃ 12.410±2.635， t＝3.399， P<0.05)，单核细胞趋化蛋白-1(MCP1) (UIR 32 ℃ 155.600±19.380比UIR 22 ℃ 80.020±10.800， t＝3.526， P<0.01)，胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ) (UIR 32 ℃ 87.480±11.520比UIR 22 ℃ 46.520±5.135， t＝3.399， P<0.01)以及转化生长因子β(TGF-β)表达均高于UIR 22 ℃组(UIR 32 ℃ 11.840±0.836比UIR 22 ℃ 8.167±0.767， t＝3.239， P<0.01)；免疫组织化学显示，UIR 32 ℃组巨噬细胞特异性表面抗原(F4/80)水平高于UIR 22 ℃组(UIR 32 ℃ 148 018.000±29 119.000比33 219.000±7 052.000， t＝3.832， P<0.01)；Western blot显示UIR 32 ℃组纤黏蛋白(FN) (UIR 32 ℃ 0.986±0.074比UIR 22 ℃ 0.715±0.009， t＝1.897， P<0.05)，胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ) (UIR 32 ℃ 0.694±0.054比UIR 22 ℃ 0.533±0.047， t＝2.253， P<0.05)，α平滑肌肌动蛋白(SMAα) (UIR 32 ℃ 1.294±0.096比UIR 22 ℃ 0.971±0.088， t＝2.487， P<0.05)等纤维化相关蛋白水平均高于UIR 22 ℃。 结论:热平衡温度加重小鼠单侧肾脏缺血再灌注后急性肾损伤发展进程，其机制可能通过加重炎症和纤维化。

目的:探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)合并非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)患者显著肝纤维化的影响因素。方法:回顾性研究2014年8月至2017年9月于天津市第二人民医院接受肝组织病理检查且资料齐全的273例CHB合并NAFLD患者，收集其人口学信息、实验室检查和肝组织病理检查结果。根据肝组织病理检查结果分为无显著肝纤维化组(Metavir分期

目的:评价靶向前列腺特异膜抗原(PSMA)的新型分子探针 68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT显像在前列腺癌初诊患者中的临床应用价值。 方法:前瞻性纳入2022年3月至2023年1月在江南大学附属医院接受 68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT显像的疑诊前列腺癌患者63例[年龄(68.7±8.7)岁]，以患者为中心评价 68Ga-PSMA-NYM032的诊断效能，并采用视觉分析、勾画ROI行半定量分析得到SUV max，利用ROC曲线获得SUV max诊断阈值。采用Spearman秩相关分析原发灶SUV max与总前列腺特异抗原(tPSA)之间、原发灶SUV max与Gleason评分(GS)之间的相关性。根据D′Amico前列腺癌危险度评估标准对患者进行分层[前列腺特异膜抗原(PSA)>20 μg/L与≤20 μg/L；GS>7分与≤7分]，用Fisher确切概率法分析 68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT显像对不同分层的前列腺癌患者转移灶的检出率，并用Mann-Whitney U检验分析不同分层患者转移灶SUV max的差异。 结果:68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT显像检查准确性为92.06%(58/63)，灵敏度为96.55%(28/29)，特异性为88.24%(30/34)，阳性预测值为87.50%(28/32)，阴性预测值为96.77%(30/31)，SUV max的最佳诊断阈值为6.9。 68Ga-PSMA-NYM032在前列腺癌原发灶中呈不同程度的高摄取，SUV max与tPSA水平、GS均呈正相关( rs值：0.657、0.592， P值：<0.001、0.001)。分层分析结果显示，仅GS>7分与≤7分组的 68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT对骨转移的检出率差异有统计学意义(9/17与1/12; P＝0.019)，而对PSA水平分层中的骨转移灶、GS或PSA分层中的淋巴结转移灶的检出率差异均无统计学意义(均 P>0.05)。另外，GS或PSA分层的前列腺癌患者转移灶的SUV max差异均不具有统计学意义( z值：－1.57~－0.50，均 P>0.05)。 结论:68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT显像对前列腺癌具有良好的诊断效能，可为前列腺癌精准化诊疗提供新的策略；GS分层会影响 68Ga-PSMA-NYM032 PET/CT对于骨转移的检出率。

目的:观察小干扰RNA(siRNA)沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:体外培养人肾癌细胞786-O和OS-RC-2(购自中国科学院上海细胞库)；应用siRNA转染下调SPAG9在786-O和OS-RC-2的表达；分组采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分析转染后SPAG9在786-O和OS-RC-2中mRNA及蛋白的表达水平；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染24、48、72、96 h后786-O及OS-RC-2的增殖活性；Transwell法检测转染后786-O、OS-RC-2的迁移与侵袭能力；Western blot分析转染后786-O、OS-RC-2中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的蛋白表达量；利用小管形成实验观察SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力的变化。采用 t检验。 结果:(1)RT-PCR及Western蛋白印迹结果提示siRNA能够有效沉默786-O及OS-RC-2中SPAG9 mRNA和蛋白的表达。si-Ctrl组表达量为参照和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组mRNA及蛋白的表达量为(0.41±0.02、0.12±0.03， t＝14.420， P<0.01)、(0.64±0.02、0.13±0.01， t＝36.690， P<0.01)；(1.36±0.13、0.83±0.04， t＝6.816， P<0.05)、(0.93±0.01、0.63±0.04， t＝12.410， P<0.05)。(2)SPAG9基因沉默后对786-O以及OS-RC-2增殖能力无明显影响，差异无统计学意义( t＝3.182、6.674， P>0.05)。(3)SPAG9敲低后的786-O以及OS-RC-2迁移、侵袭能力显著降低，si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组迁移细胞数目为(105.32±10.13)、(53.34±5.17)个( t＝9.232， P<0.05)、(132.00±11.23)、(65.45±7.23)个( t＝11.161， P<0.05)；侵袭细胞数目为(88.33±16.56)、(32.08±6.79)个( t＝6.093， P<0.05)、(90.67±13.01)、(28.67±4.02)个( t＝5.924， P<0.05)。(4)SPAG9基因沉默后，786-O血管形成能力明显降低。si-Ctrl组、786-Osi-SPAG9组中平均管样结构数为12.56±2.40、3.05±0.86( t＝2.254， P<0.05)。(5)Western blot显示转染后的786-O和OS-RC-2细胞中，MMP-2的蛋白表达量显著降低。si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组中MMP-2的相对表达量为0.37±0.02、0.24±0.01( t＝8.712， P<0.001)、0.26±0.01、0.21±0.02( t＝4.558， P<0.05)；而TIMP-2的表达量显著升高，其相对表达量为0.52±0.03、0.59±0.03( t＝2.720， P>0.05)、0.52±0.01、0.54±0.01( t＝2.102， P>0.05)。 结论:SPAG9基因具有促进肾癌细胞迁移、侵袭及血管形成的能力，其机制可能与MMP-2的激活有关。