目的:构建患者来源腮腺多形性腺瘤（PA）类器官模型，并对其组织学、相关标志物和功能进行初步表征。方法:收集大连大学附属中山医院口腔颌面外科术中取材新鲜肿瘤组织标本，采用头颈部肿瘤类器官培养体系进行体外培养，构建腮腺PA类器官。观察PA类器官的体外生长情况并进行光镜拍摄。对培养成功的类器官进行传代和冻存，并对冻存的PA类器官进行复苏再培养，观测其活性和PA类器官再形成能力。对比患者来源组织，对PA类器官进行组织学表征，相关标志和功能蛋白进行表征与检测，评价PA类器官对来源组织的复现性。结果:构建的腮腺PA类器官形成紧实致密球状结构，HE染色提示类器官与其来源组织形态相似，免疫组化可见类器官及其来源肿瘤组织钙调蛋白、细胞角蛋白7、上皮膜抗原胞质阳性，提示类器官与其来源组织的病理学特征一致；PA类器官过碘酸希夫（PAS）染色及淀粉酶消化后PAS染色呈阳性，阳性着色位于类器官球体内部及外周，提示PA类器官具有类似于腮腺的分泌功能。结论:成功构建患者来源PA类器官，该模型在组织形态和标志物上可高度复现来源组织情况，并具有黏液分泌的生物学功能，是研究腮腺肿物发生发展的良好体外模型。

目的:构建乳腺癌类器官培养体系并对其进行组织学表征与初步放射生物学特征研究。方法:体外培养不同分子分型乳腺癌细胞系和肿瘤组织细胞形成乳腺癌类器官，对其进行组织结构表征并利用Ki-67、ER、PR、Her2指标进行免疫组化染色；对三阴性乳腺癌患者组织及乳腺癌细胞系形成的类器官进行4、8 Gy照射处理，观测照射后0、24、48、96 h的乳腺癌类器官个数以及直径变化来评估放射对类器官的杀伤情况。结果:乳腺癌细胞系和患者来源组织在6 d左右形成类器官结构；HE染色显示微结构，标志物表达具有空间异质性，肿瘤来源类器官与原组织的标志物表达具有相似性；照射处理MCF-7乳腺癌类器官后，生长停滞，部分形成的类器官崩解消失，48~96 h，逐渐恢复增殖趋势；MDA-MB-231乳腺癌类器官呈现辐射耐受和生长停滞，但结构没有明显改变，96 h仍未观察到恢复趋势；选取的三阴性患者组织来源的类器官也呈现辐射耐受，照射后类器官仍持续生长且结构没有明显改变，但生长趋势明显小于未照射组。结论:不同来源与不同分子分型的乳腺癌细胞经体外培养形成的乳腺癌类器官具有微结构与异质性，可以反映来源组织标志物表达情况并展现不同的放射抵抗能力，三阴性乳腺癌来源的类器官更加耐照射。

目的:探讨SD鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exos)修复骺板缺损的相关机制。方法:通过超离心提取鼠BMSCs来源的Exos，制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)负载的Exos(PLGA-Exos)支架，扫描电镜对支架进行表征。提取鼠软骨细胞，探究PLGA-Exos/RAW264.7细胞/软骨细胞共培养体系中巨噬细胞及软骨细胞相关基因的表达。将24只SD大鼠随机均分为A、B、C 3组，构建胫骨近端骺板缺损模型，将PLGA负载的BMSCs-Exos缓释棒(A组)及无Exos负载的PLGA棒(B组)分别填塞于骺板缺损区，C组为对照组(无填塞)。术后6周获取鼠胫骨标本，通过影像学X线分析、苏木精-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及巨噬细胞表型蛋白[M1型：诱导型一氧化氮合酶(iNOS)；M2型：Arg-1]染色，评估骺板缺损的修复效果。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:PLGAs支架为三维多孔结构，孔隙分布均匀，具有较高的连通性。Exos被成功加载至PLGA中。PCR结果发现，在炎症微环境中，与对照组比较，BMSCs-Exos调控巨噬细胞高表达M2表型蛋白Arg-1(7.12±1.01比1.00±0.03， t＝10.47， P<0.01)，且促进软骨细胞COL-2及Sox9基因mRNA表达(8.25±0.74比1.00±0.12， t＝16.84， P<0.01；4.64±0.16比1.00±0.01， t＝38.64， P<0.01)。术后6周胫骨标本影像学及组织学分析显示，A组骺板缺损区可见结构致密、与正常骺板结构及功能相似新生透明软骨组织，B组骺板缺损区新生组织由大量的纤维组织及少量的透明软骨组成，C组骺板缺损区骨桥形成。骺板损伤区巨噬细胞相关的表型蛋白免疫组织化学染色显示，A组M2型巨噬细胞表型蛋白Arg-1染色呈阳性显色反应，M1型巨噬细胞表型蛋白iNOS染色为阴性；B组少量细胞质基质被Arg-1抗体染为弱阳性，iNOS染色为阴性；C组Arg-1抗体染色为阴性，而iNOS染色呈阳性反应。 结论:在炎症微环境中，BMSCs-Exos调控巨噬细胞向M2型编程，促进骺板缺损修复。

