目的:探讨紫花前胡素(DE)抑制髓核细胞凋亡的作用及其机制.方法:体外培养大鼠原代髓核细胞,使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)构建椎间盘退变(IDD)模型.采用CCK-8法检测不同浓度DE对IDD模型髓核细胞活力的影响,并确定DE的最佳实验浓度进行后续实验.采用TUNEL染色、流式细胞术和免疫印迹法检测DE对髓核细胞凋亡的影响.采用转录组测序技术(RNA-seq)检测并使用Limma包分析模型组与DE处理组基因表达差异,通过GSEA分析信号通路的变化并进行验证.结果:DE可提高IDD模型髓核细胞的活力,抑制髓核细胞凋亡(均P<0.05).RNA-seq结果提示DE可激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路,进一步研究证实DE通过上调PPARα表达而增加髓核细胞活力、减少髓核细胞凋亡(均P<0.05).结论:DE通过激活PPAR信号通路抑制IDD模型髓核细胞凋亡.

目的 研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制.方法 先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10、20、30、40、50) μg/mL顺铂处理24h对细胞增殖的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20 μg/mL顺铂联合(10、50、100) μmol/L紫花前胡素刺激NRK-52E细胞,CCK-8法检测对细胞活力的影响.细胞分为正常对照组、20 μg/mL顺铂刺激组、(10、50、100)μmol/L紫花前胡素处理组.倒置相差显微镜观察细胞形态改变,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡水平,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot法检测细胞凋亡标志蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)的蛋白水平.结果 与正常对照组相比,顺铂能显著抑制细胞活性,其半数抑制浓度(IC50)约为20 μg/mL;与模型组比较,紫花前胡素预处理后,细胞内ROS水平显著降低,c-caspase-3、c-PARP蛋白水平降低,细胞凋亡减少.结论 紫花前胡素能降低NRK-52E细胞ROS水平并抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡.

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)参与紫花前胡素(Decursin,Dec)抑制食管鳞癌细胞增殖的潜在机制.方法 Dec(20、40、80 μmmol/L)处理EC109细胞48 h后,MTT法检测细胞活性;TUNEL标染凋亡细胞;荧光法检测线粒体氧化应激水平;免疫印迹法检测JAK2/STAT3通路和凋亡相关蛋白含量.此外,联合应用特异性阻断JAK2/STAT3(AG490)后,从在体和离体水平观察Dec对EC109的抑制能力.结果 相对于对照组,不同浓度的Dec显著下调p-JAK2[至(55.89±6.04)％]和p-STAT3[至(45.27±8.65)％]表达,抑制EC109细胞活性(至0.43±0.078),增加凋亡率[至(35.31±8.41)％],降低MMP水平[至(37.23±6.89)％],提高活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量至(231.81 ±19.63)％,减弱谷胱甘肽(glutathione,GSH)活性至(46.78±6.91)％,(P＜0.05),且呈“剂量依赖性”;但未对正常食管上皮HET-1 A细胞活性产生明显影响(P＞0.05).同时,Dec下调Bcl2,上调Bax,并增加Caspase-3的裂解(P＜0.05).离体和在体水平联合应用AG490均增强Dec抗EC109细胞的能力(P＜0.05).结论Dec通过抑制JAK2/STAT3通路,激活线粒体氧化应激介导的凋亡,从而发挥抗食管鳞癌的作用.

目的 研究白花前胡化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、制备HPLC等多种色谱方法,根据波谱数据进行结构鉴定.结果 从白花前胡中共分离5个化合物,分别是异紫花前胡内酯(Nodakene-tin)、噢洛内酯(Oroselol)、紫花前胡素D、Pd-C-Ⅱ、Marmesin-11-O-β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopy-ranoside.结论 所有化合物均为首次从白花前胡中分离得到.

目的:分析防风中香豆素类化学成分,为全面解析防风药材的药效物质基础提供参考.方法:采用超高效液相色谱仪联用四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法.色谱条件:色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18,流动相为0.1％甲酸水-0.1％甲酸乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为3μL;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI)在正、负离子模式下进行检测,离子喷雾电压ESI+/ESI-为5500 V/-4500 V,去簇电压为80～-80 V,辅助加热气压力为55.00 psi,雾化气压力为-55 psi,气帘气压力为-35.00 psi,去溶剂温度为550℃,碰撞活化扫描能量为15 eV;碰撞电压为35 psi.通过与相关文献数据及标准品图谱对照,并结合UPLC-Q-TOF-MS提供的化合物准确相对分子质量进行成分分析及鉴定.结果:在ESI+模式下共解析出了135个化学成分,在ESI-模式下共解析出了105个化学成分.并鉴定出了在ESI+模式下的异欧芹素乙、伞形花内酯、东莨菪素、花椒毒素、补骨脂素、Ostenol、秦皮啶、异欧前胡素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素、珊瑚菜素、紫花前胡素等11个香豆素类化学成分.结论:该方法准确、快速,可用于防风中香豆素类化学成分的分析.