目的:探讨电子束熔融(EBM)制备多孔钛合金融合器的力学性能、生物相容性及椎间融合效果。方法:通过计算机设计和EBM技术制备多孔钛合金(Ti-6Al-4V)融合器，通过电子显微镜观察其表征和微观结构，通过体外力学试验评估其弹性模型和抗压强度，通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法评估生物相容性。选取12只雄性成年小尾寒羊，建立小尾寒羊颈椎椎间融合模型，按照随机数字表法分为两组，每组6只。实验组置入3D打印椎间融合器，对照组置入聚醚醚酮(PEEK)融合器(中空处含有碎骨粒)。术后6个月行X线片检查，观察融合器是否有移位、松动或下沉；Micro-CT观察椎间隙骨小梁生长情况；组织学观察微观结构下椎间融合情况，分析两组融合器内的矿化骨百分比(MBF)和材料-骨结合百分比(BA)。结果:多孔钛合金融合器是一个中间为八面体金属小梁、外围为金属框的结构，金属小梁的直径为(413±78)μm，孔径为(597±46)μm，孔隙率为(54.8±5.8)%；弹性模量为(19.6±0.8)GPa，压缩强度为(37.6±2.3)GPa，刚度为(17 633±882)N/mm；多孔钛合金融合器具有良好的生物相容性。两组X线片均未见融合器出现移位和松动。两组Micro-CT检查可见贯通整个椎间隙的骨小梁分布，实现了骨性融合；实验组新生骨组织对金属小梁形成了结合紧密，对照组新生骨质和PEEK融合器之间仍可见到空隙。组织学显示实验组椎间隙MBF为(43.7±10.6)%，与对照组[(46.5±11.4)%]差异无统计学意义( P>0.05)，而对照组骨小梁和PEEK融合器交界处可见较多的纤维组织包裹，骨组织与PEEK融合器未形成紧密融合；实验组BA为(53.7±12.8)%，对照组为(7.5±2.8)%( P<0.05)。 结论:EBM制备多孔钛合金融合器具有合适的力学性能和孔隙率、良好的生物相容性和椎间融合效果，具有临床应用前景。

目的:探讨电纺明胶聚己内酯(GT/PCL)纳米纤维气凝胶(NFA)结合软骨细胞外基质(ECM)对兔软骨损伤的修复作用。方法:静电纺丝法制备GT/PCL电纺膜，高速研磨后制成短纤维溶液，取新鲜牛关节软骨制备ECM，将短纤维溶液与ECM溶液(1 ∶10)混匀后冻干，制备GT/PCL/ECM(NFA)三维支架。采用扫描电镜、傅立叶红外(FTIR)光谱仪对GT/PCL、ECM、GT/PCL/ECM支架的组成成分、微观结构、溶胀率、孔隙率、抗压强度及降解率进行表征，将支架与软骨细胞共培养进行生物相容性检测。选择15只雄性新西兰大白兔，按随机数字表法分为空白对照组(A组，5只)和ECM组(B组，5只)和复合支架(GT/PCL/ECM)组(C组，5只)，建立软骨损伤模型后B、C组植入支架材料。术后3周时对三组动物采用半定量整体MRI成像评分系统(WORMS)评分评估膝关节软骨修复情况；处死动物后对各组膝关节采用国际软骨修复协会组织学评分标准(ICRS)行大体评分，HE染色及番红O-固绿染色行ICRS组织学评分。结果:三种支架扫描电镜下均呈现多孔三维结构，FIRT光谱显示GT、PCL已成功引入，电纺GT/PCL NAF的结构松散无法进行材料学表征。GT/PCL/ECM支架的溶胀率为(1 092.0±32.2)%，高于ECM支架[(933.6±16.3)%]( P<0.01)；GT/PCL/ECM支架孔隙率为(92.3±2.9)%，高于ECM支架[(85.9±2.2)%]( P<0.05)；ECM支架抗压强度[(2.7±0.1)kPa ]与GT/PCL/ECM支架抗压强度[(2.4±0.1)kPa]差异无统计学意义( P>0.05)；ECM支架降解率高于GT/PCL/ECM支架，但差异无统计学意义( P>0.05)。GT/PCL/ECM支架细胞毒性评级为Ⅰ级，生物相容性较好。3周时C组WORMS评分为(49.0±11.4)分，较B组[(40.0±6.7)分] 、A组[(24.0±6.5)分]明显升高( P<0.05或0.01)；ICRS大体评分C组为(7.4±1.1)分，较B组[(4.6±1.1)分]、A组[(3.0±1.2)分]明显升高( P<0.01)；ICRS组织学评分C组、B组分别为(6.8±0.8)分、(4.2±0.8)分，较A组[(2.8±0.8)分]均明显升高( P<0.05或0.01)。 结论:GT/PCL/ECM(NFA)支架具有与天然软骨相似的组织结构，并在物理特性和生物相容性方面优于传统ECM支架，为软骨细胞的黏附和生长提供了稳定的环境，促进了胶原再生，从而加速软骨损伤的修复。

目的:使用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(RGD)修饰骨仿生支架并探究其应用于大鼠股骨缺损区的成骨性能.方法:通过三维(3D)打印技术制备聚乳酸-羟基磷灰石支架(PLA-HA),在其表面修饰甲基丙烯酰化明胶(GelMA)和RGD构建复合水凝胶支架PLA-HA/GelMA/RGD(PHD),扫描电镜(SEM)表征支架表面形貌,CCK-8实验评估骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖能力.将18只SD大鼠随机均分为3组(n=6)制备股骨缺损模型,分别植入PLA-HA/GelMA(PHG)、PHD支架,空白对照组不植入.于术后4周拍摄Micro-CT测算骨缺损面积和新生骨指标,并对缺损区的股骨样本进行HE染色和Masson三色染色观察组织学形态.结果:SEM观察到支架和水凝胶孔径明显,同时水凝胶稳健的连接到支架表面;CCK-8结果显示与PHG组相比,PHD组显示细胞增殖活性更佳.术后4周,Micro-CT三维重建图像显示空白组和PHG组新骨形成较少,PHD组骨缺损内部见大量新骨形成,同时定量分析发现该组骨体积分数、骨小梁厚度均显著大于空白组和PHG组.组织学染色结果显示PHD组形成连续且致密的骨组织.结论:负载RGD的PLA-HA骨仿生支架在体外具有促进成骨细胞增殖的能力,同时在体内诱导大鼠股骨缺损区新骨形成,成功地实现了早期骨缺损修复.

目的:观察纯钛植入体经喷砂酸蚀(SLA)联合等离子喷涂钽涂层处理后在大鼠体内的骨结合及新骨形成情况.方法:纯钛样品抛光清洗后,经喷砂、酸蚀处理,以等离子喷涂技术制备钽涂层.以喷砂酸蚀钛(SLA组)为对照组,钽涂层钛(SLA-Ta组)为实验组.利用扫描电镜、能谱分析仪、接触角测量仪和划痕测试仪对两组材料表面进行表征分析.将两组植入体随机植入大鼠的双侧股骨髁部,术后对大鼠进行双荧光标记.18只大鼠随机分别于术后4、12周处理死(n=9),通过Micro-CT扫描、荧光显微镜观察和组织学染色相结合评价植入体周围新骨形成和骨结合状况.结果:等离子喷涂成功在SLA钛表面制备了微纳米多级结构的钽涂层.体内实验显示,术后4、12周,SLA-Ta组植入体周围新生骨量、骨结合率均明显高于SLA组.结论:SLA联合等离子喷涂钽形成的微纳米多级结构可促进新骨形成,加速其沉积矿化,进而提高植入体的骨结合能力.