目的 研究羌活Notopterygium incisum中的香豆素类化学成分及其抗氧化活性.方法 采用重结晶、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备HPLC等多种分离手段进行分离纯化,通过现代波谱学方法鉴定结构,并采用DPPH法和ABTS法对分离得到的化合物进行抗氧化活性测试.结果 从羌活70％乙醇提取物中的二氯甲烷萃取层分离得到10个化合物,分别鉴定为佛手酚(1)、中甸前胡素(2)、镰叶芹二醇(3)、苯乙基阿魏酸酯(4)、丝立尼亭(5)、拱当归素(6)、羌活酚(7)、紫花前胡苷元(8)、(+)-cis-khellactone (9)、水合氧化前胡素(10),并经2种不同的方法测试了这类化合物的抗氧化活性.结论 化合物2、6为首次从该植物中分离得到;经DPPH法和ABTS法测试发现化合物1和7具有较强的抗氧化能力:构效关系分析发现5位上具有-OH,多烯烃结构的呋喃环香豆素具有比其他香豆素类化合物更强的抗氧化活性.

目的 探讨紫花前胡素通过Nox1/Akt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖及侵袭的作用机制.方法 SCC-25组(A组)及紫花前胡素低、中、高剂量组(B1组、B2组、B3组)均取10 mL SCC-25细胞(密度为5×106/mL),置有10％胎牛血清的DMEM培养基中,分别加入紫花前胡素0,20.0,40.0,80.0μg/mL,置CO2培养箱(37℃、5％CO2、2％O2、93％N2)培养72 h.采用四氮唑盐(MTT)比色法、结晶紫染色、MilliCell室、流式细胞仪、逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法、酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞增殖及凋亡水平、单克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA及P-Akt mRNA表达水平,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平.结果 B1组、B2组、B3组吸光度(OD)值、存活率水平、克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA水平、P-Akt mRNA水平、MDA水平明显低于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关;B1组、B2组、B3组细胞凋亡率水平、SOD及GSH-Px水平明显高于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关.结论 紫花前胡素能抑制口腔鳞癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡,其机制与紫花前胡素抑制Nox1活性降低Akt的磷酸化水平,进而降低其氧化应激水平有关.

目的:探讨紫花前胡素对百草枯中毒大鼠急性肾损伤的保护作用及肾组织HSF1表达的影响.方法:Wistar大鼠分成5组:对照组、模型组、地塞米松组(20 mg/kg)、紫花前胡素低剂量组(40 mg/kg)、紫花前胡素高剂量组(80 mg/kg),模型组、地塞米松组、紫花前胡素低、高剂量组建立百草枯中毒大鼠急性肾损伤模型,6 h后地塞米松组、紫花前胡素低剂量组、紫花前胡素高剂量组立即接受相应药物灌胃;对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,试验周期为7d.试验结束后,测定肾/体比值、24 h尿蛋白、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,观察大鼠肾组织病理学改变,RT-PCR法、Western-blot法、Elisa法测定肾脏中HSF1基因和蛋白水平及IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平.结果:与对照组比较,模型组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平升高(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05).与模型组比较,地塞米松组、紫花前胡素低剂量组、紫花前胡素高剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平降低(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05).与地塞米松组比较,紫花前胡素低剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平升高(P<0.05),HSF1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);紫花前胡素高剂量组肾/体比值、24 h尿蛋白、Scr、BUN、HSF1 mRNA和蛋白、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).对照组肾泡组织结构正常;模型组肾组织出现肾小球破坏,炎性细胞浸润及空泡变性,肾间质明显充血水肿,伴胶原蛋白沉淀;地塞米松组、紫花前胡素高剂量组肾损伤明显减轻,管腔呈现轻度狭窄,炎性细胞浸润明显减少;紫花前胡素低剂量组肾损伤较模型组减轻.结论:紫花前胡素对百草枯中毒大鼠急性肾损伤具有保护作用,可减轻大鼠急性肾损伤炎症反应;其机制与紫花前胡素能促进百草枯中毒大鼠急性肾损伤肾脏HSF1 mRNA和蛋白高表达,进而抑制肾炎症反应有关.

目的 建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中紫花前胡素的血药浓度,并用于口服和静脉注射后紫花前胡素的药动学特征研究.方法 大鼠血浆样本采用乙腈沉淀法去除蛋白.使用地西泮作为内标,UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)为分离柱,以乙腈-0.1％甲酸为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.4mL?min-1,分析时间为4.0min.用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,多反应监测方式进行定量分析,紫花前胡素m/z329.0→229.0和内标m/z285.1→193.3.结果 紫花前胡素在1～60ng?mL-1内线性关系良好,定量限为1ng?mL-1.日内、日间精密度RSD均＜14％,准确度范围在88.5％～107.5％,回收率＞93.3％,基质效应在89.3％～93.5％.结论 本方法具备灵敏、快速、选择性好的特点,可应用于紫花前胡素大鼠药动学研究.

目的:探讨紫花前胡素对根尖周炎的影响及机制.方法:构建大鼠牙齿根尖周炎用药模型,分为正常对照组、模型观察组和加药处理组,用药处理的大鼠于第1周开始每天腹腔注射紫花前胡素溶液20 mg/kg或等量生理盐水,至第3周末处死.X线及HE染色观察病灶变化;免疫组化检测OPN表达情况.培养并用内毒素及紫花前胡素处理小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测IL-6的表达,Western blot检测OPN的变化.结果:生理盐水处理组的大鼠根尖病灶面积明显大于紫花前胡素处理组,且紫花前胡素组大鼠组织中的OPN的表达降低.经内毒素处理的RAW264.7细胞增殖水平及IL-6和OPN的表达水平升高,而紫花前胡素抑制细胞增殖能力以及IL-6和OPN的表达.结论:紫花前胡素可以抑制OPN的表达,干预根尖周炎的炎症反应.