目的 评估DNV-1929在犬肺中的强化效应和可操作性,通过观察其在手术切除过程中的表征为其临床应用提供科学依据.方法 15只10～15个月龄的比格犬,随机分组,植入DNV-1929和阴性对照材料.用特定的手术技术将材料植入犬的左肺前叶后部、后叶前部和后叶后部共3个部位,通过气道压力测试评估其耐压性能,并评估植入材料的操作性能.在植入后的第2周和第4周,对犬左肺3个植入材料部位进行宏观肉眼观察和病理检查,比较DNV-1929与阴性对照材料的组织反应.此外,观察所有实验动物临床症状、进食量和体质量变化以评估材料植入的安全性.结果 在气道压力水平高达35 hPa时,DNV-1929和阴性对照材料在植入部位均无气体泄漏,表现出相似的压力抗性.在手术过程中,DNV-1929显示出与阴性对照材料相似的可操作性,未观察到明显的异常情况.植入2周和4周后通过肉眼病理观察可见,两种材料均在植入部位周围形成包囊,并与胸腔器官发生不同程度的粘连,但差异无统计学意义(P＞0.05).植入DNV-1929组在2周时有较多的残留植入物,而植入4周时几乎消失,而阴性对照组还存在少量植入材料,但两组残留材料差异无统计学意义(P＞0.05).组织学评估结果显示,植入DNV-1929于2周时,炎症情况小计评分略高于阴性对照组(P=0.016),而植入4周的组间差异无统计学意义(P＞0.05).研究期间实验犬未出现临床异常或进食量减少,DNV-1929和阴性对照物当天无死亡.实验犬在研究周期内体质量无明显变化(P＞0.05).结论 DNV-1929在犬肺中表现出强化效应和良好的可操作性,且对周围组织无毒性影响.这为DNV-1929在肺部手术治疗中的应用提供了初步证据,为其在临床上的应用奠定了科学基础和其潜在价值.

目的:探讨氧化石墨烯-壳聚糖改性的钛酸钡纳米颗粒(BCG-NPs)与聚偏氟乙烯-三氟乙烯(P(VDF-TrFE))复合压电材料对人脐带间充质干细胞(hWJ-MSC)成骨分化的影响.方法:采用滴涂法在钛表面制备BCG-NPs/P(VDF-TrFE)涂层(BCGP-Ti),对其表面形貌、物相组成、亲水性和压电性能进行表征.通过模拟体液浸泡实验检测样本体外矿化的能力.将hWJ-MSC接种在样本表面,采用CCK-8检测细胞活力,细胞骨架染色观察hWJ-MSC铺展情况,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别评估ALP活性和矿化水平,实时荧光定量PCR和免疫荧光染色检测成骨分化相关基因和蛋白表达.将Ti棒与BCGP-Ti棒分别植入SD大鼠股骨,Micro-CT和组织学染色观察骨整合效果.结果:扫描电镜和X射线衍射分析证实BCGP-Ti涂层成功构建.极化后BCGP-Ti具有良好的压电响应,其亲水性优于Ti和未极化的BCGP-Ti(P＜0.01),体外矿化的能力高于Ti和未极化的BCGP-Ti(P＜0.01).hWJ-MSC在极化后BCGP-Ti表面铺展的面积较Ti组增加(P＜0.05).与Ti相比,极化后BCGP-Ti促进hWJ-MSC矿化水平、ALP以及Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、Runt相关转录因子(RUNX2)、骨钙素(OCN)等成骨分化相关基因和蛋白的表达(P＜0.05),在体内实现更好的骨整合.结论:在钛基表面构建BCG-NPs/P(VDF-TrFE)涂层可诱导hWJ-MSC成骨分化促进骨整合.

目的:探究磷酸化聚酰胺-胺(P-PAMAM)树状大分子交联胶原蛋白支架在体内成骨效能.方法:通过傅里叶变换红外光谱(FTIR)对P-PAMAM进行表征,扫描电镜对胶原蛋白支架、聚酰胺-胺(PAMAM)复合胶原蛋白支架及P-PAMAM复合胶原蛋白支架进行形态表征.将 3 种复合支架植入SD大鼠颅骨骨缺损后,使用Micro-CT三维重建分析骨愈合过程中骨质、骨量的变化,采用HE染色及Masson染色对大鼠颅骨标本进行组织学分析.结果:FTIR显示PAMAM被成功磷酸化;扫描电镜显示,复合支架均具有良好的孔隙;体内成骨实验显示,与胶原蛋白支架和PAMAM复合胶原蛋白支架相比,P-PAMAM复合胶原蛋白支架具有更好的成骨诱导作用.结论:P-PAMAM树状大分子复合胶原蛋白支架在体内具有促进成骨作用.